包括微生物蛋白酶变体的组合物和方法

包括微生物蛋白酶变体的组合物和方法
【专利摘要】本发明提供了枯草蛋白酶变体和包括至少一种此处所述的枯草蛋白酶变体的组合物，以及使用这些变体和组合物的方法。在一些实施方式中，本发明提供了适用于衣物清洁应用的蛋白酶变体。
【专利说明】包括微生物蛋白酶变体的组合物和方法
[0001]本申请为2009年6月3日提交的，发明名称为“包括微生物蛋白酶变体的组合物和方法”的PCT申请PCT/US2009/046067的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日期为2011年I月31日，申请号为200980130352.6。
发明领域
[0002]本发明提供枯草蛋白酶变体及包含至少一种本文所述枯草蛋白酶变体的组合物，以及使用这些变体和组合物的方法。
[0003]发明背景
[0004]丝氨酸蛋白酶是包含多种具有广泛特性和生物学功能的酶类别的羰基水解酶的一个亚型。已经对枯草蛋白酶进行了很多研究，这很大程度上是由于它们在清洁及饲料应用中的用途。另外的研究集中在能对这些酶各种应用功能产生不利影响的有害环境条件上(如:暴露于氧化剂、螯合剂、极端温度和/或PH中)。然而，本领域中仍需要能够抵抗这些不利条件并且保持或比本领域已知的那些活性具有改善的活性的酶系统。
发明概要
[0005]本发明提供枯草蛋白酶变体及包含至少一种本文所述的枯草蛋白酶变体的组合物，以及使用这些变体和组合物的方法。具体而言，本发明提供了适合于衣物清洁用途的蛋白酶变体。
[0006]本发明提供了包含至少一种修饰的枯草蛋白酶变体，其中所述至少一种修饰选自:G100C、S101D、S101H、Q103D、M124G、L126G、S132H、S161N、Q275Z 和 / 或选自下列的至少一组修饰:
[0007]A001T/L096V/G097S/A098D/D099I, A001V/G097S/A098R/D099G, V004M/A098D/D099G,
[0008]V004M/D099R/G100S/Z100.0IL, V004M/G127C/G128S/P129R, V004M/M119C/D120S,
[0009]V008I/A098G/D099R, V008I/A098N, V008I/M119C/D120G, Q010L/G097R/A098C/D099S,
[0010]K012N/A098R/D099V, K012R/G097D/A098H/D099G, A013T/S101R/Q103S,
[0011]A013V/G097N/A098H/D099G/G160S, A013V/G097S/Z097.01R/A098R, A013V/G100R/S101G,
[0012]A013V/N118G/M119I, A013V/P129Z/S130H/S132G, P014L/N062D/S101R/Q103S,
[0013]P014S/A098S/D099G, A015T/V068N/A069G, L016M/G128R/P129R/Z129.01G,
[0014]H017Q/G127R/P129G, H017Y/A098R/D099I，H017Y/A098R/D099Z/S101G, HO 17Y/P129R,
[0015]H017Y/S130Y/G131S/S132L, Q019H/G128R/Z128.01R/P129D, Q019H/Z128.0lG/Z128.02G,
[0016]G020D/G097R/A098G/D099C, G020D/P129Z/S130G/G131R/S132C, N025Y/S101L/Q103N,
[0017]A029V/G097R/A098S, S033I/T066G/H067R/V068D/A216E, S038F/A098R/D099S,
[0018]V044I/G097C/A098D/D099G, V044I/G097R/A098R, V044I/G100S/S101G,
[0019]A045V/G097C/A098R/D099S, A048V/G097L/A098G/D099S, A048V/G100R/S101G,
[0020]A048V/G128S/P129L/Z129.01G, M050I/A098G, S053F/S130I/S132G, S053T/D099H/S101Z,
[0021]E054D/A098R/D099G, T055I/S101R/Q103R, T055S/T066I/Z066.01G/Z066.02G,
[0022]Q059H/D099S/S101G, Q059H/M119S/D120R, Q059K/M119V/V121C, Q059L/P129G,
[0023]N061D/G128R/P129V/Z129.0lG, S063T/G097D/A098R/D099S, G065R/Z101.0lR/Z101.02G,
[0024]T066S/H067S, V068C/A069G, V068C/A069G/H238Q, V068G/A069G, V068G/A069G/V150I,
[0025]V068G/A069S, V068I/A069G/A144V, V068I/G097D/A098G/D099Z/G100R, V068L/A069G,
[0026]V068L/A069S, V068S/A069G, V068S/A069G/A116T, A069G/T071G, A069G/T071I,
[0027]L075G/N076G/N077Z, L075R/N076G/N077Z, N076D/D099R/Z100.01G, 1079F/A098G,
[0028]V081A/S101R/Q103V, V081I/G097R/A098G/D099C, V084D/G097S/A098G/D099N,
[0029]V084I/G127C/P129G, V084I/G127L, A085V/A098G,A085V/G097R/A098S/D099N,
[0030]A085V/G128S/P129R/Z129.0lG, A085V/N218I, A085V/S101G,A085V/S204P,
[0031]A085V/Z099.01H/S101R, P086S/G131D/S132G, P086T/S101D/Q103S/V147I,
[0032]A088S/S101R/Q103V, A088T/A098R/D099R, A088T/D099G/Z100.01G, A088T/G127N/P129R,
[0033]A088T/G127S/P129R/Q206R/A273S, A088T/P129S/G146D, A088T/S101G,
[0034]A088T/S130R/G131H/S132N, A088V/G100Z/S101C/Q103R, A088V/P129Z, A092G/S249R,
[0035]A092G/V093C, A092G/V093I, A092G/V093L, A092L/V093G/K094Z, A092S/K094V,
[0036]A092S/V093C, A092S/V093G, A092S/V093S, A092V/V093L, V093I/G128D/P129R,V093I/P129Z,
[0037]V093R/Z093.01G/K094R, K094E/V095D, K094S/V148I,L096I/N118R/M119C/D120G/A151V,
[0038]Z096.01D/A098R, Z096.01H/A098G, Z096.01N/A098H, Z096.01R/A098C, Z096.0IR/A098G,
[0039]Z096.01R/A098G/V192I, Z096.01R/A098R, Z096.01R/A098R/V192A, Z096.0lR/A098S,
[0040]Z096.01R/A098S/G157S, Z096.01R/Z096.02G, Z096.01R/Z096.02G/V147I,Z096.01S/A098G,
[0041]Z096.01S/A098N, G097C/A098D/D099S, G097C/A098G/D099G,G097C/A098G/D099N,
[0042]G097C/A098G/D099S, G097C/A098G/D099S/G100Z, G097C/A098G/D099V,
[0043]G097C/A098N/D099S, G097C/A098R, G097C/A098R/D099G, G097C/A098R/D099H,
【权利要求】
1.一种枯草蛋白酶变体，包括至少一个修饰，其中所述修饰选自:G100C、S101D、S101H、Q103D、M124G、L126G、S132H、S161N、Q275Z 和 / 或选自下列中的至少一组修饰:A001T/L096V/G097S/A098D/D099I, A001V/G097S/A098R/D099G,
V004M/A098D/D099G,V004M/D099R/G100S/Z100.0IL, V004M/G127C/G128S/P129R,V004M/M119C/D120S, V008I/A098G/D099R, V008I/A098N, V008I/M119C/D120G,Q010L/G097R/A098C/D099S, K012N/A098R/D099V, K012R/G097D/A098H/D099G,A013T/S101R/Q103S, A013V/G097N/A098H/D099G/G160S, A013V/G097S/Z097.0lR/A098R,
A013V/G100R/S101G, A013V/N118G/M119I, A013V/P129Z/S130H/S132G,
P014L/N062D/S101R/Q103S, P014S/A098S/D099G, A015T/V068N/A069G,
L016M/G128R/P129R/Z129.01G, H017Q/G127R/P129G, H017Y/A098R/D099I,
H017Y/A098R/D099Z/S101G, H017Y/P129R, H017Y/S130Y/G131S/S132L,
Q019H/G128R/Z128.01R/P129D, Q019H/Z128.01G/Z128.02G, G020D/G097R/A098G/
D099C,
G020D/P129Z/S130G/G131R/S132C, N025Y/S101L/Q103N,A029V/G097R/A098S,S033I/T066G/H067R/V068D/A216E, S038F/A098R/D099S, V044I/G097C/A098D/D099G,V044I/G097R/A098R, V044I/G100S/S101G, A045V/G097C/A098R/D099S,A048V/G097L/A098G/D099S, A048V/G100R/S101G, A048V/G128S/P129L/Z129.01G,M050I/A098G,
S053F/S130I/S132G, S053T/D099H/S101Z, E054D/A098R/D099G, T055I/S101R/Q103R,
T055S/T066I/Z066.01G/Z066.02G, Q059H/D099S/S101G, Q059H/M119S/D120R,
Q059K/M119V/V121C, Q059L/P129G, N061D/G128R/P129V/Z129.01G,
S063T/G097D/A098R/D099S, G065R/Z101.01R/Z101.02G, T066S/H067S, V068C/A069G,
V068C/A069G/H238Q, V068G/A069G, V068G/A069G/V150I, V068G/A069S, V068I/A069G/
A144V,
V068I/G097D/A098G/D099Z/G100R, V068L/A069G, V068L/A069S, V068S/A069G,V068S/A069G/A116T, A069G/T071G, A069G/T071I, L075G/N076G/N077Z, L075R/N076G/N077Z,
N076D/D099R/Z100.01G, 1079F/A098G, V081A/S101R/Q103V, V0811/G097R/A098G/D099C,
V084D/G097S/A098G/D099N, V084I/G127C/P129G, V084I/G127L, A085V/A098G,A085V/G097R/A098S/D099N, A085V/G128S/P129R/Z129.01G, A085V/N218I, A085V/S101G,
A085V/S204P, A085V/Z099.01H/S101R, P086S/G131D/S132G, P086T/S101D/Q103S/V147I,
A088S/S101R/Q103V, A088T/A098R/D099R, A088T/D099G/Z100.01G, A088T/G127N/P129R,
A088T/G127S/P129R/Q206R/A273S, A088T/P129S/G146D, A088T/S101G,
A088T/S130R/G131H/S132N, A088V/G100Z/S101C/Q103R, A088V/P129Z, A092G/S249R,



G097A/G100S/G128A/Y217Q/K237N, G097A/Z099.01S/G128S/P129D/Y217Q,
G097A/G100S/G128S/P129D/Y217Q, Z096.01D/G097A/A098R/G128A/Y217Q,
G097A/Z099.01S/I122S/N123G/G128A/Y217Q,
G097A/Z099.01S/I122S/N123G/G128A/Y217Q/T220A/A232T,
P005S/G097A/Z099.01S/S101D/G128A/Y217Q, G097A/S101D/G128A/P129V/Y217Q,V093Z/K094S/V095C/L096S/G097A/G128A/Y217Q, G097A/G100S/S101D/G128A/Y217Q/A232P, Z096.01D/G097A/A098R/S101D/G128A/Y217Q,和 G097A/Z099.01S/G100S/G128A/Y217Q，其中所述位置对应于BPN’的枯草蛋白酶SEQ ID NO:2的位置。
2.权利要求书2缺失
3.一种枯草蛋白酶变体，包括至少两个修饰，其中所述修饰选自:
G097A/G128S/Z128.01A/P129L/Y217Q, G097A/G128Y/Z128.01A/P129S/Y217Q,G097A/G128S/Z128.01A/P129M/R186H/Y217Q, G097A/G128E/Z128.01A/P129D/Y217Q,G097A/G128T/P129L/Y217Q, G097A/G128F/P129D/Y217Q, G097A/G128V/Z128.0lA/P129R/Y217Q,
G097A/G128L/Z128.01A/P129S/Y217Q, G097A/G128Y/P129T/Y217Q, G097A/G128C/P129Y/Y217Q, G097A/G128C/P129T/Y217Q，其中所述位置对应于BPN’枯草蛋白酶SEQ ID NO:2的位置。
4.一种枯草蛋白酶变体，包括至少两个修饰，其中所述修饰选自: G097A/G128A/Y217Q/M222Q, Ml24V/L126A/P129V/Y217Q, G128A/P129V/Y217Q G097A/G128A/P129V/Y217Q，NI23G/P129V/Y217Q，
V30I/Z096.01D/G097A/A098R/G128A/Y217Q, Z096.01D/A098R/G128A/Y217Q,
Z096.01D/A098R/M124V/L126A/Y217Q, G097A/Z098.01S/G128A/Y217Q,
Z096.01D/A098R/N123G/Y217Q, Z096.01D/G097A/A098R/G128A/Y217Q/S236F,
Z098.01S/M124V/L126A/Y217Q, Z098.01S/G128A/Y217Q,
Z096.01D/G097A/A098R/G128A/Y217Q, V093I/Z098.01S/M124V/L126A/Y217Q,
A073V/Z098.01S/N123G/Y217Q, G065D/Z098.01S/G128A/Y217Q,
.1011L/Z098.01S/G128A/Y217Q, L082F/Z096.01D/A098R/N123G/Y217Q, Z098.01S/N123G/A138V/Y217Q, Z098.01S/N123G/Y217Q，其中所述位置对应于 BPN’ 枯草蛋白酶SEQ ID NO: 2的位置。
5.一种枯草蛋白酶变体，包括取代Y217L，而且进一步包括权利要求1-4任一项中定义的至少一个修饰，其中所述位置对应于BPN’枯草蛋白酶SEQ ID NO:2的位置。
6.一种枯草蛋白酶变体，包括取代G97A/G128A/Y217Q，而且进一步包括权利要求1_4任一项中定义的至少一个修饰，其中所述位置对应于BPN’枯草蛋白酶SEQ ID N0:2的位置。
7.一种清洁组合物，包括至少一种如权利要求1-6中任一项所述的枯草蛋白酶变体。
8.如权利要求7所述的清洁组合物，其中所述清洁组合物为衣物洗涤剂。
9.如权利要求8所述的衣物洗涤剂，其中所述衣物洗涤剂是强效液体衣物洗涤剂。
10.如权利要求7所述的清洁组合物，其中所述清洁组合物为餐具洗涤剂。
11.如权利要求7-10中任一项所述的清洁组合物，进一步包括一种或多种其它酶或酶衍生物，所述酶或酶衍生物选自下组中:半纤维素酶、过氧化物酶、蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂加氧酶、木质素酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、甘露聚糖酶、β -葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、漆酶和淀粉酶，或它们的混合物。
12.如权利要求7-11中任一项所述的清洁组合物，进一步包括至少一种稳定剂。
13.一种清洁组合物，包括至少0.0001重量百分比的至少一种如权利要求1-7中任一项所述的枯草蛋白酶变体，和可选的至少一种适宜的添加剂成分。
14.一种清洁的方法，所述方法包括步骤: a)将包括织物的表面和/或物品与如权利要求7-13中任一项所述的清洁组合物相接触；和 b)可选地洗涤和/或漂洗所述表面或物品。
15.一种动物饲料，包括至少一种如权利要求1-7中任一项所述的枯草蛋白酶变体。
16.一种 食物加工组合物，包括至少一种如权利要求1-7中任一项所述的枯草蛋白酶变体。
【文档编号】C12N9/56GK104130993SQ201410363913
【公开日】2014年11月5日 申请日期:2009年6月3日 优先权日:2008年6月6日
【发明者】V·Y·阿列克谢耶夫, L·G·卡斯康-佩雷拉, A·比萨奇科, J·T·小凯利斯 申请人:丹尼斯科美国公司