专利名称:一种制备高纯度红景天苷的方法
技术领域：
本发明属中药制药领域，涉及一种从植物红景天中分离高纯度红景天苷的方法。
背景技术：
红景天(Rhodila)为多年生草本植物，具有抗衰老、抗缺氧、抗疲劳、免疫调节等作用，，在军事医学、航天医学、运动医学和保健医学等方面具有十分重要的意义。红景天中主要成分为苷类、黄酮类、香豆素类、氨基酸类、鞣质和挥发油等。其中主要成分红景天苷(Salidroside)常作为质量控制指标，具有抗氧化、抗辐射、抗缺氧、抗疲劳等作用。目前制备红景天苷的主要方法有化学合成方法，和从红景天属植物中提取的方法。目前有报道的从红景天中分离高纯度红景天苷的方法其纯化的关键步骤均采用了正相硅胶柱制备色谱(葛永潮等，红景天甙的制备工艺改进，中国药物化学杂志，1994，4(3)196；咸漠等，红景天甙的分离提纯方法，吉林大学学报(自然科学版)，1998，(3)107；李静等，制备红景天甙标准品的新方法，大连轻工业学院学报，2002，19(3)189；邰韧辉，高纯度红景天苷的制备工艺研究，现代中药研究与实践，2004，18(4)58；张杰克等，红景天甙的提取工艺，中国专利01128982.1)、高速逆流色谱技术(韩笑等，高纯度红景天甙的制备方法，中国专利02100489.7)、以及反相高效液相色谱(丁朝武等，红景天甙和红景天甙元标准品的制备方法研究，分析测试学报，1997，16(1)38)。上述研究中，无论是采用正相硅胶柱制备色谱还是高速逆流色谱技术，均存在如下缺陷使用了大量低极性的有机溶剂，毒性较大，特别是正相硅胶柱制备色谱，所用的硅胶填料，使用后往往不回收而被废弃，造成环境的污染，而且，采用高效液相色谱需要价格昂贵的仪器，且制备的量受限制，一般只能达到毫克级的分离。
发明内容本发明目的是为了克服上述已有技术的缺陷和不足，提供一种有利于环保的可大规模制备高纯度红景天苷的方法。
本发明的技术方案是以红景天属植物为原料，经粉碎后，采用热水或含不高于50％的甲醇或乙醇水溶液进行提取；所得提取物经浓缩、乙醇沉淀后，经高分子填料固定相的色谱柱，采用不高于10％的甲醇或乙醇水溶液进行洗脱；分离的产物经含键合相硅胶填料固定相的色谱柱进行分离，得高纯度的红景天苷。
本发明的技术方案通过下述步骤实现(1).以红景天属植物为原料，粉碎至10目以下，加入2～10倍的水进行煎煮2～3次，每次时间为1～2小时，合并水溶液，于减压下浓缩至1/10～1/20体积，得到含红景天苷的水提物。
(2).在搅拌的情况下，缓慢加入95％的乙醇，至溶液的乙醇浓度达75％，过滤，滤液浓缩至1/5～1/10体积，重复上述步骤2～3次，减压下浓缩，除去乙醇，得到富含红景天苷而不含或仅含少量大分子水溶性成分的浓缩物。
(3).浓缩物用少量水溶解，注入填充有高分子填料固定相的色谱柱内，用3～5倍量的水进行洗脱，除去水溶性的碳水化合物，然后改用3～5倍量、含乙醇或甲醇的浓度为5％的水溶液进行洗脱，再用2～4倍量、含乙醇或甲醇的浓度为10％的水溶液进行洗脱，用HPLC进行检测，合并含红景天苷的组分，减压浓缩，得红景天苷含量在30～70％的提取物。
(4)上述含量在30～70％的红景天苷提取物用少量水溶解，注入填充有键合相硅胶填料固定相的色谱柱内，用3～5倍量的水进行洗脱，除去其它水溶性成分，然后改用3～5倍量、含乙醇或甲醇的浓度为5％的水溶液进行洗脱，用HPLC检测，合并含红景天苷的部分，减压浓缩，除去甲醇或乙醇后，冷冻干燥，得到含量高于98％的红景天苷。
所述的高分子填料固定相选自多空型苯乙烯二乙烯基苯聚合物或多空型交联聚丙烯酸酯共聚物或多空型交联甲基丙烯酸酯共聚物或离子交换树脂，粒径为30～200微米，比表面积为50～900m2/g，孔度为30～70％。
所述的键合相硅胶填料固定相为键合了C-18、C-8、苯基或腈基的反相硅胶，粒径为10～100微米，孔径为60～120。
本发明的提取方法为用水、以及水和其它亲水有机溶剂，如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丙酮、丙二醇、丙三醇或甲基甲酰胺等，提取时采用渗漉或加热回流，提取后的溶液，经过滤、浓缩致小体积后，用高浓度乙醇进行沉淀，过滤后的溶液用高分子吸附材料进行初步分离；所述的高分子材料包括但不限于大孔吸附树脂、阳离子交换树脂、阴离子交换树脂、聚酰胺、聚丙或葡聚糖凝胶，首选为大孔吸附树脂；用于大孔吸附树脂洗脱的溶液为水、以及水和其它亲水有机溶剂，如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丙酮等按不同比例混合的溶剂，按亲水溶剂的比例不断增加的秩序进行洗脱，首选为乙醇；洗脱溶液中乙醇的含量为0～20％，并按0％、5％、10％的次序进行洗脱，洗脱下来的流份用薄层色谱(TLC)或高效液相色谱(HPLC)技术进行检测，收集含红景天苷部分，经浓缩，除去亲水有机溶剂后，用反相色谱材料进行分离；所述的反相色谱材料包括但不限于烷基硅烷键合硅胶，如十八烷基硅烷键合硅胶(C18)、辛基硅烷键合硅胶C8、苯基硅烷键合硅胶、氰基硅烷键合硅胶等，首选为十八烷基硅烷键合硅胶(C18)；用于反相色谱洗脱的溶液为水、以及水和其它亲水有机溶剂，如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丙酮等按不同比例混合的溶剂，按亲水溶剂的比例不断增加的秩序进行洗脱，洗脱下来的流份用薄层色谱(TLC)或高效液相色谱(HPLC)技术进行检测，收集含红景天苷部分；收集得到的含红景天苷的溶液，可用以下方法除去溶剂(1)直接采用喷雾干燥技术，得到含量大于95％的高纯度的红景天苷，(2)红景天苷的溶液经浓缩、除去亲水有机溶剂后，采用冷冻干燥方法除去水，得到含量大于95％的高纯度的红景天苷。
本发明与已有技术比较具有如下优点及效果(a).制备的红景天苷的规模大、收率高、纯度高，(b).所采用的高分子填料固定相和键合相硅胶填料固定相可反复使用，(c).用于洗脱的有机相仅为甲醇或乙醇，不含其它易挥发、毒性大、对环境有严重污染低极性的有机溶剂，(d).有机相的比例不高于10％，回收后，经调整比例，可重复利用，(e).能同时得到红景天植物中的其它成分。
具体实施方式实施例1
取红景天属植物为原料，粉碎至10目以下，加入2倍的水进行煎煮2次，每次时间为1小时，合并水溶液，于减压下浓缩至1/10体积，得含红景天苷的水提物。
取上述200克红景天水提物，用少量水溶解后，加入95％乙醇至多糖沉淀完全，过滤，溶液浓缩至无醇味，上大孔吸附树脂，用水洗脱，约4～5倍柱体积，然后改用5％乙醇水溶液进行洗脱，收集该浓度的流分，减压浓缩至无醇味，上反相C18硅胶柱，先用水洗脱，然后改用10％醇洗脱，用HPLC检测，收集含红景天苷的部位，减压浓缩除去甲醇后，冷冻干燥，得白色红景天苷固体，经HPLC测定，含量为98.7％。
实施例2取红景天属植物为原料，粉碎至10目以下，加入10倍的水进行煎煮3次，每次时间为2小时，合并水溶液，于减压下浓缩至1/20体积，得含红景天苷的水提物。
取上述200克红景天水提物，用少量水溶解后，加入95％乙醇至多糖沉淀完全，过滤，溶液浓缩至无醇味，再用氯仿萃取3次，水层减压除去氯仿后，上大孔吸附树脂，用水洗脱，约4～5倍柱体积，然后改用10％甲醇水溶液进行洗脱，收集该浓度的流分，减压浓缩除去甲醇，上反相C8硅胶柱，先用水洗脱，然后改用5％的乙醇洗脱，用HPLC检测，收集含红景天苷的部位，减压浓缩除去乙醇后，冷冻干燥，得白色红景天苷固体，经HPLC测定，含量为99.2％。
权利要求
1.一种制备高纯度红景天苷的方法，其特征是通过下述步骤(1)以红景天属植物为原料，粉碎后，采用热水或含不高于50％的甲醇或乙醇水溶液进行提取；(2)所得提取物经浓缩、乙醇沉淀后，经高分子填料固定相的色谱柱，采用不高于10％的甲醇或乙醇水溶液进行洗脱；(3)分离的产物经含键合相硅胶填料固定相的色谱柱进行分离，得高纯度的红景天苷。
2.根据权利要求
1所述的制备高纯度红景天苷的方法，其特征是所述的填料固定相的色谱柱其中高分子材料选自大孔吸附树脂、阳离子交换树脂、阴离子交换树脂、聚酰胺、聚丙、葡聚糖凝胶。
3.根据权利要求
3的制备高纯度红景天苷的方法，其特征是所述的填料固定相的色谱柱其中高分子材料为大孔吸附树脂。
4.根据权利要求
1所述的制备高纯度红景天苷的方法，其特征是所述的步骤2的洗脱溶液中乙醇的含量为0～20％，按0％、5％、10％的次序进行洗脱。
5.根据权利要求
1所述的制备高纯度红景天苷的方法，其特征是所述的步骤3的含键合相硅胶填料固定相的色谱柱其中反相色谱材料包括但不限于烷基硅烷键合硅胶，选自十八烷基硅烷键合硅胶C18、辛基硅烷键合硅胶C8、苯基硅烷键合硅胶或氰基硅烷键合硅胶。
6.根据权利要求
5的方法，其中所述的反相色谱材料是十八烷基硅烷键合硅胶C18。
专利摘要
本发明属中药制药领域，涉及一种从植物红景天中分离高纯度红景天苷的方法。本发明采用热水或含不高于50％的甲醇或乙醇水溶液提取原料；所得提取物经浓缩、乙醇沉淀后，经高分子填料固定相的色谱柱，采用不高于10％的甲醇或乙醇水溶液进行洗脱；分离的产物经含键合相硅胶填料固定相的色谱柱进行分离，得高纯度的红景天苷。本方法制备的产物规模大、收率高、纯度高，所采用的高分子填料固定相和键合相硅胶填料固定相可反复使用，用于洗脱的有机相不含易挥发、毒性大、对环境有严重污染低极性的有机溶剂，有机相回收后，可重复利用。
文档编号C07H1/00GK1990496SQ200510112432
公开日2007年7月4日 申请日期2005年12月29日
发明者俞培忠, 丁溪影, 刘珊林 申请人:复旦大学导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan