/ = 8. 2 Hz, 2H), 8.40 (s, 2H), 8.29 - 8.14 (m, 4H), 8.09 - 7.94 (m, 4H), 7.59 (dd, /= 11.9, 6.8 Hz, 4H)，7.13 (t，/=6. 4 Hz，2H)，6.75 (s，2H)。配合物Ir-2的吸收光谱和荧光光谱如 图2所示。
[0034] 实施例3
[Ir(CH0-bt)2(phen)] [PF6] (Ir-3)的合成：
(1)配体CHO-bt的合成：将2 mmol的4-醛基苯硼酸，2 mmol的2-氯苯并噻唑，7%当 量的四（3-苯基膦）钯（0)和2 mmol的碳酸钾加入到三颈烧瓶中，然后加入45 mL的THF 和氏0 (V/V=l:l)的混合溶剂。在氮气的保护下，反应体系在70 °C反应24 h。冷却至室 温，反应液用二氯甲烷萃取，水相用二氯甲烷萃取3次（10 mL X 3)，合并有机层，用无水硫 酸钠干燥过夜，减压除去溶剂后柱层析分离得到产物。
[0035] (2) CH〇-bt 铱二氯桥配合物的合成(参见文献1'1〇11〇5^1]^，1(.131111.〇16111.3〇(3· Jpn. 1974，47，467-468.)。
[0036] (3)将0· 9 mmol的CH〇-bt铱二氯桥配合物，L 8 mmol的1，10-邻菲罗啉加入圆底 烧瓶中，然后加入50 mL的二氯甲烷和甲醇（v/v=2:l)。在氮气的保护下，反应体系在50 °C 反应10 h。再加入10倍当量的KPF6，继续反应4 h。反应结束后冷却至室温，抽滤收集液体， 减压除去溶剂后柱层析分离得到产物。核磁表征数据：? NMR (400 MHz，DMS0) δ 9. 70 (s, 2H), 8.96 (dd, /=8.3, I. 2 Hz, 2H), 8.45 (dd, /=5.1, I. 2 Hz, 2H), 8.35 (s, 2H), 8.32 (d, /= 7.9 Hz, 2H), 8.26 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 8.10 (dd, J= 8.3, 5.1 Hz, 2H), 7.69 (dd, / = 7.9, 1.4 Hz, 2H), 7.39 - 7.31 (m, 2H), 6.95 (s, 2H), 6.85 (d, /= LI Hz, 2H), 5.78 - 5.74 (m, 2H);质谱表征数据：MALDI-T0F-MS: m/z 824. 6 ([M - Cl]+)。配合物Ir-3的吸收光谱和荧光光谱如图3所示。
[0037] 实施例4
[Ir(CH0-pq)2(bpy)] [Cl] (Ir-4)的合成：
(1)配体CH〇-pq的合成：将2 mmol的4-醛基苯硼酸，2 mmol的2-氯喹啉，7 %当量 的四（3-苯基膦）钯（0)和2 mmol的碳酸钾加入到三颈烧瓶中，然后加入45 mL的THF和 H2O (V/V=l:l)的混合溶剂。在氮气的保护下，反应体系在70 °C反应24 h。冷却至室温， 反应液用二氯甲烷萃取，水相用二氯甲烷萃取3次（10 mL X3)，合并有机层，用无水硫酸钠 干燥过夜，减压除去溶剂后柱层析分离得到CHO-pq。
[0038] (2)CH0_pq 铱二氯桥配合物合成参考文献方法（1'1〇]1〇5^1]^，1(.131111.〇16111.3〇(3· Jpn. 1974，47，467-468.)。
[0039] (3)将0· 9 mmol的CH〇-pq铱二氯桥配合物，I. 8 mmol的联吡啶加入圆底烧瓶中， 然后加入50 mL的二氯甲烷和甲醇（v/v=2:l)。在氮气的保护下，反应体系在50 °C反应 10 h。室温冷却，抽滤收集液体，减压除去溶剂后柱层析分离得到产物。核磁表征数据=1H NMR (400 MHz, DMS0) δ 9. 63 (s, 2H), 8. 74 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 8. 68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.57 (d, J = 8. 2 Hz, 2H), 8.43 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.13 - 8.07 (m, 4H), 8.00 (dd, J = 8. I, LI Hz, 2H), 7.70 (dd, J = 8. I, 1.5 Hz, 2H), 7.68 -7.63 (m, 2H), 7.48 (t, J = 7. I Hz, 2H), 7.23 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.13 - 7.07 (m, 2H), 6.92 (d, J = 1.4 Hz, 2H);质谱表征数据：MALDI-T0F-MS: m/z 812.6 ([M - Cl]+)。配合物Ir-4的吸收光谱和荧光光谱如图4所示。
[0040] 实施例5
[Ir(btiq)2(bpy)] [PF6] (Ir-5)的合成：
(1)配体btiq的合成：将2 mmol的苯并噻吩-2硼酸，2 mmol的2-氯喹啉，7%当量 的四（3-苯基膦）钯（0)和2 mmol的碳酸钾加入到三颈烧瓶中，然后加入30 mL的THF和 H2O (V/V=l:l)的混合溶剂。在氮气的保护下，反应体系在70 °C反应24 h。冷却至室温， 反应液用二氯甲烷萃取，水相用二氯甲烷萃取3次（10 mL X3)，合并有机层，用无水硫酸钠 干燥过夜，减压除去溶剂后柱层析分离得到产物。
[0041] (2)btiq 铱二氯桥配合物的合成（参见文献1'1〇11〇5^1]^，1(.131111.〇16111.3〇(3· Jpn. 1974，47，467-468.)。
[0042] (3)将0. 4 mmol的btiq铱二氯桥配合物，0. 8 mmol的联R比啶加入圆底烧瓶中，然 后加入25 mL的二氯甲烷和甲醇（v/v=2:l)。在氮气的保护下，反应体系在50 °C反应10 h。再加入10倍当量的KPF6，继续反应4 h。室温冷却，抽滤收集液体，柱层析分离得到目标 产物。配核磁表征数据：? NMR (400 MHz, DMS0) δ 8.56 (d, /= 8.7 Hz, 2H), 8.40 (d, /= 8. 2 Hz, 2H), 8.31 (d, / = 5. 3 Hz, 2H), 8.21 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 8.12 (t, /= 7.9 Hz, 2H), 8.01 (d, / = 8. I Hz, 2H), 7.91 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.78 -7.70 (m, 2H), 7.34 (dd, /=8.0, 4.9, 3.0 Hz, 2H), 7.17 (t, / = 7.5 Hz, 2H), 6.96 (d, /= 3.5 Hz, 4H), 6.67 (t, /= 7.7 Hz, 2H), 6.19 (d, /= 8.2 Hz, 2H)。 配合物Ir-5的吸收光谱和荧光光谱如图5所示。
[0043] 实施例6 磷光配合物Ir-I对血吸虫尾蝴的磷光标记成像： (1)试剂与材料 试剂：二甲基亚砜(天津市科密欧化学试剂有限公司），PBS缓冲液自配。
[0044] 尾蝴：阳性钉螺逸出得到，阳性钉螺由湖南省血吸虫病防治研究所提供。
[0045] ( 2 )尾蝴荧光标记方法 新鲜的尾蝴从感染毛蝴的阳性的钉螺得到，取阳性螺于100 mL锥形瓶中，加入清水至 瓶口，在白炽灯下光照2小时左右逸出尾蝴。
[0046] 我们选取磷光配合物Ir-Ι，用二甲基亚砜（DMSO)溶解准确配制成I mmol的母 液，然后再用PBS缓冲液稀释成5 μΜ的稀释液。移取200 μ L的稀释液加入到荧光成像 器皿中，用自制的铁丝圈取新鲜尾蝴加入到稀释液中，在室温下荧光染色5分钟至6小时， 在405 nm激发下共聚焦焚光显微镜观察尾蝴磷光标记情况，并及时采集500-600 nm的磷 光信号进行荧光成像。
[0047] (3)荧光标记结果：具体可以参见图6,从荧光成像图可以说明，磷光配合物Ir-I 能够对尾蝴进行荧光标记。
[0048] 实施例7 磷光配合物Ir-4对血吸虫尾蝴的磷光标记成像： (1)试剂与材料 试剂：二甲基亚砜(天津市科密欧化学试剂有限公司），PBS缓冲液自配。
[0049] 尾蝴：阳性钉螺逸出得到，阳性钉螺由湖南省血吸虫病防治研究所提供。
[0050] (2)荧光标记方法 按实施例6所述方法，其中激发光为405 nm，采集550-650 nm的信号荧光成像。
[0051] (3)荧光标记结果：具体可以参见图7,从荧光成像图可以说明，磷光配合物Ir-4 能够对尾蝴进行荧光标记。
[0052] 实施例8 磷光配合物Ir-5对血吸虫尾蝴的磷光标记成像： (1)试剂与材料 试剂：二甲基亚砜(天津市科密欧化学试剂有限公司），PBS缓冲液自配。
[0053] 尾蝴：阳性钉螺逸出得到，阳性钉螺由湖南省血吸虫病防治研究所提供。
[0054] (2)荧光标记方法 按实施例6所述方法，其中激发光为515 nm，采集600-700 nm的信号荧光成像。
[0055] (3)结果：具体可以参见图8,从荧光成像图可以说明，磷光配合物Ir-5能够对尾 蝴进行荧光标记。
[0056] 以上所述实施例仅表达了本发明的优选实施方式，其描述较为具体和详细，但并 不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员 来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形、改进及替代，这些都属于本发 明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
【主权项】
1. 一种磷光铱配合物，其特征在于：具有下式结构的磷光化合物：通式中抗衡阴离子Y为下述离子：PF 6、Cl。2. 根据权利要求1所述的一种磷光铱配合物，其特征在于：主配体I团优选： PEG-bt、btiq〇3. 根据权利要求1所述的一种磷光铱配合物，其特征在于：辅助配体基团优选： phen〇4. 根据权利要求1所述的一种磷光铱配合物，其特征在于：抗衡阴离子Y基团优选： PF6。5. 根据权利要求1所述的一种磷光铱配合物，其特征在于：任意一项化合物可通过以 下路线合成：将三氯化铱水合物与含氮的双齿配体I￡ 2-乙氧基乙醇和水的混合溶液中加热 反应24-48小时，得到铱二氯桥配合物；然后，得到的产物在有机溶剂、水或者混合溶剂中 与相应的辅助配体；反应4-24小时，合成到所需的目标产物。6. 根据权利要求1-4任一项所述的一种磷光铱配合物，其特征在于：任意一种磷光铱 配合物作为血吸虫尾蝴荧光标记染料。7. 根据权利要求6所述的一种磷光铱配合物，其特征在于，尾蝴荧光标记方法包括如 下步骤： 新鲜的尾蝴从感染毛蝴的阳性的钉螺得到，取阳性螺于100 mL锥形瓶中，加入清水至 瓶口，在白炽灯下光照2小时左右逸出尾蝴； 磷光配合物用二甲基亚砜溶解准确配制成I mmol的母液，然后再用PBS缓冲液稀释成 5 μΜ的稀释液；移取200 yL的稀释液加入到荧光成像器皿中，用自制的铁丝圈取新鲜尾 蝴加入到稀释液中，在室温下荧光染色5分钟至6小时，激光共聚焦荧光显微镜观察尾蝴的 磷光标记情况，并采集磷光信号进行荧光成像。
【专利摘要】本发明属于寄生虫病防治的生物光学标记领域，涉及一种磷光铱配合物的合成，并用于血吸虫尾蚴的荧光标记。要解决的技术问题是如何实现磷光配合物的合成和其对尾蚴的荧光标记。铱配合物的结构是通过两个含氮芳香化合物为双齿配体、辅以一个含双氮芳香化合物，配位形成铱配合物。尾蚴荧光标记方法包括如下步骤：(1)取得新鲜尾蚴；（2）磷光配合物用二甲基亚砜溶解准确配制成1？mmol的母液，然后再用PBS缓冲液稀释成5μM的稀释液；（3）在室温下荧光染色；（4）采集磷光信号进行荧光成像。通过设计与合成，将磷光铱配合物作为荧光探针用于血吸虫尾蚴荧光标记，成功地解决了尾蚴荧光成像过程中自发荧光干扰与光漂白的问题。
【IPC分类】C07F15/00, C09K11/06, G01N21/64
【公开号】CN105061515
【申请号】CN201510480266
【发明人】吴勇权, 曾冠杰, 吴任苗, 范小林
【申请人】赣南师范学院
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年8月8日