放射性卤素标记的小分子环肽、组合物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药学领域，具体涉及一种放射性卤素标记的小分子环肽、含有该小 分子环肽的组合物及该小分子环肽作为肿瘤显像剂的应用。
【背景技术】
[0002] 肿瘤的侵袭转移严重影响患者的预后，如何进行早期诊断是临床亟待解决的关键 问题。
[0003] 基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinases, MMPs)是一组含Zn+的、参与细胞 外基质（extra-cellularmatrix，ECM)降解的最重要的一类蛋白酶。由于MMPs能够对基底 膜和细胞外基质进行分解，造成肿瘤的侵袭和转移，并且，MMPs还可以调节肿瘤微环境中的 许多组分，进而促进肿瘤的发生和发展 [1]，因此，以MMPs为靶点制备分子探针进行诊断是 目前研究中的热点。
[0004] 明胶酶(MMP-2、9)是MMPs家族中重要的亚型，大量研究发现，其在卵巢癌、前列腺 癌、乳癌、结肠癌及肾癌等多种肿瘤中均有高表达 [2]。MMP-2与卵巢肿瘤的生物学行为尤其 密切，它的表达与卵巢癌的侵袭、转移、肿瘤恶性程度及病情预后相关。
[0005] 小分子环肽类化合物因其靶向性好、体内稳定性佳，作为特异性的明胶酶抑制剂 吸引了众多医药研究人员的注意。目前有研究报道 [3,4]采用Cy5. 5对环肽c(KAHWGFTLD) NH2进行标记，并采用标记物对多种活体肿瘤模型进行光学成像，但该标记物的荧光成像距 离短，组织穿透性差，灵敏度不高，难以对深部组织定位表达，只能作为简单的动物模型进 行基础研究，缺乏临床应用前景。
[0006] [1]. SchererRL, McintyreJO, MatrisianLM. CancerMetastasisRev, 2008, 27(4) :6 79-690.
[0007] [2]. KarakiulakisG, PapanikolaouC, JankovicSMetal. InvasionMetastasis, 199 7,17:158 - 168.
[0008] [3]. ffangff, ShaoR, WuQ, KeS, McMurrayJ, LangFFJr, Charnsangavej C,GelovaniJG, LiC. MolImagingBiol. 2009Nov-Dec;11(6):424-33.
[0009] [4]. LeeCM, JangD, CheongSJ, JeongMH, KimEM, KimDff, LimST, Sohn ΜΗ, JeongHJ. In tJCancer. 20120ctl5;131(8):1846-53.
【发明内容】
[0010] 本发明的目的是提供一种放射性卤素标记的小分子环肽、含有该放射性卤素标记 的小分子环肽的组合物以及该放射性卤素标记的小分子环肽作为肿瘤显像剂的应用，以解 决上述问题。
[0011] 为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
[0012] 放射性卤素标记的小分子环肽，其特征在于，为式（I)所示的化合物：
[0013] C(X1HWGFTLx2)-Y-Z (I)
[0014] 其中，C (X1HWGFTLx2)为8-10个氨基酸结合所形成的环肽，X1和X 2均为至少一个 氨基酸基团；Y为螯合配体；Z为含有放射性卤素的金属复合物，与Y螯合，其中，环肽上含 有游离氨基，氨基与螯合配体结合，放射性卤素为 18F,通过金属与Y螯合。
[0015] 另外，本发明所涉及的放射性卤素标记的小分子环肽还可以具有这样的特征：其 中，C(X1HWGftlx 2)为 c(Kahwgftld)Nh2，即为 C6,其结构为：
[0016]
[0017]另外，本发明所涉及的放射性卤素标记的小分子环肽还可以具有这样的特 征：其中，Y为1，4, 7-三氮环壬烷-1,4, 7-三乙酸（ΝΟΤΑ)或1，4, 7, 10-四氮杂环十二 烷-1，4,7, 10-四羧酸（D0TA)。
[0018] 另外，本发明所涉及的放射性卤素标记的小分子环肽还可以具有这样的特征：其 中，Z为Al18F复合物。
[0019] 并且，本发明公开了一种组合物，其特征在于，包括上述放射性卤素标记的小分子 环肽和医学上可接受的载体。
[0020] 并且，本发明还公开了上述放射性卤素标记的小分子环肽作为肿瘤显像剂的应 用。
[0021] 发明的作用与效果
[0022] 根据本发明提供的放射性卤素标记的小分子环肽，由于c^HWGFTUy能够特异 性的作用于ΜΜΡ_2、9,从而使放射性卤素标记的小分子环肽能够靶向的到达肿瘤细胞。
[0023] 另外，由于具有18F,因此能够用正电子发射断层摄影法（PET)对放射性卤素标记 的小分子环肽在生物体内的分布情况进行扫描成像，显示出放射性卤素标记的小分子环肽 的高摄取区域，即为肿瘤细胞区域。采用PET进行成像，不仅灵敏度高，结果准确，也可以无 仓 1J、动态地检测。
[0024] 另外，由于18F穿透性强，能够对深部组织进行定位表达，显像轮廓清晰，具有较好 的临床应用前景，能够为医药工作者的后续研究或癌症的诊断提供较好的依据。
[0025] 另外，由于具有螯合配体，螯合配体能够与含有卤素的金属复合物进行螯合，所形 成的螯合物热力学和动力学稳定性高，在体内可保持完成，因此能够更好的显像。
【附图说明】
[0026] 图1是本发明所涉及的放射性卤素标记的小分子环肽在实施例中的HPLC谱图；
[0027] 图2是本发明所涉及的放射性卤素标记的小分子环肽在实施例中体外稳定性测 试的HPLC谱图；
[0028] 图3是本发明所涉及的放射性卤素标记的小分子环肽在实施例中的PET/CT全身 静态扫描图；
[0029] 图4是本发明所涉及的放射性卤素标记的小分子环肽在实施例中的肿瘤时间-放 射性计数曲线图；以及
[0030] 图5是本发明所涉及的放射性卤素标记的小分子环肽在实施例中的SK0V-3卵巢 癌免疫组化染色图。
【具体实施方式】
[0031] 以下结合附图，对本发明所涉及的放射性卤素标记的小分子环肽、组合物及其应 用做进一步的描述。
[0032] 〈实施例〉
[0033] 在本实施例中，选择的螯合配体为Ν0ΤΑ，含有放射性卤素的金属复合物为Al18F 复合物，小分子环肽为c (KAHWGFTLD) NH2，即为C6。本实施例选择c (KAHWGFTLD) NH-NOTA (C6-N0TA)进行标记，C6-N0TA由杭州中肽生化有限公司采用固相合成法合成。
[0034] I. C6-NOTA-Al-18F 的制备
[0035] 步骤一：在回旋加速器上用核反应180(P，n)18F制得[ 18F]r;
[0036] 步骤二：向C6-N0TA中加入灭菌注射用水溶解，配制成lmg/ml的溶液；
[0037] 步骤三：取30 μ 1C6-N0TA的灭菌注射用水溶液，分别加入400 μ 1的乙腈、6 μ 1 的2mmol/L氯化铝水溶液、10 μ 1的醋酸和60 μ 118F_ (20mCi)的生理盐水溶液，KKTC反应 15min，加入15mL注射用水稀释，过C18柱，用25ml注射用水冲洗C18柱两次，去除多余的 氟离子和非放射性杂质，再用300 μ IUOmmol的氯化氢乙醇溶液淋洗C18柱，并收集含有标 记物的淋洗液，得到9. 7mCi的标记物的氯化氢乙醇溶液。
[0038] 采用专用放射性检测器对标记物进行HPLC分析。色谱分析柱为C18柱 (4. 6 X 250mm)，流动相A为水(含0. lv%三氟乙酸)，流动相B为乙腈(含0. lv%三氟乙酸)。 梯度分析条件：流速为lml/min ;0~2min，A/B=95/5,32minA/B=35/65。检测波长为254nm 和 218nm。
[0039] 图1是本发明所涉及的放射性卤素标记的小分子环肽在实施例中的HPLC谱图。
[0040] 如图1所示的HPLC分析结果显示：C6-N0TA-A1-18F的放射性出峰时间为19. 3min， 放射化学纯度>95%，标记率为46. 4%。
[0041] 2.体外稳定性测定
[0042] 取标记物用生理盐水稀释，于37°C放置，放置时间为Oh、2h和4h时，分别取样测定 放化纯。
[0043] 图2是本发明所涉及的放射性卤素标记的小分子环肽在实施例中体外稳定性测 试的HPLC谱图。
[0044] HPLC测试结果如图2所示,a为放置时间为Oh时的HPLC谱图,b为放置时间为2h 时的HPLC谱图，c为放置时间为4h时的HPLC谱图。结果显示，C6-N0TA-A1-18F在生理盐 水中放置〇h、2h及4h，放化纯变化不大，且放置4h，其放化纯仍大于95%。说明本实施例所 提供的C6-N0TA-A1- 18F化学性质较为稳定，即使放置时间延长，放化纯也基本保持不变。
[0045] 3·体内PET显像
[0046] 3. 1PET/CT全身静态显像
[0047] 荷SK0V-3人卵巢癌裸鼠4只，置于MicroPET扫描仪（Inve