一种提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法与流程

文档序号:23159878发布日期:2020-12-04 13:54阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:具体包括如下步骤:

(1)平板培养:三孢布拉氏霉菌(+)、(-)菌株孢子悬液分别涂布于pda平板培养基上,置于28℃恒温培养箱中培养3-5天,4℃保存,得到三孢布拉氏霉菌(+)、(-)菌株平板;

(2)种子培养:从三孢布拉氏霉菌菌株平板中各自用接种环挑取一环菌丝体,接种到有种子培养基的锥形瓶中,用棉塞封口后,于26-28℃,200-220rpm条件下避光震荡培养48h,得种子液;

(3)微生物发酵生产β-胡萝卜素:将培养好的三孢布拉氏霉菌(+)、(-)菌株种子液按照正菌1瓶、负菌4瓶的比例混合均匀,以10%体积的接种量接入到装有50ml发酵培养基的500ml锥形瓶中,于26-28℃,200-220rpm条件下避光振荡培养84小时;发酵24-42小时后将乙烯利溶液溶液加入到发酵培养基中,继续培养,得发酵培养液;

(4)β-胡萝卜素的提取:用去离子水清洗收获的菌体并用纱布过滤,将湿菌体置于真空干燥箱中,干燥处理24小时得到干菌体;干菌体破碎,用乙醇萃取,旋转蒸发仪上真空蒸馏乙醇,获得β-胡萝卜素的纯品。

2.根据权利要求1所述的提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:步骤(1)中pda平板培养基的制备方法如下:取去皮土豆20g,加入200ml去离子水煮沸并保持20min,冷却后用四层纱布过滤,取过滤后的清液加2g葡萄糖和2g琼脂,在高压蒸汽灭菌锅中115℃下灭菌30min,配制pda培养基。

3.根据权利要求1所述的提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:步骤(2)中种子培养基的制备方法如下:将40g玉米淀粉、20g葡萄糖、50g玉米浆加入到2升的烧杯中,用去离子水定容至1000ml,于95℃下糊化40min,冷却后加入1.5g磷酸二氢钾、0.1g七水硫酸镁,0.01g维生素b1,混匀后用3mol/l的氢氧化钠溶液调ph至6.5,分装于250ml锥形瓶中,在高压蒸汽灭菌锅中115℃下灭菌30min。

4.根据权利要求1所述的提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:步骤(3)中发酵培养基的制备方法如下:将30g葡萄糖、78g大豆饼粉、1.5g磷酸二氢钾、0.5g七水硫酸镁、1g二丁基羟基甲苯加入到2升的烧杯中,加入去离子水定容至1000ml,配制成发酵液,用3mol/l的氢氧化钠溶液调ph至7.5,分装于500ml锥形瓶中,于高压蒸汽灭菌锅中115℃下灭菌30min所得。

5.根据权利要求1所述的提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:步骤(3)中乙烯利溶液溶液的浓度为0.5%-2%。

6.根据权利要求1或5所述的提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:步骤(3)中乙烯利溶液溶液的加入量为1-4ml。

7.根据权利要求1所述的提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:步骤(3)中所述的三孢布拉氏霉菌(+)、(-)菌株种子液的比例1:4(v/v)。

8.根据权利要求1所述的提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:步骤(4)中所述的真空干燥箱中真空干燥的工艺条件为,温度为45℃、压力为0.08mpa。

9.根据权利要求1所述的提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:步骤(4)中乙醇为无水乙醇,萃取时萃取3次及以上。


技术总结
本发明属于微生物发酵技术领域,具体属于一种提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β‑胡萝卜素产量的方法。本发明在利用三孢布拉氏霉菌进行液体深层发酵时,添加一定浓度的乙烯利溶液,乙烯利缓慢释放出乙烯,乙烯在转录水平上对类胡萝卜素合成相关基因起到促进作用,从而促进了β‑胡萝卜素的大量积累,提高β‑胡萝卜素的发酵产量。本方法成本低廉、操作简便、效果明显,可以取代通过添加氧载体、表面活性剂、前体物质等各种发酵促进剂来提高β‑胡萝卜素的产量,避免了其它发酵促进剂价格太高和对菌种的毒害性,为工业化生产提供了良好的依据。本发明β‑胡萝卜素产量比空白对照组提高54%‑78%,同时发酵周期由原来的5天缩短为了3天,缩短了40%。

技术研发人员:师艳秋;常彦红;李明丽;袁其朋
受保护的技术使用者:济宁学院
技术研发日:2020.07.29
技术公布日:2020.12.04
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