#RS12JG，TATAA Biocenter AB)并且与添加有 相同浓度的水样品相比较。用无菌吸入针头从来自PI组中的14个受试者的呈现化脓的一 个植入物位点采集一个样品。吸入针头取样位点不同，但是类似于纸尖取样位点。将吸入 针头（Metal Suction Tip，0? 7x 70mm 22G，Mediplast，MallTlC')，Sweden)插入到选择的位 点处的植入物周沟/袋的基部。将含有样品的针头立即从塑料注射器（lml，BD Plastipak， Mediplast，Mahli6, Sweden)取下，轻轻弯曲并且将其置于一个（1)4. 5ml塑料冷冻管 (Nunc CryoTube Vials，Fisher Scientific，Gdteboi'g.，: Sweden)中。闭合管盖，并且将管 在具有液氮的保温瓶中在_196°C放置和冷冻并立即转运至实验室（TATAA Biocenter)用 于抑制分析。当操作吸入针和塑料管时，总是使用洁净的手套。
[0152] 统计方法
[0153] 使用方差分析（AN0VA)评价三个研究组之间的基因标志物表达的差异。在数据分 析中，进行对数数据转换，并且对于独立样品之间的差异，使用百分之九十五（95% )置信 区间。
[0154] 在对数变换后使用以下表达式计算各个受试者的归一化的基因表达：基因g的归 一化表达=(&1(11)-(：(1(3)，其中〇1(3是基因8的扩增循环的数目，并且〇1(11)是取自受 试者的样品的归一化因子（所选的参比基因的扩增循环的平均数）。使用HI、MC和PI组 中基因g的归一化表达来进行方差分析。
[0155] 如果HI、MC和PI组之间的可能差异的研究仅包括两个遗传标志物，则小于0. 05 的P-值被认为是统计学显著的。然而，因为在L0Q分析期间已经排除了一些之后所述研究 包括8个标志物，使用用于大量显著性的Bonferroni校正，并且小于0. 0063的p-值被认 为是统计学显著的。
[0156] 然后将各个受试者的计算的归一化的基因表达与关于由相同受试者在相同时间 点的放射照片提供的骨损失的信息相关联。放射摄影检查技术是本领域中公知的并且可以 如在 Ahlqvist 等人（Int J Oral Maxillofac Implantsl990,5(2):155_163)中所述的进 行。可以在放射照片上测量骨水平，并且其被定义为从固定器和其桥基之间的接合处至相 对于植入物中间和远端的边缘骨的顶部的距离。
[0157] 表 1
[0158]
[0172] 表8.具有主要的受损的健康状态的受试者的数量
[0173]
[0174] 实施例2
[0175] 在获自经历植入物治疗的患者的植入物周沟液中量化TRAP水平。通过实施例1 中所述的qPCR量化TRAP的表达水平。然后将获得的值插入校准曲线（即图1)，并且估计 所述患者的骨损失率。
[0176] 实施例3
[0177] 在获自经历植入物治疗的患者的植入物周沟液中量化TRAP的表达水平和0C的表 达水平。通过实施例1中所述的qPCR量化TRAP和0C的表达水平。然后将获得的值之比 (TRAP/0C)插入校准曲线（即图2)，并且估计所述患者的骨损失率。
[0178] 实施例4
[0179] 在获自经历植入物治疗的患者的植入物周沟液中量化CatK和0C的水平。通过实 施例1所述的qPCR量化CatK和0C的表达水平。然后将获得的值之比（CatK/OC)插入校 准曲线（即图3)，并且估计所述患者的骨损失率。
[0180] 实施例5
[0181] 在获自经历植入物治疗的患者的植入物周沟液中量化0PG的水平。通过实施例1 所述的qPCR量化0PG的表达水平。然后将获得的值插入校准曲线（即图4)，并且估计所述 患者的骨损失率。
[0182] 实施例6
[0183] 在实施例2-5中的一个或多个中，患者可能显示软组织炎症和多至0. 2mm/年的骨 损失率。在该情况下，临床医生可以提供给受试者标准程序的护理口腔卫生处理。可以在 数月或一年内安排随访。
[0184] 实施例7
[0185] 在实施例2-5中的一个或多个中，临床医生的结论是，快速和大量的骨退化可能 在进行中（骨损失率>2mm/年），提供给受试者口腔卫生处理并且在数月内安排随访。如果 在第二次随访时骨损失率保持>2mm/年，临床医生可以决定对该位点进行手术治疗。
[0186] 实施例8
[0187] 在实施例2-5中的一个或多个中，受试者呈现明显的植入物周炎体征，即植入物 周围发炎，肿胀，发红，化脓和病理性、弹坑状边缘骨损失。然而，骨损失率〈〇. 2mm/年，并且 临床医生的结论是，不需要手术治疗并且提供给受试者口腔卫生处理，维护方案并且在数 月内安排随访。
[0188] 实施例9
[0189] 在另一实施例中，取自呈现炎症和探测时出血的受试者的样品显示，TRAP/0C比率 对应于0. 2至0. 5_/年的骨损失率。临床医生的结论是，骨退化可能非常低和不显著，并 且提供给受试者标准的护理口腔卫生程序。在数月或一年内安排随访。
[0190] 实施例10
[0191] 在另一个实施例中，取自呈现粘膜炎的类似临床体征的另一受试者的样品具有对 应于超过2_/年的骨损失率的TRAP/0C比。临床医生的结论是，快速和大量的骨退化可能 在进行中，提供给受试者口腔卫生处理并在数月内安排随访。如果在第二次随访时TRAP/0C 比仍然尚，则临床医生决定对此位点进彳丁手术治疗。
[0192] 实施例11
[0193] 在另一实施例中，受试者呈现明显的植入物周炎体征，即植入物周围发炎，肿胀， 发红，化脓和病理性、弹坑状边缘骨损失。然而，TRAP/0C比对应于少于0. 5_/年的骨损失 率，并且临床医生的结论是，不需要手术治疗并且提供给受试者口腔卫生处理方案并且在 数月内安排随访。
[0194] 不需要将实施例9至11的受试者暴露于辐射，并且在后两个实施例中，临床医生 不需要等到骨退化已经进展到通过放射照片评估的可测水平。
【主权项】
1. 用于测量骨损失率的方法，其中所述方法包括以下步骤： a) 量化活体外样品中与破骨细胞和/或成骨细胞的活性相关的一种以上标志物的表 达水平或其比率；和 b) 通过将步骤a)中获得的值插入一个以上校准曲线中，确定作为边缘骨水平的进行 中的损失的函数的骨损失率。2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述活体外样品是体液或组织。3. 根据权利要求2所述的方法，其中所述液体是口腔液、和/或血液、和/或血清、和/ 或血浆、和/或脑脊液、和/或滑液、和/或腹膜液、和/或唾液。4. 根据权利要求2或3所述的方法，其中所述液体是龈沟液。5. 根据权利要求2至4中一个或多个所述的方法，其中所述液体是植入物周沟液。6. 根据权利要求2所述的方法，其中所述组织是骨和/或结缔组织、和/或骨髓、和/ 或软骨、和/或齿銀、和/或粘膜。7. 根据权利要求2和/或6所述的方法，其中所述组织是骨、和/或植入物支撑组织， 和/或邻近植入物的骨和/或邻近牙齿的骨。8. 根据在前权利要求中一个或多个所述的方法，其中所述标志物选自TRAP、OPG、 CatK、RANK、RANKL、骨钙蛋白、IL-6、DKK-1、MMP-8、HMP-1、tPA、PAI-2、组织蛋白酶家族 成员、骨涎蛋白（BSP)、碱性磷酸酶（ALP)、来自TGF-P超家族的标志物、骨形态发生蛋白 (BMP)、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF)、硬化蛋白、头蛋白或其任意组合。9. 根据权利要求8所述的方法，其中所述标志物是TRAP、OPG、CatK，骨钙蛋白、或其任 意组合。10. 根据在前权利要求中一个或多个所述的方法，其中所述量化通过核酸量化的方式 进行。11. 根据权利要求10所述的方法，其中所述量化通过qPCR和/或通过RNA印迹进行。12. 根据在前权利要求中任一项所述的方法，其中所述一个以上校准曲线在骨损失率 和标志物表达水平/标志物比率或其组合之间提供线性关系和/或二次方关系、和/或三 次方关系、和/或四次方关系、和/或齐次多项式关系、和/或指数关系、和/或对数关系。13. 根据权利要求12所述的方法，其中所述一个以上校准曲线在骨损失率和标志物表 达水平/标志物比率或其组合之间提供线性关系。14. 根据在前权利要求中一个或多个所述的方法，其中确定的骨损失率指示存在或不 存在影响骨的病症。15. 根据在前权利要求中一个或多个所述的方法，其中确定的骨损失率指示存在或不 存在影响支撑植入物和/或牙齿的骨的病症。16. 根据权利要求14和/或15所述的方法，其中所述病症是关节炎、和/或类风湿性 关节炎、和/或银肩病关节炎、和/或骨质疏松症或其组合。17. 根据权利要求14和/或15所述的方法，其中所述病症是植入物周疾病。18. 根据权利要求14和/或15所述的方法，其中所述病症是牙周病。19. 根据权利要求17所述的方法，其中0. 2mm/年或低于0. 2mm/年的骨损失率指示包 括标准的护理口腔卫生处理和维护程序的治疗。20. 根据权利要求17所述的方法，其中在1至I. 5_/年范围内的骨损失率指示包括标 准的护理口腔卫生处理和维护程序和数月内的随访的治疗。21. 根据权利要求17所述的方法，其中2. Omm/年或高于2. Omm/年的骨损失率指示外 科治疗。22. 试剂盒，所述试剂盒用于进行根据在前权利要求中一个或多个所述的方法。23. 根据权利要求22所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包括样品收集装置。24. 根据权利要求23所述的试剂盒，其中所述样品收集装置是无菌纸尖和/或注射器 和/或活检装置。25. 根据权利要求22至24中一个或多个所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包括用于保 存样品的保存介质。26. 根据权利要求22至25中一个或多个所述的试剂盒，其中所述试剂盒还含有关于如 何进行本发明的方法的使用说明。27. 根据权利要求22至26中一个或多个所述的试剂盒，其中所述试剂盒还含有用于将 样品送至中央实验室的容器。28. 根据权利要求22至27中一个或多个所述的试剂盒，其中所述试剂盒还含有量化与 破骨细胞和/或成骨细胞的活性相关的一种以上标志物或其组合的表达水平的必要元件。29. 根据权利要求22至28中一个或多个所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含至少一种 可检测标签和特异识别与破骨细胞和/或成骨细胞活性相关的一种以上标志物或其组合 的至少一种底物。
【专利摘要】本发明涉及一种诊断骨损失率的方法，尤其是在骨锚定植入物领域中。本发明提供一种方法，所述方法包括以下步骤：a)量化与活体外样品中破骨细胞和/或成骨细胞的活性相关的一种以上标志物的表达水平或其比率；和b)通过在一个以上校准曲线中插入步骤a)中获得的值，确定作为边缘骨水平的进行中的损失的函数的骨损失率。本发明还涉及用于进行所述方法的试剂盒。
【IPC分类】C12Q1/68
【公开号】CN105008549
【申请号】CN201480007740
【发明人】简·霍尔
【申请人】诺贝尔生物服务公司
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2014年2月7日
【公告号】CA2896980A1, EP2954067A1, WO2014122279A1