本发明涉及一类新的吡唑并嘧啶类大环衍生物、其制备方法以及其本身或含有此类衍生物的药物组合物作为治疗剂特别是作为原肌球蛋白相关激酶（trk）抑制剂的用途。
背景技术：
原肌球蛋白相关激酶（tropomyosin-receptorkinase，trk，也可以称为“原肌球蛋白受体激酶”）是一类神经生长因子受体，存在于多种组织中，在细胞的增值、分化、存活过程中起到重要的作用。trk属于受体酪氨酸激酶家族，主要包括trka、trkb和trkc，分别由ntrk1、ntrk2和ntrk3基因编码而成。
每个trk都有与其相对应的神经营养因子配体。trka的配体为ngf（nervegrowthfactor），trkb的配体包括bdgf（brain-derivedgrowthfactor）和nt-4/5(neurotrophin-4/5)，trkc的配体是nt-3。这些神经营养因子特异性地结合trks，引发受体的二聚化以及激酶特定酪氨酸残基的磷酸化，从而激活下游信号通路包括ras/mapk、plcγ/pkc和pi3k/akt，进而调控细胞的增殖、分化、代谢、凋亡等一系列生理过程。
trk信号通路通常情况下被精确调控，而当它因基因融合、蛋白质的过度表达或单核苷酸突变等因素被异常激活时，则会导致多种肿瘤的发生且不依赖于肿瘤的组织来源和类型。基因组学的迅猛发展让越来越多的ntrk融合基因被发现，例如etv6-ntrk3、mprip-ntrk1、cd74-ntrk1等。开发trk抑制剂可以治疗ntrk融合蛋白的各种肿瘤，例如肺癌、恶性血液病、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、脑胶质瘤、胰腺癌、肝胆管型肝癌、乳头状甲状腺癌、结肠癌、头颈部鳞状细胞癌、黑色素瘤等，具有巨大的潜力和广阔的市场前景。然而，在临床试验阶段已经发现有部分患者在持续给药时出现了耐药现象，并被证实是由ntrk突变引起，例如ntrk1的g595r或g667c突变。而新一代trk激酶抑制剂的研制有望解决这些问题。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明的目的在于开发结构类型新颖的具有更好成药性的新一代trk激酶抑制剂化合物。发现具有通式（i）所示结构的化合物或其非对映异构体及其药学上可接受的盐，作为新一代trk激酶抑制剂具有优异的效果和作用。
第一方面，本发明提供一种通式（i）所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体及其药学上可接受的盐：
其中：
x选自o、nra、或chrb，其中ra、rb分别独立地选自氢原子或c1~3烷基；
r1选自氢原子或c1~3烷基；
r2选自氢原子、卤素、c1~3烷基或c1~3烷氧基；
其中r1、r2可以与其所连的原子共同构成四至八元杂环基。
优选地，x选自o或nh；
r1选自氢原子或c1~3烷基；
r2选自氢原子或c1~3烷基；
其中r1、r2可以与其所连的原子共同构成五元或六元杂环基。
进一步优选地，x选自o；
r1选自氢原子、甲基或乙基；
r2选自氢原子、甲基或乙基；
其中r1、r2可以与其所连的原子共同构成四氢吡咯或哌啶。
更进一步优选地，所述化合物选自：
（r，23e，24e）-45-氟-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷；
（r，23e，24e）-45-氟-8-甲基-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑3（1,2）-吡咯烷基环辛烷；
（23e，24e，32r，7r）-45-氟-7-甲基-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷；
（23e，24e，32r，7s）-45-氟-7-甲基-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷；
（r，23e，24e）-45-氟-7-（3,5）吡咯-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷；
(r，23e，24e）-45-氟-7-（3,6）哌啶-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷。
第二方面，本发明提供一种药物组合物，包括通式（i）所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体及其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
第三方面，本发明提供通式（i）所示的化合物或其非对映异构体及其药学上可接受的盐或者上述药物组合物，在制备用于预防和/或治疗原肌球蛋白相关激酶介导的疾病的药物中的用途。
所述药物可为原肌球蛋白相关激酶抑制剂。又，所述药物可用于预防和/或治疗原肌球蛋白相关激酶基因扩增、过表达、突变、或融合导致的原肌球蛋白相关激酶功能异常的相关疾病。又，所述疾病包括但不限于癌症，例如肺癌、恶性血液病、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、脑胶质瘤、胰腺癌、肝胆管型肝癌、乳头状甲状腺癌、结肠癌、头颈部鳞状细胞癌、黑色素瘤。
具体实施方式
通过下述实施方式进一步说明本发明，应理解，下述实施方式仅用于说明本发明，而非限制本发明。
除非有相反陈述，下列用在说明书和权利要求中的术语具有下述含义。
“烷基”指饱和的脂族烃基团，包括1至10个碳原子的直链或支链基团。优选含有1至5个碳原子的烷基。更优选含有1至3个碳原子的烷基，例如甲基，乙基，正丙基，异丙基。
各种含碳氢结构部分的碳原子含量由该部分的标有最小和最大碳原子数目的前缀表示，即前缀ci~j表示该部分的碳原子数为整数“i”至整数“j”（包括i和j）。因此，例如，c1~3烷基是指1至3个碳原子的烷基（包括1和3）。
术语“羟基”指-oh基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
除非特别说明，本发明中，所有出现的化合物均意在包括所有可能的异构体，例如互变异构体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式。
术语“本发明化合物”指通式（i）所示的化合物。该术语还包括通式（i）化合物的各种晶型形式、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。
术语“药学上可接受的载体”表示能用于制备药物组合物的载体，它们一般是安全的、无毒性的，不是生物上或其他方面不期待的，且包括能被动物和人类药学上接受的载体。在说明书和权利要求书中使用的“药学上可接受的载体”包括一种或一种以上的这类载体。
术语“含有”、“包含”或“包括”表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”中。
术语“预防”例如是指在可能暴露或预先处置于疾病但尚未经历或显示疾病症状的哺乳动物中使疾病临床症状不发展。
术语“治疗”可指抑制疾病，例如阻止或降低疾病或其临床症状的发展，或者缓解疾病，例如使疾病或其临床症状退化。
通式（i）化合物
其中：
x选自o、nra、或chrb，其中ra、rb分别独立地选自氢原子或c1~3烷基；
r1选自氢原子或c1~3烷基；
r2选自氢原子、卤素、c1~3烷基或c1~3烷氧基；
其中r1、r2可以与其所连的原子共同构成四至八元杂环基。
本发明一些实施方式中，x选自o或nh。更优选实施方式中，x选自o。
本发明一些实施方式中，r1选自氢原子或c1~3烷基。更优选实施方式中，r1选自氢原子、甲基或乙基。
本发明一些实施方式中，r2选自氢原子或c1~3烷基。更优选实施方式中，r2选自氢原子、甲基或乙基。
本发明一些实施方式中，r1、r2可以与其所连的原子共同构成五元或六元杂环基。更优选实施方式中，r1、r2可以与其所连的原子共同构成四氢吡咯或哌啶。
本发明一些实施方式中，通式（i）化合物选自表1中所示的化合物。
表1
通式（i）化合物的制备方法具体详见实施例的记载。
通用合成路线1
通用合成路线2
上述合成路线中，r1选自氢原子或c1~3烷基。更优选实施方式中，r1选自氢原子、甲基或乙基。r2选自氢原子或c1~3烷基。更优选实施方式中，r2选自氢原子、甲基或乙基。r1、r2可以与其所连的原子共同构成五元或六元杂环基。更优选实施方式中，r1、r2可以与其所连的原子共同构成四氢吡咯或哌啶。
通式（i）化合物的应用
通式（i）化合物可作为原肌球蛋白相关激酶（trk）抑制剂。
通式（i）化合物可用于预防和/或治疗trk基因扩增、过表达、突变、或融合导致的trk功能异常的相关疾病。
通式（i）化合物可用于预防和/或治疗trk介导的疾病，包括但不限于癌症例如肺癌、恶性血液病、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、脑胶质瘤、胰腺癌、肝胆管型肝癌、乳头状甲状腺癌、结肠癌、头颈部鳞状细胞癌、黑色素瘤。
药物组合物
本发明的药物组合物包含有效量的通式（i）所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式、及其可药用的盐、及其药学上可接受的载体或赋形剂或稀释剂。
“有效量”意指本发明化合物：（i）治疗特定疾病、病症或障碍，（ii）减弱、改善或消除特定疾病、病症或障碍的一或多种症状，或（iii）预防或延迟本文所述特定疾病、病症或障碍的一或多种症状发作的量。
药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物（如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等）、明胶、滑石、固体润滑剂（如硬脂酸、硬脂酸镁）、硫酸钙、植物油（如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等）、多元醇（如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等）、乳化剂（如吐温®80，吐温®20）、润湿剂（如十二烷基硫酸钠）、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括但并不限于：口服、瘤内、直肠、肠胃外（静脉内、肌肉内或皮下）、和局部给药。
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
本发明的另一方面涉及一种抑制原肌球蛋白相关激酶（trk）的方法，该方法包括给予需要治疗的患者有效剂量的通式（i）所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、及其混合物形式、及其可药用的盐或其药物组合物。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
化合物的结构是通过核磁共振（nmr）或质谱（ms）来确定的，化合物的纯度是通过液相高压色谱仪（hplc）测定的。nmr的测定是用brukeravance-400核磁共振仪，溶剂为氘代二甲基亚砜（dmso-d6）或氘代甲醇（meoh-d4），内标为四甲基硅烷（tms），化学位移以ppm为单位。ms的测定使用安捷伦6120质谱仪。hplc使用安捷伦1200dad高压液相色谱仪测定。
在本发明未作特殊说明的情况下，洗脱剂梯度指的是洗脱剂的体积比。
实施例1
（r，23e，24e）-45-氟-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷
第一步4-氯-n-甲氧基-n-甲基丁酰胺
将4-氯丁酰氯（13g，0.0929mol）溶于二氯甲烷（100ml）中，0°c下加入n,o-二甲基羟胺盐酸盐（10g，0.102mol）和三乙胺（20.2g，0.200mol），加完后在室温下搅拌4小时。反应液用水淬灭，二氯甲烷萃取，有机相合并，于无水硫酸钠中干燥过滤，有机相减压浓缩，得到4-氯-n-甲氧基-n-甲基丁酰胺（10.4g，黄色油状液体），产率：89.0%。ms(esi)m/z=166.0[m+h]+。
第二步4-氯-1-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）丁-1-酮
将3-溴-5-氟-2-甲氧基吡啶(10g，48.6mmol)溶于四氢呋喃（100ml）中，-78°c在氮气氛围下滴加异丙基溴化镁的四氢呋喃溶液(58.4ml，58.4mmol，1m)，加完后缓慢升温至0°c搅拌1小时。再次冷却至-78°c，将4-氯-n-甲氧基-n-甲基丁酰胺（8.8g，53.4mmol）溶于四氢呋喃（20ml）缓慢滴加到反应液中，加完后缓慢升至室温并在室温下搅拌过夜。饱和氯化铵溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相合并，于无水硫酸钠中干燥过滤，有机相减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱层析法（洗脱剂梯度，石油醚：乙酸乙酯=10：1）纯化得到4-氯-1-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）丁-1-酮（4.23g，黄色油状液体），产率：37.8%。ms(esi)m/z=232.1[m+h]+。
第三步(r，z）-n-（4-氯-1-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）亚丁基）-2-甲基丙烷-2-亚磺酰
将4-氯-1-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）丁-1-酮（4.23g，18.3mmol），（r）-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺（2.21g，18.3mmol）溶于四氢呋喃（50ml）中，钛酸四乙酯（8.34g，36.6mmol）分批加入，反应液搅拌回流过夜。加入乙酸乙酯稀释，依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥过滤，减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱层析法（洗脱剂梯度，乙酸乙酯：石油醚=1：1）纯化得到（r，z）-n-（4-氯-1-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）亚丁基）-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺（3.1g，黄色油状液体），产率：50.1%。ms(esi)m/z=335.0[m+h]+。
第四步（r）-n-（（r）-4-氯-1-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）丁基）-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将（r）-n-（（r）-4-氯-1-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）丁基）-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺（3.1g，9.25mmol）溶于四氢呋喃（25ml）中，在-78°c氮气氛围下，滴加三乙基硼氢化锂（10.2ml,10.2mmol,1minthf），滴加完毕，反应液在-78°c搅拌1小时至反应完全。饱和氯化铵溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相合并，于无水硫酸钠中干燥过滤，有机相减压浓缩得到粗品（r）-n-（（r）-4-氯-1-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）丁基）-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺（2.78g，黄色油状液体），产率：88.9%。ms(esi)m/z=337.0[m+h]+。
第五步3-（（r）-1-（（r）-叔丁基亚硫酰基）吡咯烷-2-基）-5-氟-2-甲氧基吡啶
将（r）-n-（（r）-4-氯-1-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）丁基）-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺（2.78g，8.25mmol）溶于四氢呋喃（30ml）中，分批加入叔丁醇钾（1.39g，12.4mmol），反应液在室温下搅拌过夜。减压浓缩后，残余物用硅胶柱色谱层析法（洗脱剂梯度，乙酸乙酯：石油醚=2：1）纯化，得到3-（（r）-1-（（r）-叔丁基亚硫酰基）吡咯烷-2-基）-5-氟-2-甲氧基吡啶（2.14g，黄色油状液体），产率：86.1%。ms(esi)m/z=301.2[m+h]+。
第六步（r）-5-氟-2-甲氧基-3-（吡咯烷-2-基）吡啶
将3-（（r）-1-（（r）-叔丁基亚硫酰基）吡咯烷-2-基）-5-氟-2-甲氧基吡啶（2.14g，7.13mmol）溶于二氯甲烷（10ml）中，加入氯化氢的二氧六环溶液（10ml，4m），反应液在室温下搅拌2小时至反应完全。减压浓缩得到粗品（r）-5-氟-2-甲氧基-3-（吡咯烷-2-基）吡啶（1.4g，定量，黄色油状液体）。ms(esi)m/z=197.2[m+h]+。
第七步（r）-5-（2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶
将（r）-5-氟-2-甲氧基-3-（吡咯烷-2-基）吡啶（1.4g，7.13mmol）和5-氯-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶（2.01g，7.13mmol）溶于二氯甲烷（20ml）中，室温下加入三乙胺（2.16g，21.4mmol），反应液在室温下搅拌过夜。加水淬灭，二氯甲烷萃取，有机相合并，于无水硫酸钠中干燥过滤，有机相减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱层析法（洗脱剂梯度，乙酸乙酯：石油醚=1：2）纯化，得到（r）-5-（2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶（1.2g，黄色油状液体），产率：44.0%。ms(esi)m/z=440.2[m+h]+。
第八步（r）-5-（2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶
将（r）-5-（2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶（1.12g，2.5mmol），碳酸钠（795mg，7.5mmol）和（1h-咪唑-2-基）硼酸（425mg，3.8mmol）加入到二氧六环/水（25ml/5ml）的溶液中，然后加入pd(dppf)cl2（185mg，0.25mmol）。反应液氮气置换除氧后，氮气保护下加热至100℃反应过夜。反应完毕后，反应液冷却至室温，过滤。滤液用乙酸乙酯稀释（100ml）后，然后用饱和氯化钠水溶液（2×100ml）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到浅黄色固体。该固体通过柱层析分离（洗脱剂梯度：二氯甲烷：甲醇=10：1）得到（r）-5-（2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶（616mg，类白色固体），产率：65.1%。ms(esi)m/z=380.3[m+h]+。
第九步（r）-5-（2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（5-碘-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶
将（r）-5-（2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶（570mg，1.5mmol）溶解到二氯甲烷（30ml）溶液中，在0℃下分批加入n-碘代丁二酰亚胺（510mg，2.25mmol），并在该温度下搅拌混合物2小时。反应完成后，将反应混合物用亚硫酸钠饱和水溶液（2×50ml）洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到（r）-5-（2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（5-碘-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶（454mg，黄色固体），产率：60.1%。ms(esi)m/z=506.7[m+h]+。
第十步（r）-2-（（2-（5-（2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基）-1h-咪唑-5-基）氨基）乙烷-1-醇
将（r）-5-（2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（5-碘-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶（100mg，0.2mmol）溶于1,4-二氧六环（3.0ml）溶液中，依次加入乙醇胺（61mg，1.0mmol）、三（二亚苄基丙酮）二钯（14mg，0.015mmol）、2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯（14mg，0.029mmol）、叔丁醇钠（42mg，0.44mmol），氩气气氛中于100℃反应过夜。反应液降至室温后倒入水（10ml）中，用乙酸乙酯（3×30ml）萃取。有机相合并后用饱和食盐水（2×20ml）洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。残留物经制备hplc（流动相：乙腈/水（含0.05%nh3）纯化得到（r）-2-（（2-（5-（2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基）-1h-咪唑-5-基）氨基）乙烷-1-醇（62mg，白色固体），产率：70.1%。msm/z（esi）：439.6[m+1]+。
第十一步（r）-5-氟-3-（1-（3-（5-（（（2-羟乙基）氨基）-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基）吡咯烷-2-基）吡啶-2-醇
将（r）-2-（（2-（5-（2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基）-1h-咪唑-5-基）氨基）乙烷-1-醇（62mg，0.14mmol）溶于醋酸（5.0ml）中，室温下加入质量分数33%溴化氢的醋酸溶液（1.83ml，9.5mmol），反应液在90℃搅拌2小时至反应完全。冷却至室温，加水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和碳酸氢钠洗涤，水相合并后再次以乙酸乙酯萃取，有机相合并后于无水硫酸钠中干燥过滤，减压浓缩，残余物经制备hplc（流动相：乙腈/水（含0.05%nh3）纯化得到（r）-5-氟-3-（1-（3-（5-（（（2-羟乙基）氨基）-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基）吡咯烷-2-基）吡啶-2-醇（48mg，黄色固体），产率：80.0%。msm/z（esi）：425.4[m+1]+。
第十二步（r，23e，24e）-45-氟-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷
将（r）-5-氟-3-（1-（3-（5-（（（2-羟乙基）氨基）-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基）吡咯烷-2-基）吡啶-2-醇（48mg，0.11mmol）的无水dmf（10ml）溶液中，然后加入n,n-二异丙基乙胺（150mg，1.15mmol）。反应液冷却至0℃后，加入卡特缩合剂（bop）（66mg，0.15mmol），反应液在环境温度下搅拌过夜。待反应完成后，反应液倒入质量分数10%柠檬酸水溶液（10ml）中，用乙酸乙酯（3×10ml）萃取。合并有机相后依次用水（20ml），饱和碳酸氢钠（20ml），水（20ml）和盐水（3×20ml）洗涤。无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。残余物经制备hplc（流动相：乙腈/水（含0.05%nh3）纯化得到（r，23e，24e）-45-氟-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷（18mg，白色固体），产率：39.1%。1hnmr(400mhz,meod-d4)δ8.85(d,j=9.2hz,1h),8.52(d,j=7.6hz,1h),8.28(d,j=2.8hz,1h),8.08(s,1h),7.39(dd,j=9.6,2.8hz,1h),7.30(s,1h),6.63(d,j=7.6hz,1h),4.23(t,j=6.4hz,2h),3.86-3.75(m,2h),3.11-3.05(m,1h),2.95-2.84(m,1h),2.59-2.54(m,1h),1.94-1.78(m,2h),1.27-1.10(m,2h)。ms(esi)m/z=407.1[m+h]+。
实施例2（r，23e，24e）-45-氟-8-甲基-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑3（1,2）-吡咯烷基环辛烷
将（r，23e，24e）-45-氟-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷（10mg，0.025mmol）溶解到二氯甲烷（10ml）中，加入多聚甲醛（50mg）后室温搅拌3个小时。随后加入氰基硼氢化钠（62mg，10mmol），反应液室温搅拌过夜。待反应完成后，倒入水（10ml）中，用乙酸乙酯（3×30ml）萃取。有机相合并后用饱和食盐水（2×20ml）洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。残留物经制备hplc（流动相：乙腈/水（含0.05%nh3）纯化得到（r）-2-（（2-（5-（2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基）-1h-咪唑-5-基）氨基）乙烷-1-醇（4.8mg，白色固体），产率：46.2%。1hnmr(400mhz,meod-d4)δ8.75(d,j=9.2hz,1h),8.48(d,j=7.6hz,1h),8.30(m,1h),8.09(s,1h),7.35-7.33(m,1h),7.28(s,1h),6.63(d,j=7.6hz,1h),4.27(t,j=6.4hz,2h),3.85-3.82(m,2h),3.13-3.05(m,1h),2.90-2.84(m,1h),2.59-2.57(m,1h),2.23(s,3h),1.90-1.78(m,2h),1.28-1.20(m,2h)。ms(esi)m/z=421.0[m+h]+。
实施例3、4
（23e，24e，32r，7r）-45-氟-7-甲基-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷和（23e，24e，32r，7s）-45-氟-7-甲基-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷
第一步2-（（2-（5-（（r）-2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基）-1h-咪唑-5-基）氨基）丙-1-醇
将（r）-5-（2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（5-碘-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶（300mg，0.6mmol）溶于1,4-二氧六环（10.0ml）溶液中，依次加入2-氨基丙醇（225mg，3.0mmol）、三（二亚苄基丙酮）二钯（42mg，0.045mmol）、2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯（12mg，0.025mmol）、叔丁醇钠（126mg，1.32mmol），氩气气氛中于100℃反应过夜。反应液降至室温后倒入水（10ml）中，用乙酸乙酯（3×30ml）萃取。有机相合并后用饱和食盐水（2×20ml）洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。残留物通过柱层析分离（洗脱剂梯度，二氯甲烷：甲醇=10：1）得到纯化得到2-（（2-（5-（（r）-2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基）-1h-咪唑-5-基）氨基）丙-1-醇（165mg，白色固体），产率：61.3%。msm/z（esi）：453.8[m+1]+。
第二步5-氟-3-（（2r）-1-（3-（5-（（1-羟基丙烷-2-基）氨基）-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基）吡咯烷-2-基）吡啶-2-醇
将2-（（2-（5-（（r）-2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基）-1h-咪唑-5-基）氨基）丙-1-醇（160mg，0.36mmol）溶于醋酸（5.0ml）中，室温下加入质量分数33%溴化氢的醋酸溶液（1.83ml,9.5mmol），反应液在90℃搅拌2小时至反应完全。冷却至室温，加水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和碳酸氢钠洗涤，水相合并后再次以乙酸乙酯萃取，有机相合并后于无水硫酸钠中干燥过滤，减压浓缩，残余物经制备hplc（流动相：乙腈/水（含0.05%nh3）纯化得到5-氟-3-（（2r）-1-（3-（5-（（1-羟基丙烷-2-基）氨基）-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基）吡咯烷-2-基）吡啶-2-醇（128mg，黄色固体），产率：82.5%。msm/z（esi）：439.5[m+1]+。
第三步（23e，24e，32r，7r）-45-氟-7-甲基-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷和（23e，24e，32r，7s）-45-氟-7-甲基-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷
将（5-氟-3-（（2r）-1-（3-（5-（（1-羟基丙烷-2-基）氨基）-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基）吡咯烷-2-基）吡啶-2-醇（128mg，0.29mmol）的无水dmf（10ml）溶液中，然后加入n,n-二异丙基乙胺（150mg，1.15mmol）。反应液冷却至0℃后，加入卡特缩合剂（bop）（200mg，0.45mmol），反应液在环境温度下搅拌过夜。待反应完成后，反应液倒入10％柠檬酸水溶液（10ml）中，用乙酸乙酯（3×10ml）萃取。合并有机相后依次用水（20ml），饱和碳酸氢钠（20ml），水（20ml）和盐水（3×20ml）洗涤。无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。残余物经制备hplc（流动相：乙腈/水（含0.05%nh3）纯化得到两个组分：（peek1，6.6mg，白色固体），产率：5.3%和（peek2，4.5mg，白色固体），收率3.7%。这两个化合物为一组非对映异构体，结构表示为：（23e，24e，32r，7r）-45-氟-7-甲基-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷和（23e，24e，32r，7s）-45-氟-7-甲基-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷。
peek1（实施例3）：
1hnmr(400mhz,meod-d4)δ8.77(d,j=9.2hz,1h),8.52(d,j=7.6hz,1h),8.35(m,1h),8.11(s,1h),7.35-7.33(m,1h),7.28(s,1h),6.65(d,j=7.6hz,1h),4.03(m,2h),3.87-3.85(m,1h),3.23-3.15(m,1h),2.92-2.88(m,1h),2.59-2.57(m,1h),1.90-1.78(m,2h),1.28-1.24(m,2h),1.17(d,j=7.8hz,3h)。
lcms:tr=1.787minina90b10_2.6min_214&254_shimadzu.lcm,chromatography(sunfirec1850*4.6mm5um),ms(esi)m/z=421.0[m+h]+。
peek2（实施例4）：
1hnmr(400mhz,meod-d4)δ8.79(d,j=9.2hz,1h),8.53(d,j=7.6hz,1h),8.32(m,1h),8.14(s,1h),7.35-7.33(m,1h),7.28(s,1h),6.65(d,j=7.6hz,1h),4.03(m,2h),3.87-3.85(m,1h),3.23-3.15(m,1h),2.92-2.88(m,1h),2.59-2.57(m,1h),1.91-1.78(m,2h),1.28-1.25(m,2h),1.16(d,j=7.8hz,3h)。
lcms:tr=1.789minina90b10_2.6min_214&254_shimadzu.lcm,chromatography(sunfirec1850*4.6mm5um),ms(esi)m/z=421.1[m+h]+。
实施例5（r，23e，24e）-45-氟-7-（3,5）吡咯-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷
第一步（r）-2-（2-氯-5-氟吡啶-3-基）吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
首先在氮气下将吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯（10ml，57.0mmol）和（-）-天冬氨酸（13.1ml，57.0mmol）在无水甲基叔丁基醚（300ml）中的溶液冷却至-78℃，然后用恒压滴液漏斗在15分钟内逐滴滴加仲丁基锂的正己烷溶液（40.7ml，1.4m，57.0mmol），保持温度低于-75℃。将浅黄色溶液在-78℃搅拌3小时，然后在15分钟内用质量分数10%的氯化锌水溶液（38.0ml，1.0m，38.0mmol）逐滴处理，同时保持温度低于-73℃。将混合物在-78℃下搅拌30分钟，然后置于环境温度的水浴中并再搅拌1小时。此时，大量白色沉淀生成，将混合物用3-溴-2-氯-5-氟吡啶（10.00g，47.5mmol）的甲基叔丁基醚（50ml）溶液处理，然后加入乙酸钯（530mg，2.40mmol）和三叔丁基膦四氟硼酸酯（830mg，2.80mmol）。将混合物在50℃加热搅拌过夜。待完成反应后，将混合物用氨水（10ml）处理，搅拌30分钟，过滤，固体用甲基叔丁基醚洗涤。滤液用质量分数10%柠檬酸水溶液（300ml）洗涤，水层用甲基叔丁基醚（2×300ml）反萃。合并的有机相用盐水（200ml）洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得深黄色油状的粗产物。将粗产物通过柱层析（洗脱剂梯度，石油醚：乙酸乙酯=10:1）分离纯化，得到（r）-2-（2-氯-5-氟吡啶-3-基）吡咯烷-1-羧酸叔丁酯（5.0g，无色油状物），产率：35.0%。msm/z（esi）：301.1[m+h]+.,201.1[m+h-boc]+。
第二步（r）-2-氯-5-氟-3-（吡咯烷-2-基）吡啶二盐酸盐
向（r）-2-（2-氯-5-氟吡啶-3-基）吡咯烷-1-羧酸叔丁酯（5.00g，16.6mmol）的二氧六环（50ml）溶液中加入盐酸二氧六环溶液（4m，50ml），然后在环境温度下搅拌过夜。将混合物浓缩并用乙醚处理，然后真空干燥，得到（r）-2-氯-5-氟-3-（吡咯烷-2-基）吡啶二盐酸盐（3.6g，白色固体），产率：80.1%。msm/z（esi）：201.1[m+h]+。
第三步（r）-5-（2-（2-氯-5-氟吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶
将（r）-2-氯-5-氟-3-（吡咯烷-2-基）吡啶二盐酸盐(1.69g，7.13mmol)和5-氯-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶（2.00g，7.13mmol）溶于二氯甲烷（50ml）中，室温下加入三乙胺（2.16g，21.4mmol），反应液在室温下搅拌过夜。加水淬灭，二氯甲烷萃取，有机相合并，于无水硫酸钠中干燥过滤，有机相减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱层析法（洗脱剂梯度，乙酸乙酯：石油醚=1：2）纯化，得到（r）-5-（2-（2-氯-5-氟吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶(2.02g，黄色固体)，产率：63.9%。msm/z（esi）：444.5[m+h]+。
第四步（r）-5-（2-（2-氯-5-氟吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶
将（r）-5-（2-（2-氯-5-氟吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶（1.11g，2.5mmol），碳酸钠（795mg，7.5mmol）和（1h-咪唑-2-基）硼酸（425mg，3.8mmol）加入到二氧六环/水（25ml/5ml）的溶液中，然后加入pd(dppf)cl2（185mg，2.5mmol）。反应液氮气置换除氧后，氮气保护下加热至100℃反应过夜。反应完毕后，反应液冷却至室温，过滤。滤液用乙酸乙酯稀释（100ml）后，然后用饱和氯化钠水溶液（2×100ml）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到浅黄色固体。该固体通过柱层析分离（洗脱剂梯度，二氯甲烷：甲醇=10：1）得到（r）-5-（2-（5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶（550mg，类白色固体），产率：56.9%。ms(esi)m/z=384.6[m+h]+。
第五步叔丁基2-（（（（3-（（r）-1-（3-（1h-咪唑-2-基）吡咯并[1,5-a]嘧啶-5-基）吡咯烷-2-基]-5-氟吡啶-2-基）氧基）甲基吡咯烷-1-羧酸酯
将2-（羟甲基）吡咯烷-1-羧酸叔丁酯（402mg，2.0mmol）溶解到dmf（10ml）溶液中，冰浴冷却至0℃，加入氢化钠（质量分数60%分散在矿物油中）（88mg，2.2mmol）后搅拌该温度下30分钟。随后加入（r）-5-（2-（2-氯-5-氟吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶（550mg，1.44mmol），反应液缓慢升至室温后搅拌过夜。待反应完成后，反应液倒入质量分数10%柠檬酸水溶液（10ml）中，用乙酸乙酯（3×10ml）萃取。合并有机相后依次用水（20ml），饱和碳酸氢钠（20ml），水（20ml）和盐水（3×20ml）洗涤。无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。残余物通过柱层析分离（洗脱剂梯度，石油醚：乙酸乙酯=5：1）得到叔丁基2-（（（（3-（（r）-1-（3-（1h-咪唑-2-基）吡咯并[1,5-a]嘧啶-5-基）吡咯烷-2-基]-5-氟吡啶-2-基）氧基）甲基吡咯烷-1-羧酸酯（410mg，类白色固体），产率：52.3%。ms(esi)m/z=549.6[m+h]+。
第六步叔丁基2-（（（（5-氟-3-（r）-1-（3-（5-碘-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基）吡咯烷-2-基）吡啶-2-基）氧基）甲基吡咯烷-1-甲酸
将叔丁基2-（（（（3-（（r）-1-（3-（1h-咪唑-2-基）吡咯并[1,5-a]嘧啶-5-基）吡咯烷-2-基]-5-氟吡啶-2-基）氧基）甲基吡咯烷-1-羧酸酯（410mg，0.75mmol）溶解到二氯甲烷（30ml）溶液中，在0℃下分批加入n-碘代丁二酰亚胺（255mg，1.12mmol），并在该温度下搅拌混合物2小时。反应完成后，将反应混合物用亚硫酸钠饱和水溶液（2×50ml）洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到叔丁基2-（（（（5-氟-3-（r）-1-（3-（5-碘-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基）吡咯烷-2-基）吡啶-2-基）氧基）甲基吡咯烷-1-甲酸（385mg，黄色固体），产率：76.3%。ms(esi)m/z=675.6[m+h]+。
第七步5-（（2r）-2-（5-氟-2-（吡咯烷-2-基甲氧基）吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（5-碘-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶
将叔丁基2-（（（（5-氟-3-（r）-1-（3-（5-碘-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基）吡咯烷-2-基）吡啶-2-基）氧基）甲基吡咯烷-1-甲酸（385mg，0.57mmol）溶于二氯甲烷（10ml）中，加入氯化氢的二氧六环溶液（10ml，4m），反应液在室温下搅拌2小时至反应完全。减压浓缩得到粗品后用二氯甲烷（30ml）溶解，依次用饱和碳酸氢钠（20ml）和盐水（3×20ml）洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩得到5-（（2r）-2-（5-氟-2-（吡咯烷-2-基甲氧基）吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（5-碘-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶（290mg，黄色固体），产率：89.8%。ms(esi)m/z=575.3[m+h]+。
第八步（r，23e，24e）-45-氟-7-（3,5）吡咯-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷
将5-（（2r）-2-（5-氟-2-（吡咯烷-2-基甲氧基）吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（5-碘-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶（290mg，0.5mmol）溶于1,4-二氧六环（50ml）溶液中，依次加入三（二亚苄基丙酮）二钯（42mg，0.045mmol）、2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯（42mg，0.087mmol）、叔丁醇钠（126mg，1.32mmol），氩气气氛中于90℃反应过夜。反应液降至室温后倒入水（10ml）中，用乙酸乙酯（3×30ml）萃取。有机相合并后用饱和食盐水（2×20ml）洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。残留物经制备hplc（流动相：乙腈/水（含0.05%nh3）纯化得到（r，23e，24e）-45-氟-7-（3,5）吡咯-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷（15mg，白色固体），产率：6.66%。1hnmr(400mhz,meod-d4)δ8.82(d,j=9.2hz,1h),8.56(d,j=7.6hz,1h),8.35(m,1h),8.17(s,1h),7.36-7.34(m,1h),7.30(s,1h),6.65(d,j=7.6hz,1h),4.13(m,2h),3.87-3.85(m,1h),3.24-3.17(m,1h),2.94-2.88(m,1h),2.59-2.55(m,1h),2.33-2.29(m,2h),1.90-1.76(m,2h),1.28-1.25(m,2h),1.16(m,3h)。ms(esi)m/z=447.1[m+h]+。
实施例6(r，23e，24e）-45-氟-7-（3,6）哌啶-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷
第一步叔丁基2-（（（（3-（（r）-1-（3-（1h-咪唑-2-基）吡咯并[1,5-a]嘧啶-5-基）吡咯烷-2-基]-5-氟吡啶-2-基）氧基）甲基哌啶-1-甲酸
将2-（羟甲基）吡咯烷-1-羧酸叔丁酯（430mg，2.0mmol）溶解到dmf（10ml）溶液中，冰浴冷却至0℃，加入氢化钠（质量分数60%分散在矿物油中）（88mg，2.2mmol）后搅拌该温度下30分钟。随后加入（r）-5-（2-（2-氯-5-氟吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶（500mg，1.30mmol），反应液缓慢升至室温后搅拌过夜。待反应完成后，反应液倒入质量分数10%柠檬酸水溶液（10ml）中，用乙酸乙酯（3×10ml）萃取。合并有机相后依次用水（20ml），饱和碳酸氢钠（20ml），水（20ml）和盐水（3×20ml）洗涤。无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。残余物通过柱层析分离（洗脱剂梯度，石油醚：乙酸乙酯=5：1）得到叔丁基2-（（（（3-（（r）-1-（3-（1h-咪唑-2-基）吡咯并[1,5-a]嘧啶-5-基）吡咯烷-2-基]-5-氟吡啶-2-基）氧基）甲基哌啶-1-甲酸（475mg，类白色固体），产率：65.1%。ms(esi)m/z=563.4[m+h]+。
第二步叔丁基2-（（（（5-氟-3-（（r）-1-（3-（5-碘-1h-咪唑-2-基））吡唑并[1,5-a]嘧啶-吡咯烷-2-基）吡啶-2-基）氧基）甲基哌啶-1-甲酸
将叔丁基2-（（（（3-（（r）-1-（3-（1h-咪唑-2-基）吡咯并[1,5-a]嘧啶-5-基）吡咯烷-2-基]-5-氟吡啶-2-基）氧基）甲基哌啶-1-甲酸（475mg，0.84mmol）溶解到二氯甲烷（30ml）溶液中，在0℃下分批加入n-碘代丁二酰亚胺（295mg，1.30mmol），并在该温度下搅拌混合物2小时。反应完成后，将反应混合物用亚硫酸钠饱和水溶液（2×50ml）洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到叔丁基叔丁基2-（（（（5-氟-3-（（r）-1-（3-（5-碘-1h-咪唑-2-基））吡唑并[1,5-a]嘧啶-吡咯烷-2-基）吡啶-2-基）氧基）甲基哌啶-1-甲酸（370mg，黄色固体），产率：64.3%。ms(esi)m/z=689.2[m+h]+。
第三步5-（（2r）-2-（5-氟-2-（哌啶-2-基甲氧基）吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（5-碘-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶
将叔丁基叔丁基2-（（（（5-氟-3-（（r）-1-（3-（5-碘-1h-咪唑-2-基））吡唑并[1,5-a]嘧啶-吡咯烷-2-基）吡啶-2-基）氧基）甲基哌啶-1-甲酸（370mg，0.54mmol）溶于二氯甲烷（10ml）中，加入氯化氢的二氧六环溶液（10ml,4m），反应液在室温下搅拌2小时至反应完全。减压浓缩得到粗品后用二氯甲烷（30ml）溶解，依次用饱和碳酸氢钠（20ml）和盐水（3×20ml）洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩得到5-（（2r）-2-（5-氟-2-（哌啶-2-基甲氧基）吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（5-碘-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶（310mg，黄色固体），产率：98.8%。ms(esi)m/z=589.3[m+h]+。
第四步(r，23e，24e）-45-氟-7-（3,6）哌啶-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷
将5-（（2r）-2-（5-氟-2-（哌啶-2-基甲氧基）吡啶-3-基）吡咯烷-1-基）-3-（5-碘-1h-咪唑-2-基）吡唑并[1,5-a]嘧啶（310mg，0.53mmol）溶于1,4-二氧六环（50ml）溶液中，依次加入三（二亚苄基丙酮）二钯（42mg，0.045mmol）、2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯（42mg，0.087mmol）、叔丁醇钠（126mg，1.32mmol），氩气气氛中于90℃反应过夜。反应液降至室温后倒入水（10ml）中，用乙酸乙酯（3×30ml）萃取。有机相合并后用饱和食盐水（2×20ml）洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。残留物经制备hplc（流动相：乙腈/水（含0.05%nh3）纯化得到(r，23e，24e）-45-氟-7-（3,6）哌啶-11h-5-氧-8-氮杂-2（3,5）-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4（3,2）-吡啶-1（2,5）-咪唑-3（1,2）-吡咯烷基环辛烷（25mg，白色固体），产率：10.3%。1hnmr(400mhz,meod-d4)δ8.80(d,j=9.2hz,1h),8.53(d,j=7.6hz,1h),8.40(m,1h),8.20(s,1h),7.36-7.33(m,1h),7.31(s,1h),6.68(d,j=7.6hz,1h),4.14(m,2h),3.89-3.86(m,1h),3.25-3.20(m,1h),2.97-2.93(m,1h),2.85-2.79(m,2h),2.59-2.55(m,1h),2.35-2.29(m,2h),1.91-1.78(m,3h),1.28-1.25(m,2h),1.16(m,2h)。ms(esi)m/z=461.0[m+h]+。
测试例：化合物对trka激酶活性抑制效果的测定
下述实验用以测定本发明化合物对trka激酶活性的抑制作用。
1.实验材料
表2
2.实验仪器
全自动多功能多通道酶标仪：md，spectramaxi3x
3.试剂配制
（1）1倍的激酶缓冲液工作液（1×kinasebuffer）配制：取5倍的激酶缓冲液(5×kinasebuffer)200μl、1mmgcl2储液5μl、1mdtt储液1μl，溶于794μl双蒸水中并混匀，即为1倍的激酶缓冲液。
（2）5μm酪氨酸激酶底物溶液(substrate-tksolution)配制：用1×kinasebuffer将substrate-tk稀释至5μm。按照4μl/孔加入反应板中，substrate-tk终浓度为1μm。
（3）化合物溶液配制：用1×kinasebuffer配制2.5×化合物溶液。按照4μl/孔加入反应板中。
（4）75μmatp：用1×kinasebuffer将atp稀释75μm。按照4μl/孔加入反应板中，atp终浓度为15μm。
（5）trka配制：用1×kinasebuffer将trka酶配制1.5ng/μl。按照2μl/孔加入反应板中，trka终浓度为3ng/孔。
（6）链霉亲和素配制：用detectionbuffer将荧光素xl166标记的链霉亲和素（streptavidin-xl66）储液稀释至500nm。按照5μl/孔加入反应板中。
（7）酪氨酸磷酸化抗体配制：用detectionbuffer将穴状化合物(cryptate)标记的酪氨酸磷酸化抗体（tk-ab-cryptate）储液稀释100倍。按照5μl/孔加入反应板中。
3.实验步骤
（1）试剂配制：按上述配制试剂，将trka激酶酶（carna，货号08-186）置于4℃备用，其余试剂平衡到室温。
（2）底物磷酸化：底物-tk-biotin、atp、酶及一定浓度的化合物在1×kinasebuffer中混匀（控制反应体系中dmso的体积百分比浓度为1%），室温反应40分钟。
（3）特异结合反应：各反应孔中加入10µl经detectionbuffer稀释的streptavidin-xl665和tkantibodyeuropiμmcryptate混合检测液，室温反应1h。
（4）上机检测：利用mμltilabelreader(md,spectramaxi3x)多功能检测荧光信号（激发光320nm,发射光615nm，665nm）。
（5）数据分析并作图：利用背景信号孔扣除本底信号值，与全活酶活孔（溶剂对照孔）相比较，计算各化合物对trka酶活性的抑制效果；并利用画图分析软件prism6.0作图。
4.数据分析
激发比（er）=665nm发射光信号值/615nm发射光信号值
抑制率=(er溶剂组―er样品)/(er溶剂组―er空白)×100%
5.实验结果
各实施例化合物的抑制率(ic50)在表3中示出。
表3
从表3可以看出，本发明化合物具有优异的trka激酶抑制活性。