一种水飞蓟素的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及水飞蓟素的制备方法，更具体地，涉及一种从水飞蓟种子中提取高纯 度水飞蓟素的制备方法。
【背景技术】
[0002] 水飞蓟素(silmyarin)是一类由二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合而成的黄酮木脂 素类成分的混合物，主要来源是菊科植物水飞蓟（silybum marinaum(L)Gaenrt)的种子(又 称水飞蓟籽），主要成分是水飞蓟宾（8；115^；[11，8；[1；[13；[11；[11)，异水飞蓟宾（1808；[15^；[11， isosilibinin)，水飞蓟亭（siliehristin)，水飞蓟宁（silidinain)四种同分异构体，呈黄 色粉末或结晶状粉末。
[0003] 研究发现，水飞蓟素主要具有保肝利胆的作用，可保护肝脏细胞免受毒性物质侵 害，尤其是酒精及环境污染物(农药、重金属等)入侵损害肝脏，临床用于治疗肝炎、胆囊炎 等;还具有强力的抗氧化、消除自由基以及抗辐射作用，能保护肝脏细胞免受自由基破坏， 促进蛋白质的合成，并且在降血脂、防治动脉粥样硬化、预防脑缺血、抗血小板凝集方面均 具有较好效果，被认为是潜在的防治心脑血管疾病的良好药物。因此，提出一种能有效富集 水飞蓟素的制备方法是非常有必要的。
[0004] 我国虽然是水飞蓟种植大国，但目前对水飞蓟素的生产制备的研究仍不够深入， 由于水飞蓟素易溶于丙酮、乙酸乙酯、乙醇及甲醇、难溶于氯仿、不溶于水的特性，以及水飞 蓟种子自身含有大量油性成分的原因，在制备过程中往往会用到大量有机溶剂，造成产品 的溶剂残留现象，或者经碱法处理，影响了水飞蓟素的得率，要经复杂的纯化精制步骤，或 者为了追求高纯度而选择了繁杂的提取精制步骤。
[0005] 例如，现有技术曾提出过一种水飞蓟素的生产方法，采用蒸汽软化水飞蓟壳、乙醇 提取、碱水沉淀、分离沉淀干燥即得。虽然该方法工艺简单，但由于碱性试剂会对水飞蓟素 有所破坏，因而该方法制得的产品中水飞蓟素含量仅达到70%。现有技术也有提出用生物 技术手段来处理水飞蓟籽的方法，将里氏木霉和康宁木霉的复合微生物发酵剂接种在水飞 蓟去油种子饼粉中，保温发酵后经热风干燥，无水乙醇提取后加甲醇溶解得不溶物;或者使 用纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶复合酶进行细胞破壁、加以超声波提取，最后以大孔吸附 树脂的技术进行纯化，得到了高含量的水飞蓟素。国外专利对水飞蓟原料或采用榨油方式 或采用石油醚、正己烷除油，既影响水飞蓟素产品的色泽和收率又容易产生溶剂残留，要使 终产品符合溶剂残留小于lOOppm的标准需要非常复杂的除杂工艺。
[0006] 针对现有技术中制备水飞蓟素的方法存在的上述缺陷和不足，本发明的目的即提 供一种工艺简单、生产效率高、操作简便的水飞蓟素制备方法。
【发明内容】
[0007] 本发明提供了一种从水飞蓟籽种皮中提取高纯度水飞蓟素的制备方法，包括以下 步骤： ⑴取水飞蓟籽，经脱壳机脱出种皮，收集种皮，紫外线照射10-20分钟； ⑵将处理后的水飞蓟籽种皮装入酶解反应罐，加入原料重量0.5-2.0 %的纤维素酶:果 胶酶:碱性蛋白酶(5:4:1)复合酶，酶解30-50分钟； (3)将酶处理后的原料装入平转浸出器，用无水乙醇提取，得提取液； ⑷挥去提取液中的溶剂，得固体，用蒸馏水水洗，得水飞蓟素粗品； (5) 用无水乙醇溶解粗品，得上样液，通过反相分配色谱，用水、25%乙醇水溶液、50%乙 醇水溶液、75%乙醇水溶液和无水乙醇作为流动相依次洗脱，收集无水乙醇部分洗脱液； (6) 浓缩收集的洗脱液，微波真空干燥，得产品。
[0008] 上述制备方法中，所述步骤(2)的操作具体为:将处理后的水飞蓟籽种皮装入酶解 反应罐，蒸汽软化10-20分钟后，将温度降至20-40°C，加入原料重量0.5-2%的纤维素酶:果 胶酶:碱性蛋白酶(5:4:1)复合酶，运转搅拌器，酶解30-50分钟。
[0009] 上述制备方法中，所述步骤(3)的操作具体为:将酶处理后的原料装入所述平转浸 出器的物料格，装料量为所述物料格的70-80%，提取温度为20-40°〇，转速为&/60_ 120min，连续喷淋，提取3-5小时。
[0010] 上述制备方法中，所述步骤(4)的操作具体为：真空干燥挥去溶剂，用5-8倍水水 洗，得水飞蓟素粗品。
[0011] 上述制备方法中，所述步骤(5)的操作具体为:用无水乙醇溶解粗品，得上样液，通 过反相分配色谱，色谱柱填料为硅藻土，用水、25 %乙醇水溶液、50 %乙醇水溶液、75 %乙醇 水溶液和无水乙醇作为流动相依次洗脱，其中75 %乙醇水溶液和无水乙醇中分别加入2-5 % PEG400，收集无水乙醇部分洗脱液。
[0012] 上述制备方法中，所述步骤(6)的操作具体为:微波真空干燥温度：20_40°C，回差 温度2-4°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率40-80KW，干燥40-80分钟。
[0013]本发明方法制得的水飞蓟素产品纯度为93%以上，且基本无溶剂残留。
[0014] 本发明还提供了上述制备方法制得的水飞蓟提取物。
[0015] 本发明的制备方法具有以下优点： 1、本发明选择水飞蓟籽的种皮作为原料，避免水飞蓟籽的油脂成分对水飞蓟素的影 响，使整个制备方法更为简化，利于工业大生产。
[0016] 2、由于选择了酶解的方式，因而在酶解前选择了紫外线灭去植物种皮自身含有的 酶成分，进而选择合适的复合酶进行种皮细胞的破壁，非常利于后续的溶剂提取，极大地提 高了提取率。
[0017] 3、采用平转浸出器作为提取设备，降低溶剂使用量和损耗，增大投料量，提高了生 产效率，减少了生产时间。
[0018] 4、本发明的精制方法在水洗的基础上通过反相分配色谱，选择硅藻土作为柱填 料，选择含2_5%PEG400的无水乙醇作为目标成分的流动相，PEG400能极大地增强水飞蓟素 在无水乙醇中的溶解度，通过梯度洗脱的方式除去多余杂质，得到产品纯度在93%以上的 水飞蓟素产品，基本无溶剂残留。
【具体实施方式】
[0019] 为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将本发明实施例中的 技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全 部可能性。本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动下所得到的所有其他实施例，都落 入本发明的保护范围内。
[