对神经激肽-1受体蛋白特异性识别的p物质多肽探针及其制备与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及肿瘤诊断的药物领域，具体涉及的是对神经激肽-1受体蛋白特异性 识别的P物质多肽探针及其制备与应用，该P物质多肽探针为新型多肽二聚体和多肽聚合 物，通过特异性结合肿瘤中的神经激肽-I (NK-I)受体蛋白来检测肿瘤。
【背景技术】
[0002] 肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，在我国城市人口恶性肿瘤死亡原因中，肺癌居首 位，近几年来世界各国肺癌的发病率和死亡率都有明显增高的趋势，但其治疗效果在近10 中没有明显提高，总的治愈率为10%左右。目前早期诊断缺乏特异性指标和方法，且部分影 响诊断性分期的检查难以普及实施，肺癌患者早期无特异性症状，故就诊时多为中晚期。
[0003] 靶向治疗，即在细胞分子水平上，针对已经明确的致癌位点（该位点可以是肿瘤细 胞内部的一个蛋白分子，也可以是一个基因片段)，来设计相应的治疗药物，药物进入体内 会特异地选择致癌位点来相结合发生作用，使肿瘤细胞特异性死亡，而不会波及肿瘤周围 的正常组织细胞，该治疗方法已逐渐成为今后研究的主要方向之一。肿瘤组织是一个特殊 的微环境，其中包含很多在正常细胞中没有或含量很低的蛋白，如神经激肽-1受体蛋白。 该蛋白在肺癌的多种细胞中表达，如内皮细胞、上皮细胞、平滑肌细胞，并促进这些细胞的 增长及转移。故该蛋白可作为检测肺癌的一个靶标，通过检测NK-I受体蛋白来诊断肺癌。
[0004] P物质属于速激肽家族，其氨基酸序列为MLGFFQQPKPR，参与多种生理过程，近年 来的研究发现，P物质作为一种神经递质，可以通过自分泌或者旁分泌，与其受体NK-I结 合。这表明，P物质是一个很多前景的用于肺癌诊断的靶向性分子，并有可能对其他恶性肿 瘤也有潜在应用价值。事实上，NK-I受体蛋白不仅在肺癌中有表达，也存在于卵巢癌、乳腺 癌、前列腺癌、神经胶质瘤、结肠癌中，故含有P物质的探针可特异性检测以上多种肿瘤。但 到目前为止，没有报道利用P物质探针通过磁成像和荧光成像双功能成像来检测NK-I受体 蛋白的文献，故本发明首次提出了利用P物质多肽探针检测肿瘤。其优点在于通过超分子 的思想合成多肽二聚体和多肽聚合物，通过磁成像和荧光成像双功能成像两种手段提高检 测神经激肽-1受体蛋白的灵敏性。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种对神经激肽-1受体蛋白特异性识别的P物质多肽探 针及其制备与应用，该多肽探针是一类新型的用于制备具有多种肿瘤诊断作用的多肽二聚 体和多肽聚合物，该多肽二聚体和多肽聚合物通过双功能螯合基团将金属Gd 3+标记到多肽 分子上，在体内经标记的P物质多肽探针与NK-I受体蛋白特异性结合浓聚到肿瘤部位，利 用磁成像和光学成像技术检测神经激肽-1受体蛋白，以提高检测灵敏性。
[0006] 本发明的目的是通过如下技术方案实现：
[0007] 本发明提供对神经激肽-1受体蛋白特异性识别的P物质多肽探针，其特征在 于：所述P物质多肽探针为多肽二聚体或多肽聚合物，其单体由一段P物质氨基酸序列 MLGFFQQPKPR、双功能螯合基团、荧光基团和三联吡啶基团通过赖氨酸连接而成。
[0008] 本发明所述的P物质多肽探针，优选的是，所述多肽二聚体的单体氨基酸序列为： MLGFFQQPKPRKKKKKK(tpy)KK(Dye)DOTA。
[0009] 本发明所述的P物质多肽探针，优选的是，所述多肽聚合物的单体氨基酸序列为： MLGFFQQPKPRKKKKKK(tpy)K(tpy)KK(Dye)DOTA。
[0010] 本发明所述的P物质多肽探针，P物质氨基酸序列后加一系列赖氨酸一是为了增 强肽链的水溶性，二是为了尽量远离前面的P物质序列，避免加入大基团可能会改变P物质 的结构和功能。本发明所述的P物质多肽探针，在17和19位之间加一个赖氨酸是为减小 空间位阻，所述两个基团顺序可以互换。
[0011] 本发明所述的P物质多肽探针，优选的是，所述多肽聚合物的聚合度为3-5。
[0012] 本发明所述二聚体的肽链上有一个三联吡啶基团，只能形成二聚体；本发明所述 的多肽聚合物单体中有两个三联吡啶基团，理论上可以由很多个单体通过共价键形成，但 在本申请中，由于空间位阻等原因导致所述多肽聚合物的聚合度在3-5。
[0013] 本发明所述的P物质多肽探针，优选的是，所述双功能螯合基团为D0TA，所述DOTA 是三叔丁基1，4, 7, 10-四氮杂环十二烷-1，4, 7, 10-四乙酸。
[0014] 所述双功能螯合基团能够螯合金属Gd3+、F19、Mn 2+。
[0015] 本发明所述双功能螯合基团优选螯合金属Gd3+，目前用于临床上的造影剂主要是 Gd3+配合物造影剂。
[0016] 所述双功能螯合基团，由于多肽没有直接与金属形成稳定结合的功能团，所以解 决的方法是在多肽上修饰上一些能与金属离子牢固结合的基团。本发明双功能螯合基团是 具有易与多肽氨基酸残基结合的基团，又具有能与金属离子稳定络合的官能团，通过它的 作用，可以形成磁成像金属一双功能螯合剂一抗体（多肽）的复合物。本发明中使用DOTA 作为双功能螯合剂，该螯合剂螯合金属后具有良好的稳定性。
[0017] 本发明所述的P物质多肽探针，优选的是，所述三联吡啶基团选自4' -(4-羧甲 氧基苯基）-2, 2' ： 6'，2' ' -二联批陡)、4' - (4_竣基苯基）_2, 2' ： 6'，2' ' -二联批陡、4' -竣 基-2,2' ： 6'，2''-三联吡啶中的一种。
[0018] 4' - (4-羧甲氧基苯基）-2, 2' ： 6'，2' ' -三联吡啶结构式：
【主权项】
1. 对神经激肽-1受体蛋白特异性识别的P物质多肽探针，其特征在于：所述P物质多 肽探针为多肽二聚体或多肽聚合物，其单体由一段P物质氨基酸序列MLGFFQQPKPR、双功能 螯合基团、荧光基团和三联吡啶基团通过赖氨酸连接而成。
2. 根据权利要求1所述的P物质多肽探针，其特征在于：所述多肽二聚体的单体氨基 酸序列为以1^^^〇〇?即服1?1?1((丨? 7)1?(076)0(7^;所述多肽聚合物的单体氨基酸序列为： MLGFFQQPKPRKKKKKK(tpy)K(tpy)KK(Dye)DOTA。
3. 根据权利要求1所述的P物质多肽探针，其特征在于：所