抗IL-6受体Tocilizumab的模拟表位肽及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种多肽，具体涉及抗IL-6受体Tocilizumab的模拟表位肽及其应 用。
【背景技术】
[0002] 类风湿关节炎（RA)是一种慢性、系统性、多向性的炎性自身免疫性疾病，主要累 及手足小关节，最大的特征就是持续性的滑膜炎，症状包括关节疼痛、关节肿胀以及进展性 的关节破坏，最终导致患者的残疾。RA在欧洲文艺复兴时期被发现，目前全世界范围内成人 的发病率为0. 5~1%。
[0003] Zvaifler最早在70年代提出RA的致病因素是类风湿因子，在他的理论中，类 风湿因子形成了免疫复合物并且激活了补体途径，炎症因子聚集到类风湿患者关节的 周围，激活并引起该关节的破坏（Zvaifler, N. J. The immunopathology of joint inflammation in rheumatoid arthritis. Adv. Tmmunol. 16, 265 - 336,1973)。而在 1976年，Stastny证明了类风湿关节炎同人类特异性白细胞抗原（HLA)-DR基因有关，转 录产物残留在MHC并被抗原提呈，该研宄认为T细胞在类风湿关节炎发病中具有重要作 用(Stastny, P. Mixed lymphocyte cultures in rheumatoid arthritis. J. Clin. Invest. 57, 1148 - 1157, 1976)。到了 80年代的晚期，新的分子克隆技术的诞生并且用 于检测类风湿关节炎病人的滑膜和滑膜液，从而为T细胞在类风湿关节炎发病中的作用 提供了证据。令人震惊的发现是白介素-2(IL-2)和干扰素 γ (IFN-γ)等所有T细胞 的产物在类风湿关节炎的滑膜液中的浓度相当低，而巨噬细胞和纤维细胞的产物例如 白介素-1(11^-1)、白介素-6(11^-6)、白介素-15(11^-15)、白介素-18(11^-18)、肿瘤坏死 因子-a (TNF-α )等则相当丰富（Williams, R. 0. , Mason, L. J. , Feldmann, Μ. & Maini, R. Ν. Synergy between anti-CD4 and antitumor necrosis factor in the amelioration of established collagen-induced arthritis. Proc. Natl Acad. Sci. USA 91, 2762 - 2766, 1994; Lubberts, E. et al. IL-17 promotes bone erosion in murine collagen-induced arthritis through loss of the receptor activator of NF_kB ligand/osteoprotegerin balance. J. Immunol. 170, 2655 - 2662, 2003)。纤维素 样的滑膜细胞和巨噬细胞样的滑膜细胞产生的各种细胞因子通过间质细胞和抗原提呈细 胞激活它们自己或者周围的细胞，从而加重类风湿关节炎。在过去的十年里，通过生物工程 制造的各类缓解疾病症状的抗类风湿药物（DMRDs)逐步进入类风湿关节炎的治疗，这些 药物主要以缓解自身炎症为目的，延缓患者的关节破坏，从而大大提高了患者的治疗效果 和生活质量（Smolen，J. S. et al. New therapies for the treatment of rheumatoid arthritis. Lancet 370, 1861 - 1874，2007)。DMARDs的成功在于它们能作用于前炎症因 子TNF-α，这激发了研宄者们对其他细胞因子的研宄兴趣。在这些细胞因子中，白细胞介 素-6(IL-6)逐渐脱颖而出，成为了一个研宄热点。
[0004] IL-6是一个多效性的细胞因子，最早被定义为T细胞起源的B细胞分化因子， 能诱导B细胞分化成为能够产生抗体的楽细胞（Yoshizaki K et al. Isolation and characterization of B cell differentiation factor (BCDF) secreted from a human B lymphoblastoid cell line. J Immunol 132:2948 - 2954，1984)，它主要由单核细 胞，滑膜纤维细胞，B细胞和T细胞分泌，在免疫系统、炎症和肝细胞急性应激反应等生理 功能调节中起着重要的作用。IL-6调节功能的缺失，可能会破坏免疫功能从而引起一系 列自身免疫系统炎症疾病如类风湿关节炎、青少年特发性关节炎、Castelman综合症和克 罗恩病等。IL-6的过度分泌同样会使其成为一个生长因子或抗凋亡因子，从而引起一些 恶性疾病如多发性黑色素瘤和肾癌。IL-6的信号转导主要由一个受体系统组成，包括受 体结合膜蛋白IL-6受体（MIL-6受体）和信号传导膜蛋白gpl30, IL-6的一种可溶形 式（SIL-6受体）缺乏胞浆结构也能够结合GP130从而引发下游的信号传导（Nishimoto， N. & Kishimotoj T. Interleukin 6: from bench to bedside. Nature Clin. Pract. Rheumatol. 2, 619 - 626，2006) D
[0005] 近年来，不同的资料均提示了 IL-6在类风湿关节炎的发病和发展过程中具有重 要作用，类风湿病人滑膜的IL-6分泌增加，病人滑膜液中IL-6的表达量逐渐增加（Sack， U. et al. Interleukin-6 in synovial fluid is closely associated with chronic synovitis in rheumatoid arthritis. Rheumatol. Int. 13. 45 - 51, 1993; Madhokj R. et al. Serum interleukin 6 levels in rheumatoid arthritis: correlations with clinical and laboratory indices of disease activity. Ann. Rheum. Dis.52, 232 -234，1993)。IL-6在类风湿关节炎的发展中被认为具有以下功能：①激活内皮细胞产生化 学因子和粘附分子，从而在炎症部位聚集白细胞（Romano，M.，M. Sironi，C. Toniatti， N. Polentaruttij P. Fruscellaj P. Ghezzij R. Faggionij W. Luinij V. van Hinsberghj S. Sozzanij et al. Role of IL-6 and its soluble receptor in induction of chemokines and leukocyte recruitment. Immunity. 6:315 - 325，1997);②刺激滑膜 纤维细胞增殖（Mihara，M·，Υ· Moriya，Τ· Kishimoto，and Υ· Ohsu gi. Interleukin-6 (IL-6) induces the proliferation of synovial fibroblastic cells in the presence of soluble IL-6 receptor. Br. J. Rheumatol. 34:321 - 325，1995)和破骨细胞的增 殖（Tamura，T. , Ν. Udagawaj Ν. Takahashij C. Miyauraj S. Tanaka，Υ. Yamadaj Υ. Koishiharaj Υ. Ohs μ gi，Κ. Kumakij and Τ. Taga. Soluble interleukin-6 receptor triggers osteoclast formation by interleukin 6. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 90:11924 - 11928，1993);③激活肝脏的急性炎症反应基因（Poli，V.，and G. Ciliberto. Transcriptional regulation of acute phase genes by IL-6 and related cytokines. In Liver Gene Expression. F. Tronche and M. Yanivj editors. R. G. Landes Company Biomedical Publishers，Austin. 131-151，1994)，从而导致炎性因子 的释放。
[0006] 目前，用于治疗类风湿关节炎的药物主要包括激素，非留体抗炎药，改善病情的抗 风湿药物（DMRDs)和新兴的生物制剂。相对于传统药物，生物制剂直接作用于主要的炎症 因子，可更迅速、有效地缓解症状，抑制关节结构破坏。目前，用于治疗RA的生物制剂有单 克隆抗体(单抗)、细胞因子以及拮抗剂，包括抗T淋巴细胞表面分化抗原单抗、抗白介素-2 受体（IL-2R)单抗、抗CD54受体单抗、抗肿瘤坏死因子（TNF)-α抗体、重组人白细胞介 素-1受体拮抗剂等。
[0007] 在2010年经FDA批准的Tocilizumab (ROACTEMRA)抗体是一个新型的靶向 IL-6受体的单抗，也是第一个临床试验证明单用疗效好于抗TNF的单抗以及MTX单抗 (Jones G, Sebba A, Gu J et al. Comparison of tocilizumab monotherapy versus methotrexate monotherapy in patients with moderate to severe rheumatoid arthritis: the AMBITION study. Ann Rheum Dis, 69: 88;96, 2010; Kremer JM, et al. Tocilizumab inhibits structural joint damage in rheumatoid arthritis patients with inadequate responses to methotrexate: results from the double-blind treatment phase of a randomized placebo-controlled trial of tocilizumab safety and prevention of structural joint damage at one year. Arthritis Rheum. 63(3) :609-21, 2011)。同时该抗体与DMARDs同用也显示了其超越DMARDs单用的治疗效果 (ffeinblatt M, et al. Safety of Tocilizumab monotherapy and TCZ plus DMARDs in a US RA population with inadequate response to biol