1.一种用于检测pirna与mrna结合的可视化方法,其特征在于,包括:
(a)提供探针,所述探针为单链rna,所述探针包括pirna探针和mrna探针;
所述pirna探针的核苷酸序列为待检测的pirna的核苷酸序列;
所述mrna探针的核苷酸序列为所述待检测的pirna和mrna的预测的结合区域的核苷酸序列;
(b)配置反应体系,所述反应体系包括第一反应体系、第二反应体系和第三反应体系;
所述第一反应体系中探针为标记的所述pirna探针;
所述第二反应体系中探针为标记的所述mrna探针;
所述第三反应体系中探针为标记的所述pirna探针和标记的所述mrna探针;
(c)各反应体系进行结合反应,反应后各体系的反应产物经电泳后观察条带,若第三反应体系出现相比于第一反应体系和第二反应体系滞后的条带,则所述待检测的pirna与mrna结合。
2.根据权利要求1所述的用于检测pirna与mrna结合的可视化方法,其特征在于,所述探针还包括阴性对照探针,所述阴性对照探针与所述pirna探针和所述mrna探针均不结合;所述反应体系还包括第四反应体系;
所述第四反应体系中探针为标记的所述pirna探针、标记的所述mrna探针和未标记的阴性对照探针;未标记的阴性对照探针的摩尔浓度为标记的所述mrna探针的20~100倍;
若第四反应体系出现和第三反应体系相同的滞后的条带,则所述待检测的pirna与mrna结合;
优选地,未标记的阴性对照探针的摩尔浓度为标记的所述mrna探针的40~60倍,优选为50倍。
3.根据权利要求1所述的用于检测pirna与mrna结合的可视化方法,其特征在于,所述反应体系还包括第五反应体系,所述第五反应体系中探针为标记的所述pirna探针、标记的所述mrna探针和未标记的所述pirna探针,未标记的所述pirna探针的摩尔浓度为标记的所述mrna探针的20~100倍;
若第五反应体系无游离的标记的所述mrna探针条带,则所述待检测的pirna与mrna结合;
优选地,未标记的所述pirna探针的摩尔浓度为标记的所述mrna探针的40~60倍,优选为50倍。
4.根据权利要求1-3任一项所述的用于检测pirna与mrna结合的可视化方法,其特征在于,所述检测pirna与mrna结合包括检测has-pir-016659与hnf1a结合;和/或,检测has-pir-020391与znf10结合。
5.根据权利要求1-3任一项所述的用于检测pirna与mrna结合的可视化方法,其特征在于,当所述反应体系中同时含有标记的所述pirna探针和标记的所述mrna探针时,标记的所述pirna探针和标记的所述mrna探针的摩尔比为(0.8~1.2):(0.8~1.2),优选为1:1。
6.根据权利要求1-3任一项所述的用于检测pirna与mrna结合的可视化方法,其特征在于,所述标记包括荧光染料标记;
优选地,荧光染料的发射波长为650~850nm;
优选地,用于标记所述pirna探针的荧光染料和用于标记所述mrna探针的荧光染料发射波长不相同;
优选地,发射波长为650~850nm荧光染料包括irdye800、cy5、cy5.5、thiadicarbocyanine、irdye680lt、alexa
优选地,标记pirna探针的荧光染料包括irdye荧光染料,优选包括irdye800荧光染料;
优选地,标记mrna探针的荧光染料包括cy荧光染料,优选包括cy5.5荧光染料;
优选地,所述荧光染料标记于探针的5’端或3’端。
7.根据权利要求1-3任一项所述的用于检测pirna与mrna结合的可视化方法,其特征在于,所述反应体系包括depc-h2o、bindingbuffer和探针;
优选地,反应体系中带有标记的探针浓度为30~50nm,优选为40nm;
优选地,所述bindingbuffer包含如下组分:ph为7.2-7.4的hepesbuffer、甘油、kcl和mgcl2;
优选地,所述bindingbuffer中各组分在反应体系中的终浓度为:ph为7.2-7.4的hepesbuffer8~12mm、甘油4~6%(w/w)、kcl0.15~0.25m和mgcl20.5~0.15m;
优选地,所述bindingbuffer中各组分在反应体系中的终浓度为:ph为7.2-7.4的hepesbuffer10mm、甘油5%(w/w)、kcl0.2m和mgcl20.1m。
8.根据权利要求1-3任一项所述的用于检测pirna与mrna结合的可视化方法,其特征在于,先将探针使用depc-h2o稀释,再添加至反应体系中;
优选地,将探针使用depc-h2o稀释后,于94-96℃加热1.5-2.5min,随后放冰上冷却1.8-2.5min后添加于反应体系中;
优选地,所述结合反应的反应条件为24-26℃保温18-22min。
9.根据权利要求1-3任一项所述的用于检测pirna与mrna结合的可视化方法,其特征在于,所述电泳包括非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。
10.权利要求1-9任一项所述的用于检测pirna与mrna结合的可视化方法在研究pirna对基因调控作用中的应用。