一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生态制剂的技术领域，尤其涉及一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的 方法及应用。
【背景技术】
[0002] 沼泽红假单胞菌（Rhodopseudanonaspalustris)属于光合细菌的一种，属于红 螺菌科，红假单胞菌属，细胞短或长杆状，弧形或螺旋形；以二分裂或芽殖方式繁殖。本菌含 有细菌叶绿素a或b和类群1，2, 4的类胡萝卜素，以及尚未包括在上述类群中的一些类胡 萝卜素。可作为一种水质净化剂，由于沼泽红假单胞菌光能异养，兼性好养，在光照厌氧或 黑暗微好氧的条件下都能生长，对于降低氨氮、亚硝酸盐、COD含量，以及提高溶解氧有显著 效果；作为一种饲料添加剂，菌体富含菌体蛋白和B族维生素，适口性好，营养丰富，在水产 养殖业上有广阔的应用前景。
[0003]目前，市售光合细菌种类繁多，性状大多是液体。常规培养出的沼泽红假单胞菌有 如下缺点：1、菌体不同生长阶段混杂，生长速度难以控制；2、菌体易沉降分层，影响产品性 状；3、复活率低，在培养后期，培养基耗竭导致菌体大量死亡，次级代谢产物(如硫）积累，毒 害菌体细胞。有鉴于此，本发明人研宄和设计了一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的方法及 应用，本案由此产生。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的方法及应用，本发明通 过对沼泽红假单胞菌的生长周期进行红-蓝光照调整，减缓菌体代谢活动，促使所有菌体 细胞形态一致，通过添加大分子吸附材料促进菌-液分离，以获得高浓缩菌泥，再加入载体 及干燥剂使之充分分散，最终制成高质量的粉剂形态。
[0005] 为实现上述目的，本发明解决其技术问题的技术方案是： 一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的方法，包括以下步骤： 步骤一、沼泽红假单胞菌培养 三角瓶培养，称取乙酸钠8g/l，氯化铵2g/l，酵母膏3g/l，盐卤5ml/l，氯化钙0. 5g/l， 黄腐酸钾0. 8g/l，磷酸氢二钾lg/1，以上试剂溶解后用浓度为3%双氧水消毒30分钟；灭菌 完毕加入碳酸氢钠2g/l溶解，装入1L三角瓶中；或者， 大规模培养，称取乙酸钠8kg/t，氯化按2kg/t，酵母膏3kg/t，盐卤5L/t，氯化妈0. 5kg/t，黄腐酸钾0.8kg/t，磷酸氢二钾1kg/t，以上试剂溶解后用浓度为3%双氧水消毒30 分钟；灭菌完毕加入碳酸氢钠2kg/t溶解，加入到塑料袋中； 步骤二、接种培养 按20%接种量接种沼泽红假单胞菌菌液，32°C，3000-53001X白炽灯光照条件下培养 72h-96h，将培养液稀释100倍，在660nm处测定0D值达到1. 8以上；接种所使用的器具均 灭菌处理，接种过程无菌操作； 步骤三、菌体同步化处理 将培养液置于黑暗条件下，不接触自然光，按红光：蓝光比例为4 :1~1 :1进行搭配照 射，照射3~5h;目的是使沼泽红假单胞菌代谢活动逐步减慢，形态逐渐趋于一致； 步骤四、物理浓缩处理 向上述同步化处理后的培养液中加入聚丙烯酰胺阳离子、羧甲基纤维素钠、瓜尔豆胶、 黄原胶、壳聚糖的一种或几种，比例为0. 5%~1. 5%，避光处保存3. 5-5小时，去掉上清液，即 可得超浓缩沼泽红假单胞菌，细胞数目可达7. 3X1012个/g。
[0006] 一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的应用，取上述经物理浓缩后的沼泽红假单胞菌 一份，向其中加入保护剂聚乙二醇400、海藻糖、甘油、谷氨酸钠、吐温80的一种或几种，添 加量为8%~35%，混合均匀，即得沼泽红假单胞菌超浓缩活菌制剂；本品性状为液体，有效 沼泽红假单胞菌数目可达7X1011个/ml。
[0007] -种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的应用，取上述物理浓缩后的沼泽红假单胞菌一 份，向其中加入二氧化硅、硫酸钠、氧化钙、玉米芯粉及硫酸镁中的一份或几份，低温喷雾干 燥处理，粉剂晾干后加入酵母粉一份到三份；制得沼泽红假单胞菌浓缩菌粉；按此方法做 成的粉剂产品中沼泽红假单胞菌细胞数目可达5.OX109个/g。
[0008] 本发明利用沼泽红假单胞菌吸收利用红蓝光谱波长的不同（红光主要波长范围 610nm~720nm，蓝光主要波长范围400nm~520nm)，通过对沼泽红假单胞菌的生长周期 进行红-蓝光照调整，减缓菌体代谢活动，促使所有菌体细胞形态一致；通过添加大分子吸 附材料促进菌_液分离，以获得高浓缩菌泥。向上述浓缩后的沼泽红假单胞菌菌液中加入 载体和适量干燥剂使之充分分散，做成粉剂形态。
【具体实施方式】
[0009] 实施例1 一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的方法，包括以下步骤： 步骤一、沼泽红假单胞菌培养 三角瓶培养，称取乙酸钠8g/l，氯化铵2g/l，酵母膏3g/l，盐卤5ml/l，氯化钙0. 5g/l， 黄腐酸钾0. 8g/l，磷酸氢二钾lg/1，以上试剂溶解后用浓度为3%双氧水消毒30分钟；灭菌 完毕加入碳酸氢钠2g/l溶解，装入1L三角瓶中；或者， 大规模培养，称取乙酸钠8kg/t，氯化按2kg/t，酵母膏3kg/t，盐卤5L/t，氯化妈0. 5kg/t，黄腐酸钾0.8kg/t，磷酸氢二钾1kg/t，以上试剂溶解后用浓度为3%双氧水消毒30 分钟；灭菌完毕加入碳酸氢钠2kg/t溶解，加入到塑料袋中； 步骤二、接种培养 按20%接种量接种沼泽红假单胞菌菌液，32°C，3000-53001X白炽灯光照条件下培养 72h-96h，将培养液稀释100倍，在660nm处测定OD值达到1. 8以上；接种所使用的器具均 灭菌处理，接种过程无菌操作； 步骤三、菌体同步化处理 将培养液置于黑暗条件下，不接触自然光，按红光：蓝光比例为4 :1~1 :1进行搭配照 射，照射3~5h;目的是使沼泽红假单胞菌代谢活动逐步减慢，形态逐渐趋于一致； 步骤四、物理浓缩处理 向上述同步化处理后的培养液中加入聚丙烯酰胺阳离子、羧甲基纤维素钠、瓜尔豆胶、 黄原胶、