一种槐属二氢黄酮g的富集方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物领域，尤其涉及一种槐属二氢黄酮G的富集方法及其在制备抗肿 瘤药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 癌症是起源于上皮组织的恶性肿瘤，是恶性肿瘤中常见的一类，一直是威胁人类 生命的严重疾病之一，世卫组织称，中国的癌症发病率正在大幅上升，2014年中国约有220 万人死于癌症，因此寻找有效的抗癌药物已成为癌症治疗的当务之急。我国具有丰富的中 草药资源，目前已发现多种中草药具有抗癌效果，如苦参、白花蛇舌草、苍耳、蒲公英、斑蝥 等。但由于中草药中成分复杂，有效成分含量较低，导致了中草药的抗癌效果等不到有效的 发挥，因此，需要对中草药中有效成分进行富集。
[0003] 中药苦参为豆科槐属植物苦参（S. flavescens)的干燥根，其性寒味苦，有清热解 毒、明目止泪、祛风杀虫、安五脏、转身定志的作用。从中分离出的主要化学成分可分为两大 类，即苦参生物碱和苦参黄酮，其中苦参黄酮具有抗肿瘤活性已有多篇文献报道，中国专利 CN101091707A公开了苦参黄酮类化合物或其混合物可用于制备抑制NF-κ B、EGFR、Her-2 或KDR活性的抑制剂或制备肿瘤或炎症的药物，中国专利CN1676521A公开了槐黄烷酮G 具有抗肿瘤活性，对非小细胞肺癌、卵巢癌、皮肤癌、中枢神经系统肿瘤、结肠癌、白血病、肝 癌、食管癌、胃癌、前列腺癌、乳腺癌、宫颈癌、淋巴瘤、肺癌、恶性黑色素瘤等均具有抑制活 性，其中槐黄烷酮G的苦参提取得率为0. 06%。
[0004] 槐属二氢黄酮G (Sophoraflavanone G)又名槐黄烧酮G，化学结构如下：
[0005]
[0006]分子式 C25H28O6,分子量 424. 49,熔点 173 ~175°C。
[0007] 虽然现有技术中对于苦参中槐属二氢黄酮G的抗癌活性已有报道，但由于苦参中 槐属二氢黄酮G的含量较低，提取得率不高，CN1676521A公开的提取方法中槐属二氢黄酮G 的得率不足〇. 1 %，因此，需要开发更加有效的槐属二氢黄酮G的提取和富集方法。
【发明内容】
[0008] 本发明提供了得率明显提高的槐属二氢黄酮G的富集方法及其制备抗癌药物的 用途，其以苦参作为原料，经苦参总黄酮的提取、槐属二氢黄酮G的富集制得高得率、高纯 度的槐属二氢黄酮G。
[0009] 具体的，本发明涉及一种槐属二氢黄酮G的富集方法，具体步骤包括：
[0010] ⑴苦参总黄酮的提取
[0011] 苦参药材，粉碎至通过1~9号筛，采用1~20倍量有机溶剂，经超声、回流、浸渍 或渗漉提取，提取条件为提取1~4次，每次提取时间为5~90min，合并提取液，回收溶剂 至干，获得苦参总黄酮的固形物；
[0012] ⑵槐属二氢黄酮的转化
[0013] 将步骤（1)所得的苦参总黄酮固形物与新制吡啶盐酸盐或Lewis酸混合，在队保 护下，升温至30~150°C反应，反应结束后冷却，加水，放入1_6°C冰箱过夜后过滤，所得固 形物即为槐属二氢黄酮G粗品，其中所述的苦参总黄酮固形物与新制吡啶盐酸盐或Lewis 酸的比例为10 :1-200 ;加入的水与苦参总黄酮固形物的比例为1-40: lml/g ;
[0014] (3)槐属二氢黄酮G的富集过程
[0015] 将步骤（2)所得转化样品湿法或干法上样，通过正相硅胶H柱色谱进行分离，流动 相为石油醚-乙酸乙酯系统、石油醚-丙酮系统或氯仿甲醇系统、二氯甲烷甲醇系统，通过 薄层点样合瓶，收集洗脱部位，相应洗脱部位回收溶剂至干，加二氯甲烷超声复溶，即得大 量白色粉末，离心得固形物，其中槐属二氢黄酮G含量为90~95%，槐属二氢黄酮G的得率 可达0. 2~1. 2%。
[0016] 其中所述的Lewis酸作为脱甲基化试剂包括三氯化铝、氯化锌或碘化锂，其中优 选为三氯化铝。
[0017] 本发明还涉及一种槐属二氢黄酮G的富集方法，其包括以下步骤：
[0018] (1)含槐属二氢黄酮G粗品的制备；
[0019] (2)将步骤（1)所得粗品湿法或干法上样，通过正相硅胶H柱色谱进行分离，流动 相为石油醚-乙酸乙酯系统、石油醚-丙酮系统或氯仿甲醇系统、二氯甲烷甲醇系统，通过 薄层点样合瓶，收集洗脱部位，相应洗脱部位回收溶剂至干，加二氯甲烷超声复溶，即得大 量白色粉末，离心得固形物，其中槐属二氢黄酮G含量为90-95%。
[0020] 另一方面，本发明涉及通过本发明方法富集制备得到的槐属二氢黄酮在制备治疗 癌症药物中的用途，所述癌症优选的为肝癌、胃癌、结肠癌。
[0021] 此外，由于槐属二氢黄酮G为难溶性药物，本发明还涉及将通过本发明方法富集 制备得到的槐属二氢黄酮G制备成合适服用的药物剂型，所述剂型包括片剂、胶囊剂、脂质 体、纳米粒、纳米混悬剂、自微乳、磷脂复合物、肠溶片剂、栓剂等，优选的所述片剂、胶囊剂、 纳米粒为缓控释制剂。
[0022] 有益效果：
[0023] 本发明通过包含转化步骤的槐属二氢黄酮G富集方法，取得了以下的有益效果：
[0024] (1)富集方法简单易行，适用于工业化生产；
[0025] (2)槐属二氢黄酮G的苦参提取得率显著提高；
[0026] (3)槐属二氢黄酮G纯度高，可用于制备槐属二氢黄酮G高纯度对照品；
[0027] (4)槐属二氢黄酮G的各类剂型，尤其是缓控释剂型更加有利于槐属二氢黄酮G抗 癌效果的发挥。
【附图说明】
[0028] 图1 :本发明方法提取的槐属二氢黄酮G的HPLC图；
[0029] 图2 :槐属二氢黄酮G纯品的HPLC图；
[0030] 图3 :槐属二氢黄酮G的1H-NMR谱图；
[0031] 图4 :槐属二氢黄酮G的13C-NMR谱图；
[0032] 图5 :不同pH值的槐属二氢黄酮G缓冲溶液的紫外吸收光谱；
[0033] 图6 :不同pH值的槐属二氢黄酮G缓冲溶液的紫外吸收光谱（简化图）
【具体实施方式】
[0034] 下面将结合实施例、对比例、效果例对槐属二氢黄酮G的富集方法、制剂的制备方 法作进一步的详细说明。
[0035] 实施例1，槐属二氢黄酮G的富集方法
[0036] 1)苦参原材料500g，粉碎后过2号筛，加乙酸乙酯3000mL，超声提取30min，滤过， 残渣加乙酸乙酯3000mL继续超声30min，滤过，合并滤液，在低于50°C的条件下减压回收有 机溶剂至干，得苦参总黄酮样品10. 2g。
[0037] 2)将步骤1)的苦参总黄酮固形物与新制吡啶盐酸盐按照重量比1 :1混合，队保 护条件下，升温至60°C反应。反应4h，冷却，加水100mL，4°C冰箱过夜。过滤，固形物即为槐 属二氢黄酮G的粗品。
[0038] 3)将转化的粗品进行硅胶H柱层析，以石油醚-乙酸乙酯系统为流动相系统，洗 脱；
[0039] 4)石油醚：乙酸乙酯的不同比例配比作为流动相，石油醚：乙酸乙酯的洗脱比例 依次为 1:0. 2、1:0· 4、1:0· 6、1:0· 8、1:L 0、1:L 2、1:5、1:2,最后以乙酸乙酯冲柱，每 200mL 换瓶进行梯度洗脱；
[0040] 5)通过薄层板判断，收集合并石油醚与乙酸乙酯1:0.4的洗脱部分，减压回收溶 剂至干，得淡黄色粉末，加二氯甲烷超声得白色粉末，离心得到固形物I. 2g。该固形物即为 槐属二氢黄酮G，经HPLC面积归一化检测，纯度为92 %，其中槐属二氢黄酮G的HPLC色谱 图见图1，其中HPLC的检测条件为：以甲醇-水为流动相，梯度洗脱（50 %甲醇过渡到100 % 甲醇），梯度洗脱条件：50%甲醇过渡到100%甲醇，25min ;流速为lmL/min。
[0041] 实施例2,槐属二氢黄酮G的富集方法
[0042] 1)苦参原材料500g，粉碎后过1号筛，加60%乙醇30001^，超声提取6011^11，滤过， 残渣加60%乙醇继续超声30min，滤过，合并滤液，在低于50°C的条件下减压回收有机溶剂 至干，得苦参总黄酮样品25. 3g。
[0043] 2)将步骤1)的25. 3g苦参总黄酮样品加入1000 mL干燥的四口反应瓶中，加入吡 啶l〇g，甲醇l〇〇g，升温至40°c，分批慢慢加入5g无水三氯化铝，加完50°C保温反应。TLC 检测，停止反应。降至室温，加少量饱和氯化铵水溶液至反应混合液无固体物存在，加乙酸 乙酯分次萃取。得乙酸乙酯萃取液回收溶剂至干；
[0044] 3)将转化液进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯系统为流动相系统，洗脱；
[0045] 4)石油醚：乙酸乙酯的不同比例配比作为流动相，石油醚：乙酸乙酯的洗脱比例 依次为 1:0. 2、1:0· 4、1:0· 6、1:0· 8、1:L 0、1:L 2、1:5、1:2,最后以乙酸乙酯冲柱，每 200mL 换瓶进行梯度洗脱；
[0046] 5)通过薄层板判断，收集合并石油醚与乙酸乙酯1:0.4的洗脱部分，减压回收溶 剂至干，得黄色粉末，加二氯甲烷超声得白色粉末，离心得到固形物I. 6g。该固形即为槐属 二氢黄酮G，纯度可达90 %。
[0047] 实施例3,槐属二氢黄酮G的富集方法
[0048] 1)苦参原材料500g，粉碎后过2号筛，加甲醇3000mL，超声提取60min，滤过，残渣 加甲醇继续超声30min，滤过，合并滤液，在低于50°C的条件下减压回收有机溶剂至干，得 苦参总黄酮样品20. 2g。
[0049]