抗发泡剂、缓冲剂、中和剂、pH调节剂、着色剂、脱色剂、润肤剂、乳化剂、乳 液稳定剂、增黏剂（viscositybuilders)、保湿剂、添味剂（odorants)、防腐剂、抗氧化剂、 化学稳定剂、增稠剂、硬化剂、或悬浮剂。
[0071] 依据本发明多种实施例，所述药物组合物可调制成各种适合经皮递送的剂型，如 溶液、喷剂、气雾剂、泡沫、霜剂、洗剂、软膏、凝胶或敷料。
[0072] 根据本公开的可任选实施例，此药物组合物中所述合成肽的含量为约0. 1 _ 100 1^;较佳为约1-25 1^。举例来说，合成肽的浓度可为约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.3、 0?7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、 85、90、95或100yM。具体而言，下文实施例中针对约20克重的小鼠所用的浓度为约25yM。 本发明所属技术领域具有通常知识者可基于本说明书提出的动物给药剂量计算出本发明 合成肽或药物组合物的人体等效剂量（HE?。譬如，美国食品暨卫生管理局（FDA)已批准了 工业指南，题为"成年健康志愿者临床治疗实验中最大安全起始剂量的估算"（Estimating theMaximumSafeStartingDoseinInitialClinicalTrialsforTherapeuticsin AdultHealthyVolunteers)〇
[0073] 在又一方面中，本发明提出了一种用以预防和/或缓和个体的皮肤老化的方法。 所述个体可以是任何哺乳动物，包括人类。根据本公开的原则和精神，所述皮肤老化由UV 辐射引起。
[0074] 于一实施例中，上述方法包含对该个体给予有效量的根据本发明上述方面/实施 例的合成肽，藉使所述肽经皮递送至个体的真皮。
[0075] 于可任选的实施例中，可将所述合成肽配制为上述本发明方面/实施例所述的药 物组合物。
[0076] 于一实施例中，可将所述药物组合物以局部施用至该个体的皮肤，在使用或不使 用外来刺激的情形下，所述合成肽或药物组合物经皮递送至该个体的真皮。
[0077] 在不使用外来刺激时，可将该药物组合物局部涂敷、涂抹、按摩、喷涂或其它方式 施用至该个体的皮肤上。此时，所述药物组合物较佳可包含至少一种任选的上文所述的穿 透促进剂。或者或此外，亦可根据上文所述的方法，将合成肽包裹以促进合成肽的经皮递送 效率。
[0078] 已知有多种外来刺激可增加皮肤对化合物（如本发明合成肽）的通透性。所述的 外来刺激包括但不限于：机械刺激、电刺激、热刺激、超声波刺激或无线射频刺激。于实际操 作中，可在将上述组合物施用至皮肤之前、同时或之后，对皮肤施加此外来刺激。相似地，搭 配外来刺激来协助所述药物组合物或合成肽之投递时，组合物中亦可任选的包含上述穿透 促进剂和/或微泡形成载体。
[0079] 于一实施例中，可利用具有微结构的施用器对皮肤施加机械刺激；上述施用器如 微针系统或微通道系统。微针系统可具有多个实心或中空的微针，微针的长度约为100-1000UM。采用实心微针系统时，可将本发明合成肽或药物组合物涂布于每一微针的尖端，施 用时，微针会穿过角质层并停留于皮肤中，因而可将本发明合成肽或药物组合物递送至真 皮。使用中空微针系统时，可将组合物调制为液态，而后将其填充于每一微针内部的空腔， 施用后，微针穿透皮肤，使液体由装置流入皮肤的真皮内。或者是，可将本发明的药物组合 物局部施用于皮肤上，而后将具有多个微针的微通道系统压到皮肤上，而使得多根微针穿 过皮肤（穿透深度小于100微米），藉以在皮肤上行成多个微通道，而使得该药物组合物能 够经皮递送。又或者是，可先于皮肤上形成上述微通道之后，再将本发明药物组合物局部施 用于皮肤上。
[0080] 此外，本公开任选实施例的合成肽或局部给予的药物组合物可在指定条件下给予 (如特定的湿度或温度）。譬如在较为温暖潮湿的条件下给药可促进合成肽在目标位置的 吸收。
[0081] 下文提出多个实施例来说明本发明的某些方面，以利本发明所属技术领域中具有 通常知识者实施本发明。不应将这些实施例视为对本发明范围的限制。据信本领域技术人 员在阅读了本文的描述后，可完整利用本发明。本文所引用的所有公开文献，其全文均以引 用的方式纳入本文。
[0082] 实验例
[0083] 材料与方法
[0084]〈材料〉
[0085]DMEM培养基、胎牛血清（FBS)与0.25%胰蛋白酶皆购自英杰生命技术有限公 司（Invitrogen，加利福尼亚，卡尔斯巴德）。轻矿物油、甘油、二甲亚砜（DMS0)、牛血清 白蛋白（BSA)、5_ 溴-2' -脱氧尿苷（简称fcdU)、Hoechst33258 染料、Hoechst33342 染 料、抗-肌动蛋白抗体与其它化学材料皆购自西格玛奥德里奇（Sigma-Aldrich，圣路 易斯，密苏里州）。分散酶II与I型胶原酶购自罗氏（印第安纳州，印第安纳波利斯）。 抗-BrdU抗体（GTX42641)、抗-MMP-1抗体与抗-波形蛋白抗体（GTX100619)皆购自基泰 (GeneTex，台北，台湾）。抗-胶原蛋白1A1抗体购自圣克鲁斯生物技术公司（SantaCruz Biotechnology，加利福尼亚，圣克鲁斯）。各种焚光染料结合的二级抗体皆购自生物传奇公 司（BioLegend，加利福尼亚，圣地亚哥）。苏木精与曙红（H&E)染料购自默克（美国新泽西 州，雷威（Rayway))。
[0086] 合成FITC-结合之29-聚体与其它短合成肽（包括29-聚体（SEQIDN0:3)、24-聚 体（SEQIDNO: 5)、20-聚体（SEQIDNO: 6)与 18-聚体（SEQIDNO: 7))，并将其N端乙酰 化、C端酰胺化而进行修饰。然后以质谱仪（金斯瑞，新泽西州皮斯卡塔市）表征修饰的肽 (纯度>95% )。以DMS0重构各PEDF衍生的短合成肽（所述29-聚体、24-聚体或20-聚 体，下文称为PEDF肽），制成浓度为5mM的储备溶液，并储存于-20°C中以供后续使用。
[0087]将白凡士林（10%w/w)、甘油（10%w/w)与轻矿物油（1%w/w)和蒸馏水混合，以 制得皮肤软膏。将5y1的PEDF肽储备溶液溶解在lg的乳膏中，以制得含PEDF肽的乳膏。 对于用在载体对照的软膏，将5y1DMS0溶解在lg软膏中。
[0088] 〈动物〉
[0089] 本公开所载实施例所用的所有动物皆饲育于有温度与湿度控制的饲养笼中，饲养 温度约24°C至25°C，光暗循环为12 :12小时。试验过程中提供饮水与标准使用时饲料供任 食。实验计划皆通过马偕纪念医院（新北市，台湾）伦理委员会核准，并遵循国家动物保护 相关规范。
[0090]〈自小鼠真皮分离并培养皮肤成纤维细胞〉
[0091] 由C57BL/6小鼠背部取得完整深度的皮肤组织。小心地由该皮肤切下皮下组织， 并以无菌磷酸盐缓冲盐水（PBS)冲洗三次。之后将组织切成小片（l-2mm3)。在4°C下以 〇. 1 %的分散酶过夜后，移除表皮层；余下的真皮组织在37°C下以0. 1 %的胶原酶I处理4 小时。透过离心（400g，5分钟）收集消化的细胞，并重新悬浮于高葡萄糖浓度的DMEM培养 基中，上述培养基中添加了FBS(10% )、L-谷酰胺（2mM)与青霉素/链霉素（1% )。以每 平方厘米IX103个细胞的密度将细胞接种于组织培养板上（福康实验室设备公司（Falcon Labware)，美国新泽西）上，并于37°C与5%二氧化碳的环境下维持。24小时后，弃置培养 基以移除未吸附细胞，并补充新鲜培养基。欲进行继代时，利用0.25%胰蛋白酶/EDTA)来 收集几近长满的细胞。
[0092] 〈WS-1细胞培养〉
[0093] 人皮肤成纤维细胞WS-1细胞系取自财团法人食品工业发展研宄所（新竹，台湾）。 在湿度调节的培养箱内于37°C、5%二氧化碳的条件下，将WS-1细胞以单层形式培养于培 养瓶中。细胞在10%FBS-DMEM中培养，该培养基添加了L-谷酰胺（2mM)、非必须氨基酸 (0.ImM)与青霉素/链霉素（1% )。欲进行继代时，利用0.25%胰蛋白酶/EDTA来收集几 近长满的细胞。
[0094]〈组织学〉
[0095] 皮肤样品经4%多聚甲醛固定后，以一系列浓度梯度的乙醇脱水，再以石蜡包埋。 将组织切成约5-ym的薄片。于使用前，在二甲苯中移除固定样品的石蜡，并以一系列浓度 梯度的乙醇恢复。
[0096]利用苏木精与曙红（H&E)染色进行一般组织学观察。根据制造商所述方法，利用 麦森三色染剂（西格玛奥德里奇公司，圣路易斯，密苏里州）将脱蜡的皮肤组织切片染色。 以尼康Eclipse80i光学显微镜观察样品并撷取影像（原始倍率：400倍）。欲对胶原蛋 白面积进行半定量分析时，在光学显微镜下自每一玻片选取10个视野，并利用Image-Pro Plus4. 5. 1系统（传媒控制公司（MediaCybernetics))来测量整个切片面积中，经蓝色染 色之区域的面积（mm2/mm2)。
[0097]〈免疫荧光染色与BrdU染色〉
[0098] 细胞经4%甲多聚醛固定后后，以冷甲醇处理2分钟，接着在室温下以1NHC1处理 1小时，而后再进行免疫荧光染色。
[0099] 欲进行动物实验时，在DMS0中重构BrdU，获得储备溶液（80mM)。将10y1的BrdU 储备溶液和90y1的PBS混合后，经腹膜内注射至小鼠体内，并于16小时后将小鼠安乐死。 将经甲醛固定与石蜡包埋的皮肤样品置于二甲苯中，以移除石蜡，并以一系列浓度梯度的 乙醇恢复。接着将样品在室温下和INHC1接触1小时，再进行后续的免疫荧光染色分析。
[0100] 利用抗-BrdU多克隆抗体与若丹明结合的驴-抗-兔-IgG来侦测经BrdU标记的 DNA。接着，以Hoechst33258染剂（蓝色）将细胞核进行对比染色。
[0101] 〈免疫印迹分析〉
[0102] 在冰冷的裂解缓冲液中使皮肤组织匀浆，该裂解缓冲液含有20mMHEPES(pH 7.4)、150mMNaCl、l%SDS、lmM乙二胺四乙酸（EDTA)、5mM苯基甲磺酰氟（PMSF)与ImM二 硫苏糖醇OTT)，1%TritonX-100,以及新加入的蛋白酶抑制剂混合物（购自罗氏，印第安 纳州，印第安纳波利斯）。接着将所得均质物在4°C下以12, 000g离心30分钟，收集上清液 储存于-70°C。利用Bradford分析法来测定裂解物中的蛋白质成分。使用上述裂解缓冲液 制备全细胞裂解物。接着将溶解物等份以SDS-PAGE分离后，电转到聚偏氟乙烯（PVDF)膜 (密理博（Millipore);得克萨斯州，贝德福德）上，而后进行免疫印迹分析。
[0103]免疫印迹分析中所用的抗体包含抗-I型胶原蛋白1A1抗体（稀释倍率：1 :1000)、 抗-MMP-1抗体（稀释倍率：1 :500)以及抗-0-肌动蛋白抗体（稀释倍率1:10000)。接着利 用适当的IgG-HRP二级抗体与ECL制剂（安玛西亚公司（Amersham);伊利诺斯州，阿灵顿山 庄）来侦测目标蛋白质。利用GS-700型成像比重计（伯乐公司（Bio-RadLaborator