包含微生物蛋白酶变体的组合物和方法
【专利说明】包含微生物蛋白酶变体的组合物和方法
[0001] 本申请为2009年6月3日提交的、发明名称为"包含微生物蛋白酶变体的组合物 和方法"的PCT申请PCT/US2009/046066的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日 期为2010年12月3日，申请号为200980120922. 3。 发明领域
[0002] 本发明提供枯草杆菌蛋白酶变体和包含至少一种此处陈列的枯草杆菌蛋白酶变 体的组合物，以及使用这些变体和组合物的方法。具体的，本发明提供适于衣物清洁用途的 蛋白酶变体。
[0003] 发明背景
[0004] 丝氨酸蛋白酶是包含多种酶类别的羰基水解酶亚组，具有多种特异性和生物学功 能。对枯草杆菌蛋白酶已经进行了大量研究，主要是出于其在清洁和饲料应用中的用途。其 他工作则着眼于在各种应用中可以负面影响这些酶的功能的不良环境条件（例如，暴露于 氧化剂、螯合剂、极端的温度和/或pH)。尽管如此，本领域仍然需要这样的酶系统，所述酶 系统能够抵抗这些不良条件，并且与本领域目前已知的酶系统相比，保留了活性或具有提 高的活性。
[0005] 发明概述
[0006] 本发明提供枯草杆菌蛋白酶变体和包含至少一种此处陈列的枯草杆菌蛋白酶变 体的组合物，以及使用这些变体和组合物的方法。在一些实施方案中，本发明提供适于衣物 清洁用途的蛋白酶变体。
[0007] 本发明提供分离的枯草杆菌蛋白酶变体，包含以下取代组中的至 少一组：G97A-G128A-Y217Q、G97A-L126A-G128A、G97A-L126A-G128A-Y217Q、 G97A-L126A-Y217Q、G97A-M124V-G128A、G97A-M124V-G128A-Y217Q、 G97A-M124V-L126A、G97A-M124V-L126A-G128A、G97A-M124V-L126A-Y217Q、 G97A-M124V-Y217Q、G97A-N123G-G128A、G97A-N123G-G128A-Y217Q、 G97A-N123G-L126A、G97A-N123G-L126A-G128A、G97A-N123G-L126A-Y217Q、 G97A-N123G-M124V、G97A-N123G-M124V-G128A、G97A-N123G-M124V-L126A、 G97A-N123G-M124V-Y217Q、G97A-N123G-Y217Q、L126A-G128A-Y217Q、 L96T-G128A-Y217Q、L96T-G97A-G128A、L96T-G97A-G128A-Y217Q、L96T-G97A-L126A、 L96T-G97A-L126A-G128A、L96T-G97A-L126A-Y217Q、L96T-G97A-M124V、 L96T-G97A-M124V-G128A、L96T-G97A-M124V-L126A、L96T-G97A-M124V-Y217Q、 L96T-G97A-N123G、L96T-G97A-N123G-G128A、L96T-G97A-N123G-L126A、 L96T-G97A-N123G-M124V、L96T-G97A-N123G-Y217Q、L96T-G97A-Y217Q、 L96T-L126A-G128A、L96T-L126A-G128A-Y217Q、L96T-L126A-Y217Q、 L96T-M124V-G128A、L96T-M124V-G128A-Y217Q、L96T-M124V-L126A、 L96T-M124V-L126A-G128A、L96T-M124V-L126A-Y217Q、L96T-M124V-Y217Q、 L96T-N123G-G128A、L96T-N123G-G128A-Y217Q、L96T-N123G-L126A、 L96T-N123G-L126A-G128A、L96T-N123G-L126A-Y217Q、L96T-N123G-M124V、L96T-N123G-M124V-G128A、L96T-N123G-M124V-L126A、L96T-N123G-M124V-Y217Q、 L96T-N123G-Y217Q、M124V-G128A-Y217Q、M124V-L126A-G128A、 M124V-L126A-G128A-Y217Q、M124V-L126A-Y217Q、N123G-G128A-Y217Q、 N123G-L126A-G128A、N123G-L126A-G128A-Y217Q、N123G-L126A-Y217Q、 N123G-M124V-G128A、N123G-M124V-G128A-Y217Q、N123G-M124V-L126A、 N123G-M124V-L126A-G128A、N123G-M124V-L126A-Y217Q、N123G-M124V-Y217Q、 N62Q-G128A-Y217Q、N62Q-G97A-G128A、N62Q-G97A-G128A-Y217Q、N62Q-G97A-L126A、 N62Q-G97A-L126A-G128A、N62Q-G97A-L126A-Y217Q、N62Q-G97A-M124V、 N62Q-G97A-M124V-G128A、N62Q-G97A-M124V-L126A、N62Q-G97A-M124V-Y217Q、 N62Q-G97A-N123G、N62Q-G97A-N123G-G128A、N62Q-G97A-N123G-L126A、 N62Q-G97A-N123G-M124V、N62Q-G97A-N123G-Y217Q、N62Q-G97A-Y217Q、 N62Q-L126A-G128A、N62Q-L126A-G128A-Y217Q、N62Q-L126A-Y217Q、N62Q-L96T-G128A、 N62Q-L96T-G128A-Y217Q、N62Q-L96T-G97A、N62Q-L96T-G97A-G128A、 N62Q-L96T-G97A-L126A、N62Q-L96T-G97A-M124V、N62Q-L96T-G97A-N123G、 N62Q-L96T-G97A-Y217Q、N62Q-L96T-L126A、N62Q-L96T-L126A-G128A、 N62Q-L96T-L126A-Y217Q、N62Q-L96T-M124V、N62Q-L96T-M124V-G128A、 N62Q-L96T-M124V-L126A、N62Q-L96T-M124V-Y217Q、N62Q-L96T-N123G、 N62Q-L96T-N123G-G128A、N62Q-L96T-N123G-L126A、N62Q-L96T-N123G-M124V、 N62Q-L96T-N123G-Y217Q、N62Q-L96T-Y217Q、N62Q-M124V-G128A、 N62Q-M124V-G128A-Y217Q、N62Q-M124V-L126A、N62Q-M124V-L126A-G128A、 N62Q-M124V-L126A-Y217Q、N62Q-M124V-Y217Q、N62Q-N123G-G128A、 N62Q-N123G-G128A-Y217Q、N62Q-N123G-L126A、N62Q-N123G-L126A-G128A、 N62Q-N123G-L126A-Y217Q、N62Q-N123G-M124V、N62Q-N123G-M124V-G128A、 N62Q-N123G-M124V-L126A、N62Q-N123G-M124V-Y217Q、和N62Q-N123G-Y217Q，其中取代位于 SEQIDNO: 1中陈列的BPN'枯草杆菌蛋白酶位置的等同位置。
[0008] 本发明还提供分离的枯草杆菌蛋白酶变体，包含以下取代组中 的至少一组：G97N-G128A-Y217M、G97G-G128S-Y217E、G97A-G128A-Y217Q、 G97M-G128S-Y217E、G97A-G128S-Y217Q、G97D-G128S-Y217Q、G97M-G128G-Y217M、 G97G-G128S-Y217Q、G97S-G128S-Y217Q、G97G-G128A-Y217Q、G97S-G128A-Y217E、 G97A-G128S-Y217L、G97A-G128A-Y217N、G97Q-G128S-Y217L、G97A-G128A-Y217M、 G97A-G128A-Y217S、G97D-G128A-Y217Q、G97M-G128S-Y217Q、G97Q-G128G-Y217D-S87Y、 G97S-G128A-Y217N、G97A-G128S-Y217T、G97D-G128S-Y217E、G97D-G128A-Y217L、 G97G-G128S-Y217E-S78P-A272T、G97T-G128S-Y217D、G97D-G128A-Y217I、 G97Q-G128S-Y217Q、G97G-G128A-Y217D、G97Q-G128A-Y217N、G97S-G128A-Y217M、 G97S-G128S-Y217N、G97S-G128S-Y217M、G97E-G128S-Y217M、G97S-G128P-Y217Q、 G97T-G128S-Y217Q、G97D-G128S-Y217Q-A73T、G97E-G128S-Y217N、G97G-G128A-Y217I、 G97Q-G128A-Y217D、G97Q-G128S-Y217M、G97R-G128T-Y217Q-S162P、G97S-G128S-Y217D、 G97T-G128P-Y217I、G97Q-G128G-Y217E、G97C-G128G-Y217N、G97D-G128S-Y217H、 G97M-G128S-Y217L、G97M-G128S-Y217N、G97S-G128S-Y217E、G97M-G128S-Y217I、G97A-G128P-Y217A、G97R-G128S-Y217D、G97D-G128A-Y217D、G97V-G128G-Y217D、 G97V-G128G-Y217E、G97A-G128G-Y217T、G97G-G128N-Y217L、G97D-G128A-Y217T、 G97M-G128A-Y217E、和G97M-G128A-Y217N，其中取代位于SEQIDN0:1 中陈列的BPN' 枯草 杆菌蛋白酶位置的等同位置。
[0009] 本发明还提供分离的枯草杆菌蛋白酶变体，包含以下取代组中 的至少一组：S24R-S87D-Q206E、P40E-A144K-K213L、N61E-P129E-S159K、 S87D-S162K-K265N、S87D-T242R-Q275E、N61E-Q103E-N240K、S87D-T242R-K265N、 N62R-K265N-Q275E、P129E-S145D-N240K、P129E-P239R-K265N、Q103E-P129E-T242R、 P40E-N61E-S87D-S162K-T242R、S24R-N62R-S87D-S145D-K265N、 P40E-N62R-S87D-Q103E-S162K、S24R-P40E-S145D-S159K-K213L、 S24R-S87D-A144K-K265N-Q275E、N61E-P129E-S162K-K213L-N240K、 N61E-S145D-S162K-K213L-T242R、S87D-A144K-S145D-S159K-Q275E、 S24R-P129E-Q206E-N240K-K265N、N61E-Q103E-A144K-K213L-T242R、 N62R-S159K-Q206E-K265N-Q275E、S24R-Q103E-P129E-N240K-K265N、 N61E-Q103E-P129E-P239R-N240K、P129E-S145D-N240K-T242R-K265N、 Q103E-S162K-Q206E-K213L-P239R、P40E-N61E-N62R-S87D-S159K-S162K-K265N、S24R-P40 E-N61E-A144K-Q206E-K213L-T242R、P40E-N61E-S87D-P1