从红曲粉中分离高纯度内酯型洛伐他汀的方法
【技术领域】
[0001] [本发明涉及红曲粉中分离内酯型洛伐他汀的新方法，尤其涉及利用柱层析硅胶 解析分离高纯度内酯型洛伐他汀的方法，属于有效物质的提取分离纯化领域。
【背景技术】
[0002] 洛伐他汀是一种常见的治疗高脂血症药物，1976年左右由日本生物化学家远藤章 (End0 Akira)首次从中国红曲粉中发现并分离得到。它是羟甲基戊二酰基辅酶A还原酶 (HMGR)抑制剂，可从根源上抑制胆固醇的合成。在八十年代上市成为新型调血脂药，曾用商 品名为明维欣、洛特、欣露等，其疗效独特，被誉为治疗心血管系统疾病的里程碑，用于治疗 高胆固醇血症和混合型高脂血症。目前，用洛伐他汀或以其为中间体合成的他汀类药物仍 为治疗高脂血症的主打药品。现代研宄表明，洛伐他汀除了可以治疗许多心脑血管疾病以 外，它还有抗炎，抗细胞增殖分化，抗肿瘤，治疗骨质疏松等作用，具有极高的实用价值和经 济价值。
[0003] 现有的洛伐他汀的提取精制工艺主要有两种：一是以Merk公司为代表的一步或 两步硅胶层析法或树脂吸附法，该法虽然终产品质量较高，但步骤多、操作复杂，不利于大 规模工业化生产。另一种是直接利用溶媒转相结晶法，该法虽然操作简便，但最大缺点是粗 粉结晶收率只有50%左右。中国专利CN102432573A公开了"一种制备洛伐他汀的方法"，以 市售红曲发酵物为原料，用乙醇溶液40~60°C下回流，再用超滤膜两次过滤，最后用大孔树 脂吸附，蒸馏水进行反冲，乙醇溶液洗脱，收集洗脱流出液，减压蒸发浓缩而得。该工艺不仅 过程复杂，而且超滤膜价格较贵，成本高；再有大孔树脂第一次全吸附，检测到流出液有洛 伐他汀出来时停止过柱，会损失一些洛伐他汀，而且不能保证洛伐他汀会吸附完全，第二次 用蒸馏水解吸杂质，也会损失一些洛伐他汀；最后用45%乙醇溶液将吸附在树脂上的洛伐 他汀解吸下来，过程复杂漫长，耗时，不容易掌控洗脱程度，浪费水和酒精，洛伐他汀损失较 大，产率低，生产成本高，不利于工业生产。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是针对现有的提取洛伐他汀方法的不足，提供一种生产工序简易可 行，耗时短，操作简便、可控性好，原料药利用率高，生产成本低，节能环保的制备内酯型洛 伐他汀的方法。
[0005] -、内酯型取洛伐他汀的提取 本发明提取内酯型取洛伐他汀的方法，包括以下工艺步骤： (1)洛伐他汀粗提物浸膏的制备：以市售红曲粉为原料，用乙醇溶液于70~80°C下回流 提取3~8h ;然后在0. 05~0. 09Mpa下用抽滤装置趁热抽滤，得滤液和滤渣；滤液经浓缩后得 洛伐他汀粗提物浸膏；滤渣回收后可作动物饲料添加剂或用作色素提取原料。乙醇溶液的 体积分数为40%~100% ;红曲粉与乙醇溶液的配比为1:25~1:50 g/mL。
[0006] (2)洛伐他汀粗提物浸膏中单体内酯型洛伐他汀的分离：将洛伐他汀粗提物浸膏 与柱层析硅胶以1:0. 5~1:3的质量比拌样后烘干，再用拌样柱层析硅胶9~12倍质量的柱层 析硅胶装柱，然后用石油醚和乙酸乙酯(体积比为1:1~1:2)为流动相，在0. 5~5mL/min的流 速下冲柱洗脱，每1~3. 5mL为一个流分，并依次编号；流动相洗脱至第一条红色带或第二条 黄色带流出时，停止冲柱，用薄层色谱检测，合并相同成分，得到纯度较高的羽状白色内酯 型洛伐他汀结晶。
[0007] 本发明的原理是：根据洛伐他汀含有羟基的化合物在乙醇溶液中良好的溶解性来 提取红曲中的洛伐他汀。红曲中含有几乎等量的酸型和内酯型洛伐他汀，在高温条件下用 乙醇回流时，红曲中的酸型洛伐他汀几乎会全部转化为稳定的内酯型，即常见的洛伐他汀， 而内酯型的洛伐他汀由于稳定且极性较酸型结构小，所以在柱层析硅胶柱上易于分离。因 此，乙醇高温回流提取后得到的粗提物中含大量的内酯型洛伐他汀，再利用柱层析硅胶的 极性吸附和流动相的极性解吸原理，将粗提物中的内酯型洛伐他汀一次性全部分离出来。
[0008] 二、内酯型取洛伐他汀产品的鉴定 (1)薄层色谱鉴定 用0. 3X IOOmm的毛细管，将红曲中分离的白色结晶和2mg/mL的内酯型洛伐他汀标准 品（购自四川标准物质中心，批号为130320)对比点样于25. 4X76. 2mm的自制硅胶薄层板 上，展开剂为石油醚：乙酸乙酯=1:4,紫外灯254nm，测得Rf值都为0. 69 ;经5%硫酸乙醇 显色后都为红褐色，如附图1。从附图1可见，本发明制备的红曲分离品和内酯型洛伐他汀 标准品的薄层色谱特征相同。
[0009] (2)? NMR 结构鉴定 将IOmg的内酯型洛伐他汀标准品与IOmg的红曲中分离的白色结晶，分别用氘代DMSO 溶解后，装入核磁管，300 MHz下分别得到标准品与白色结晶的氢谱峰的归属，如下表1，其 结构转化如附图2。表1的数据显示，本发明制备的红曲分离品和内酯型洛伐他汀标准品1H NMR峰的归属几乎相同，都鉴定为附图2的内酯型洛伐他汀结构。
[0010]
(3)高效液相色谱分析 色谱条件为：Lichrospher (：18柱（7以!11，4· 6X250mm)，柱温室温25°C。紫外检测波长 237. 8nm，流动相为乙腈：0. lg/dL磷酸水=65:35 (tyV)，进样量为20yL。
[0011] 内酯型洛伐他汀标准品溶液的配制：用甲醇配制浓度为〇. 34mg/mL内酯型洛伐他 汀标准品溶液。
[0012] 酸型洛伐他汀对照品溶液的制备及配制：将3. 4mg的内酯型洛伐他汀标准品用 IOmL的0. 2mol/L的NaOH溶液（70%乙醇配制）在50°C水浴下反应lh，通过高效液相色谱 峰面积归一化法测定。
[0013] 本发明分离的洛伐他汀溶液配制：用甲醇配制成浓度为I. 53mg/mL的待测液。
[0014] 红曲提取液的配制：取红曲中提取的洛伐他汀粗提物浸膏10mg，用甲醇溶解，于 50°C下超声提取1小时，于IOmL容量瓶中定容。
[0015] 图3为酸型洛伐他汀和内酯型洛伐他汀的高效液相色谱图。图3显示，在上述色谱 条件下酸型洛伐他汀的保留时间为8. 575 min，内酯型洛伐他汀的保留时间为14. 004min。 分析可知内酯型洛伐他汀全转化为酸型结构，纯度大于98. 8%，转化率大于98. 8%，内酯型 洛伐他汀标准品和红曲分离品的高效液相色谱峰保留时间一致，峰面积归一化法分析得纯 度都大于98%。图为内酯型洛伐他汀和红曲中分离的洛伐他汀高效液相对比图。从图4中 可看出，分离得到的单体为内酯型洛伐他汀，未见酸型结构。分析原因可能是在提取过程中 乙醇回流温度高，在75°C下红曲中大量的酸型洛伐他汀转化为内酯型结构，所以得到的几 乎全是羽状结晶的内酯型洛伐他汀。
[0016] 精密度实验：在一天内取0. 017、0. 085、