包括将有效量的本文所描述的组合物施 用于需要所述治疗的受试者。
[0294] 烧伤受害者的治疗往往受到纤维化的阻碍。因此，在某些实施方案中，本发明涉及 主题抑制剂的局部或系统性施用以治疗烧伤。手术后的伤口闭合往往与毁损的疤痕相关 联，这可以通过抑制纤维化来预防。因此，在某些实施方案中，本发明涉及一种预防或减少 疤痕形成的方法。
[0295] 脂多糖（LPS)诱导的细胞激素（诸如TNFa)的过度生产被认为是与败血性休克 相关的过程的核心。此外，一般公认的是，LPS活化细胞的第一步是LPS结合至特异性膜受 体。20S蛋白酶体复合物的a和0亚单元已经被鉴别为LPS结合蛋白，这表明LPS诱导的信 号转导可能是治疗或预防败血症的重要的治疗目标（Qureshi，N.等，J.Immun. (2003) 171 : 1515-1525)。因此，在某些实施方案中，蛋白酶体抑制剂组合物可以用于抑制TNFa以预防 和/或治疗败血性休克。
[0296] 缺血和再灌注损伤导致缺氧症，这是缺乏到达身体组织的氧气的病状。这种病状 引起Ik-Ba的降解增加，从而使得NF-kB活化（Koong等，1994)。已经证实，导致缺氧的 损伤的严重程度可以通过施用蛋白酶体抑制剂而减轻（Gao等，2000 ;Bao等，2001 ;Pye等， 2003)。因此，本发明的某些实施方案涉及一种治疗缺血病状或再灌注损伤的方法，其包括 向需要所述治疗的受试者施用有效量的本文所公开的蛋白酶体抑制剂化合物。所述病状或 损伤的实例包括（但不限于）急性冠状动脉综合征（易损斑块）、动脉闭塞性疾病（心脏、 脑部、外周动脉以及血管闭塞）、动脉粥状硬化（冠状动脉硬化、冠状动脉疾病）、梗塞、心脏 衰竭、胰腺炎、心肌肥大、狭窄以及再狭窄。
[0297]NF-kB还特异性地结合至HIV增强子/启动子。当与mac239的Nef比较时，pbjl4 的HIV调控蛋白Nef在控制蛋白激酶结合的区域有两个氨基酸的差异。据信，蛋白激酶向 IkB的磷酸化发信号，触发IkB通过泛素蛋白酶体路径而降解。降解后，NF-kB被释放至 细胞核中，由此增强HIV的转录（Cohen，J.，Science，（1995)267 :960)。在某些实施方案 中，本发明涉及一种抑制或减轻受试者的HIV感染的方法，或降低病毒基因表达水平的方 法，每种方法包括向受试者施用有效量的本文所公开的蛋白酶体抑制剂化合物或组合物。
[0298] 病毒感染对许多疾病的病理作贡献。诸如进行性心肌炎和扩张性心肌病的心脏 病状已经与柯萨奇病毒B3(coxsackievirusB3)联系起来。在受感染的小鼠心脏的比较 性全基因体微阵列分析中，特定的蛋白酶体亚单元在发展慢性心肌炎的小鼠心脏中均匀地 上调（Szalay等，AmJPathol168:1542-52,2006)。一些病毒在病毒从核内体释放至细 胞溶质中的病毒进入步骤中利用泛素-蛋白酶体系统。小鼠肝炎病毒（MHV)属于冠状病 毒科（Coronaviridaefamily)，其还包括严重急性呼吸综合征（SARS)冠状病毒。Yu和 Lai(JVirol79:644-648,2005)证实，用蛋白酶体抑制剂处理受MHV感染的细胞使得病毒 复制减少，这与相较于未处理的细胞降低的病毒滴度相关联。人类B型肝炎病毒（HBV)，肝 病毒科（Hepadnaviridaevirusfamily)的一个成员，同样需要病毒编码的包膜蛋白来繁 殖。抑制蛋白酶体降解路径使得分泌的包膜蛋白的量显著降低（Simsek等，JVirol79: 12914-12920,2005)。除了HBV之外，其它肝炎病毒（A、C、D以及E型）也可以利用泛素-蛋 白酶体降解路径用于分泌、形态发生以及病理发生。因此，在某些实施方案中，本发明涉及 一种治疗病毒感染的方法，诸如SARS或A、B、C、D以及E型肝炎，其包括使细胞接触（或向 受试者施用）有效量的本文所公开的化合物或组合物。
[0299] 在某些实施方案中，所公开的组合物可以适用于治疗寄生虫感染，诸如由原生 动物寄生虫引起的感染。这些寄生虫的蛋白酶体被认为主要与细胞分化和复制活性有 关（Paugam等，TrendsParasitol.2003，19(2) :55_59)。此外，阿米巴物种已经显示在暴 露于蛋白酶体抑制剂时失去成囊能力（Gonzales等，Arch.Med.Res. 1997, 28，SpecNo: 139-140)。在某些这样的实施方案中，蛋白酶体抑制剂组合物的施用方案适用于治疗由 原生动物寄生虫引起的人类寄生虫感染，这种原生动物寄生虫选自疟原虫属（Plasmodium sps.)(包括引起疱疾的恶性疱原虫（P.falciparum)、间日疱原虫（P.vivax)、三日疱 原虫（P.malariae)以及卵形疱原虫（P.ovale))、锥虫属（Trypanosomasps.)(包括 引起恰加斯氏病（Chagas^disease)的克氏锥虫（T.cruzi)，以及引起非洲睡眠病的 布鲁氏锥虫（T.brucei))、利什曼原虫属（Leishmaniasps.)(包含亚马逊利什曼原虫 (L.amazonesis)、杜氏利什曼原虫（L.donovani)、婴儿利什曼原虫（L.infantum)、墨西哥 利什曼原虫（L.mexicana)等）、卡氏肺囊虫（Pneumocystiscarinii)(已知引起AIDS 和其它免疫抑制患者的肺炎的原生动物）、刚地弓形虫（Toxoplasmagondii)、溶组织内 阿米巴（Entamoebahistolytica)、侵入内阿米巴（Entamoebainvadens)以及蓝氏贾 第鞭毛虫（Giardialamblia)。在某些实施方案中，所公开的蛋白酶体抑制剂组合物适 用于治疗由原生动物寄生虫引起的动物和家畜的寄生虫感染，这种原生动物寄生虫选自 赫氏疱原虫（Plasmodiumhermani)、隐孢子虫属（Cryptosporidiumsps.)、细粒棘球绦 虫（Echinococcusgranulosus)、柔嫩艾美耳球虫（Eimeriatenella)、神经肉抱子虫 (Sarcocystisneurona)以及粗壮脉纹孢菌（Neurosporacrassa)。用作治疗寄生虫疾病 的蛋白酶体抑制剂的其它化合物描述于W0 98/10779中，其以全文并入本文中。
[0300] 在某些实施方案中，蛋白酶体抑制剂组合物抑制寄生虫中的蛋白酶体活性而不会 在红血细胞和白血细胞中恢复。在某些这样的实施方案中，血细胞的长半衰期关于针对反 复暴露于寄生虫的疗法可以提供延长的保护。在某些实施方案中，蛋白酶体抑制剂组合物 关于针对未来感染的化学预防可以提供延长的保护。
[0301] 原核生物具有真核生物20S蛋白酶体粒子的等效物。尽管原核生物20S粒子的亚 单元组成比真核生物简单，但其具有以类似方式水解肽键的能力。举例来说，在肽键上的亲 核攻击通过0亚单元的N端上的苏氨酸残基而发生。因此，本发明的一个实施方案涉及一 种治疗原核生物感染的方法，其包括向受试者施用有效量的本文所公开的蛋白酶体抑制剂 化合物或组合物。原核生物感染可以包括由分枝杆菌（诸如结核病、麻风病或布鲁里溃疡 (Buruliulcer))或古细菌引起的疾病。
[0302] 也已经证实，结合至20S蛋白酶体的抑制剂刺激骨器官培养中的骨形成。此外，当 所述抑制剂已经系统性地施用于小鼠时，某些蛋白酶体抑制剂使骨体积和骨形成速率增加 超过 70% (Garrett，I.R?等，J.Clin.Invest. (2003) 111 :1771-1782)，由此表明泛素-蛋 白酶体机制调控骨母细胞分化和骨形成。因此，所公开的蛋白酶体抑制剂化合物或组合物 可以适用于治疗和/或预防与骨质流失相关的疾病，诸如骨质疏松症。
[0303] 因此，在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗疾病或病状的方法，这种疾病或病 状选自癌症、自体免疫疾病、移植物或移植相关病状、神经退化疾病、纤维化相关病状、缺血 相关病状、感染（病毒、寄生虫或原核生物）以及与骨质流失相关的疾病，这种方法包括施 用如本文所公开的化合物或组合物。
[0304] 本发明将在以下实施例中进一步描述。应了解，这些实施例仅仅是为了说明的目 的并且不应被解释为以任何方式限制本发明。 实施例
[0305] 实施例1.制各奥普佐米（下而的实施例中的化合物1)
[0306] 合成化合物1
[0308] 合成⑷
[0309]经过 30 分钟，向N_Boc丝氨酸（甲酿）（43. 8g，200mmol)、三乙胺（26. 5g，260mmol) 以及4-(二甲氨基）吡啶于二氯甲烷（1.2L)中的0°C溶液中添加氯甲酸苄酯（41g， 240mmol)于二氯甲烷（250mL)中的溶液。在相同温度下再搅拌所得混合物3小时。添加 饱和碳酸氢钠水溶液（200mL)，并且分离有机层，用二氯甲烷（2X400mL)萃取残余混合物。 用饱和碳酸氢钠水溶液（200mL)和盐水（200mL)洗绦合并的有机层，经硫酸钠干燥并且通 过Celite-545过滤。在减压下去除溶剂，并且通过快速色谱法（硅胶、己烷以及乙酸乙酯） 纯化残余物。通过LC/MS分离并表征化合物（A) (54g) (LRMS(MH)m/z:310. 16)。
[0310] 合成（B)
[0311] 经过10分钟，向化合物（A) (54g)于二氯甲烷（200mL)中的0°C溶液中添加三氟乙 酸（200mL)，并且在相同温度下再搅拌所得混合物3小时。在减压下去除溶剂，并且将残余 物置于高真空下过夜，得到化合物（B)的三氟乙酸盐，通过LC/MS对其进行表征（LRMS(MH) m/z:210.11)〇
[0312]合成（C)
[0313]经过10分钟，向化合物⑶（43. 8g，200mmol)、N-Boc丝氨酸（甲醚）（36. 7g， 167mmol)、H0BT(27g，200mmol)以及HBTU(71.4g，200mmol)于四氢呋喃（1.2L)中的 0°C溶 液中添加N，N-二乙基异丙胺（75g，600mmol)于四氢呋喃（250mL)中的溶液，并且所得混 合物的pH约为8。在室温下再搅拌混合物5小时。在室温下于减压下去除大部分溶剂，并 且用饱和碳酸氢钠水溶液（400mL)稀释。然后，用乙酸乙酯（3X400mL)萃取，用碳酸氢钠 (100mL)和盐水（100mL)洗绦。经硫酸钠干燥合并的有机层并且通过Celite-545过滤。在 减压下去除溶剂，并且通过快速色谱法（硅胶、己烷以及乙酸乙酯）纯化残余物。通过LC/ MS分离并表征化合物（C) (65g) (LRMS(MH)m/z:411. 21)。
[0314]合成（D)
[0315] 经过5分钟，向化合物（C) (18g)于二氯甲烷（100mL)中的0°C溶液中添加三氟乙 酸（80mL)，并且在相同温度下再搅拌所得混合物3小时。在减压下去除溶剂，并且将残余物 置于高真空下过夜，得到中间物（D)的三氟乙酸盐，通过LC/MS对其进行表征（LRMS(MH)m/ z:311. 15) 〇
[0316]合成（E)
[0317] 经过10分钟，向2-甲基-噻挫-5-甲酸乙醋（15g，88mmol)于四氢呋喃（50mL) 中的〇°C溶液中添加氢氧化钠水溶液（5N，50mL)，并且在室温下再搅拌所得溶液2小时。然 后，用盐酸（2N)酸化至pH= 1，并且用四氢呋喃（3X100mL)萃取。用盐水（30mL)洗绦合 并的有机层，并且经硫酸钠干燥。在减压下去除大部分溶剂并且冻干残余物，得到化合物 (E) (14g) "
[0318] 合成（F)
[0319] 经过5分钟，向化合物（D)(41mmol)和2-甲基-噻挫-5-甲酸（E) (6. 0g，42mmol)、 11081'(7.9§，50臟〇1)以及耶1^(18.(^，50臟〇1)于四氢呋喃（80011^)中的0°〇溶液中添加1 N-二乙基异丙胺（约50g)于四氢呋喃（200mL)中的溶液，直至其pH达到约8. 5。在相同 温度下搅拌所得混合物过夜。然后，用饱和碳酸氢钠水溶液（200mL)淬灭，并且在减压下去 除大部分溶剂。用乙酸乙酯（3X400mL)萃取残余混合物。用饱和碳酸氢钠水溶液（200mL) 和盐水（100mL)洗绦合并的有机层，经硫酸钠干燥并且通过Celite-545过滤。在减压下去 除溶剂，并且通过快速色谱法（硅胶、含2%甲醇的乙酸乙酯）纯化残余物。通过LC/MS分 离并表征化合物（F) (17.lg) (LRMS(MH)m/z:436. 15)。
[0320] 合成（G)
[0321] 向化合物（F) (17.lg，95mmol)于甲醇（300mL)中的溶液中添加10%Pd/C(3g)中。 在1个大气压的氢气下搅拌所得混合物48小时。通过Celite545过滤混合物，并且用甲 醇（约200mL)洗涤滤饼。在减压下浓缩有机层并且置于高真空下，得到化合物（G)，通过 LC/MS对其进行表征（LRMS(MH)m/z:346. 1)。
[0322] 合成⑶
[0323]用DCM(2mL)稀释N_Boc苯丙氨酸-酮基环氧化物（140mg，0. 46mmol)，并且冷却至 〇°C。向这种溶液中添加三氟乙酸（6mL)。移走冷却浴并且搅拌反应物1小时，届时TLC显 示起始物质完全消耗。在减压下浓缩所得溶液并且置于高真空下，得到化合物（H)的三氟 乙酸盐。
[0324] 合成化合物1
[0325]向上述化合物（H) (131mg，0? 38mmol)和（J) (0? 46mmol)、H0BT(75mg，0? 48mmo1)以 及HBTU(171mg，0.48mmol)于四氢呋喃（20mL)和N，N-二甲基甲酰胺（lOmL)中的0°C溶液 中逐滴添加N，N-二乙基异丙胺（lmL)。在相同温度下再搅拌混合物5小时。然后，用饱和 碳酸氢钠水溶液（20mL)淬灭，并且在减压下去除大部分溶剂。然后，用乙酸乙酯（3X40mL) 萃取残余混合物。用饱和碳酸氢钠水溶液（20mL)和盐水（10mL)洗涤合并的有机层，经硫 酸钠干燥并且通过Celite-545过滤。在减压下去除溶剂，并且通过HPLC(0. 02M乙酸铵水 溶液和乙腈（66/34))纯化残余物，得到化合物l(92mg)，将其冻干并且通过LC/MS进行表征 (LRMS(MH)m/z:533. 2)。
[0326] 实施例2
[0327] 将非晶形化合物l(50mg)溶解于乙腈（lmL)中，然后添加去离子水（2mL)，并且通 过经过约1至2周缓慢蒸发掉lmL使溶液过饱和。过滤所得晶体，用lmL1 : 2乙腈-水洗 涤，并且在真空下干燥12小时，得到熔点为148°C的化合物1的结晶多晶型物（25mg)。样品 的特征性DSC曲线示于图3中，如在TAInstruments的差示扫描热量计2920上在10°C/ 分钟的加热速率下记录。
[0328] 实施例3
[0329] 将非晶形化合物1 (611mg)溶解于四氢呋喃（5mL)中，接下来添加己烷（5mL)，并且 用如实施例2中所制备的结晶多晶型物化合物1接种溶液，并且通过经过约17小时缓慢蒸 发掉5mL使溶液过饱和。过滤所得晶体，用lmL1 : 1四氢呋喃-己烷洗涤，并且在真空下 干燥12小时，得到熔点为147°C的化合物1的结晶多晶型物（150mg)。
[0330] 实施例4
[0331] 将非晶形化合物1 (176mg)溶解于四氢呋喃（5mL)中，然后添加甲苯（25mL)。用 如实施例2中所制备的结晶多晶型物化合物1接种溶液，并且通过经过约2天缓慢蒸发掉 20mL使溶液过饱和。过滤所得晶体，用15mL甲苯洗涤，并且在真空下干燥12小时，得到熔 点为149°C的化合物1的结晶多晶型物（88mg)。
[0332] 实施例5
[0333] 将非晶形化合物1 (312mg)溶解于甲苯（50mL)中，加热至约100°C以完全溶解，然 后添加己烷（50mL)，并且用如实施例2中所制备的结晶多晶型物化合物1接种溶液，并且通 过经过约2天缓慢蒸发掉60mL使溶液过饱和。过滤所得晶体，用lOmL甲苯洗涤，并且在真 空下干燥12小时，得到熔点为149°C的化合物1的结晶多晶型物（156mg)。
[0334] 实施例6
[0335] 将非晶形化合物l(1.4g)溶解于甲苯（25mL)中，加热至约50°C以完全溶解，然后 通过冷却至22°C达到过饱和，并且使化合物结晶12小时。过滤所得晶体，用5mL己烷洗涤， 并且在真空下干燥12小时，得到熔点为149°C的化合物1的结晶多晶型物（0. 94g)。
[0336] 实施例7
[0337] 合成化合物1
[0338] 合成（H)
[0339] 在惰性气氛下将N-Boc苯丙氨酸-酮基环氧化物（1. 0当量）溶解于三颈圆底烧 瓶中的DCM(3L/kgN-Boc苯丙氨酸-酮基环氧化物）中，并且在冰浴中冷却溶液。然后，以 维持内部温度低于l〇°C的速率添加TFA(5. 0当量）。然后，使反应混合物升温至约20°C，并 且搅拌1至3小时。然后，将MTBE(3. 6L/kgN-Boc苯丙氨酸-酮基环氧化物）添加至反应 混合物中，同时维持混合物温度低于25°C。然后添加庚烷（26. 4L/kgN-Boc苯丙氨酸-酮 基环氧化物），将反应物冷却至_5°C与0°C之间2至3小时以使化合物（H)结晶。过滤白色 固体，并且用庚烷（3L/kgN-Boc苯丙氨酸-酮基环氧化物）冲洗。然后，在22°C下白色固 体处于真空下12小时。所获得的产率为86%，HPLC纯度为99. 4%。
[0340] 合成化合物1
[0341]在惰性气氛下将化合物（H) (1. 2当量）、化合物（G) (1. 0当量）、HBTU(1. 2当量）、 H0BT(1.2当量）以及N-甲基吡咯烷酮（8L/kg化合物（G))添加至干燥的烧瓶中，并且在 23°C下搅拌混合物以完全溶解。然后，将反应物冷却至_5°C与0°C之间，并且经过15分钟 添加二异丙基乙胺（2. 1当量），同时维持内部反应温度低于0°C。在0°C下搅拌反应混合物 12小时。
[0342] 通过将反应混合物倾倒至8 %碳酸氢钠（40L/kg化合物（G))上使粗化合物1沉 淀，并且在20°C至25°C下搅拌粗化合物1的悬浮液12小时，接下来在0°C至5°C下搅拌1小 时。过滤白色固体，并且用水（5L/kg化合物（G))冲洗。然后，在20°C至25°C下将白色固体 于水（15L/kg)中再打浆3小时，过滤并且用水（5L/kg化合物（G))和乙酸异丙酯（2X2L/ kg化合物（G))冲洗。在45°C下于真空下干燥白色固体至恒重。粗化合物1的产率为65%， HPLC纯度为 97. 2%。
[0343] 通过在85°C下搅拌并加热将粗化合物1完全溶解于乙酸异丙酯（20L/kg粗化合 物1)中。然后，趁热过滤溶液以去除任何微粒物质，并且将溶液再加热至85°C，得到澄清溶 液。将澄清溶液以每小时l〇°C冷却至65°C，随后添加晶种。将溶液以每小时10°C冷却至 20°C，这时发生化合物1的大量结晶。在20°C下搅拌悬浮物6小时，接下来在0°C至5°C下 搅拌至少2小时，并且过滤并用乙酸异丙酯（lL/kg粗化合物1)冲洗。在45°C下于真空下 干燥纯化的化合物1至少24小时至恒重。化合物1的产率为87%，HPLC纯度为97. 2%。
[0344] 实施例8
[0345] 合成化合物1
[0346] 在惰性气氛下将化合物（H) (1. 1当量）、化合物（G) (1. 0当量）