1.一种提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:具体包括如下步骤:
(1)平板培养:三孢布拉氏霉菌(+)、(-)菌株孢子悬液分别涂布于pda平板培养基上,置于28℃恒温培养箱中培养3-5天,4℃保存,得到三孢布拉氏霉菌(+)、(-)菌株平板;
(2)种子培养:从三孢布拉氏霉菌菌株平板中各自用接种环挑取一环菌丝体,接种到有种子培养基的锥形瓶中,用棉塞封口后,于26-28℃,200-220rpm条件下避光震荡培养48h,得种子液;
(3)微生物发酵生产β-胡萝卜素:将培养好的三孢布拉氏霉菌(+)、(-)菌株种子液按照正菌1瓶、负菌4瓶的比例混合均匀,以10%体积的接种量接入到装有50ml发酵培养基的500ml锥形瓶中,于26-28℃,200-220rpm条件下避光振荡培养84小时;发酵24-42小时后将乙烯利溶液溶液加入到发酵培养基中,继续培养,得发酵培养液;
(4)β-胡萝卜素的提取:用去离子水清洗收获的菌体并用纱布过滤,将湿菌体置于真空干燥箱中,干燥处理24小时得到干菌体;干菌体破碎,用乙醇萃取,旋转蒸发仪上真空蒸馏乙醇,获得β-胡萝卜素的纯品。
2.根据权利要求1所述的提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:步骤(1)中pda平板培养基的制备方法如下:取去皮土豆20g,加入200ml去离子水煮沸并保持20min,冷却后用四层纱布过滤,取过滤后的清液加2g葡萄糖和2g琼脂,在高压蒸汽灭菌锅中115℃下灭菌30min,配制pda培养基。
3.根据权利要求1所述的提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:步骤(2)中种子培养基的制备方法如下:将40g玉米淀粉、20g葡萄糖、50g玉米浆加入到2升的烧杯中,用去离子水定容至1000ml,于95℃下糊化40min,冷却后加入1.5g磷酸二氢钾、0.1g七水硫酸镁,0.01g维生素b1,混匀后用3mol/l的氢氧化钠溶液调ph至6.5,分装于250ml锥形瓶中,在高压蒸汽灭菌锅中115℃下灭菌30min。
4.根据权利要求1所述的提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:步骤(3)中发酵培养基的制备方法如下:将30g葡萄糖、78g大豆饼粉、1.5g磷酸二氢钾、0.5g七水硫酸镁、1g二丁基羟基甲苯加入到2升的烧杯中,加入去离子水定容至1000ml,配制成发酵液,用3mol/l的氢氧化钠溶液调ph至7.5,分装于500ml锥形瓶中,于高压蒸汽灭菌锅中115℃下灭菌30min所得。
5.根据权利要求1所述的提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:步骤(3)中乙烯利溶液溶液的浓度为0.5%-2%。
6.根据权利要求1或5所述的提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:步骤(3)中乙烯利溶液溶液的加入量为1-4ml。
7.根据权利要求1所述的提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:步骤(3)中所述的三孢布拉氏霉菌(+)、(-)菌株种子液的比例1:4(v/v)。
8.根据权利要求1所述的提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:步骤(4)中所述的真空干燥箱中真空干燥的工艺条件为,温度为45℃、压力为0.08mpa。
9.根据权利要求1所述的提高三孢布拉氏霉菌发酵生产β-胡萝卜素产量的方法,其特征在于:步骤(4)中乙醇为无水乙醇,萃取时萃取3次及以上。