采用粒子晶体形态优化技术制备的n-(2)-l-丙氨酰-l-谷氨酰胺化合物及制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种采用粒子过程晶体产品分子组装与形态 优化技术制备的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物及其制剂。
【背景技术】
[0002] 谷氨酰胺是人体内含量最为丰富的氨基酸之一，作为机体必需氨基酸，对多种器 官及组织细胞具有重要而独特的代谢功能，但是由于其对酸碱、高温等不稳定，导致其临床 应用受限。而谷氨酰胺与丙氨酸缩合形成的二肽产物一丙氨酰谷氨酰胺具有较好的水溶 性，能耐受高温消毒，，常温下放置两年仍保持稳定，在人体内能迅速分解成L-谷氨酰胺 和L-丙氨酸，弥补了L-谷氨酰胺的不足，因此在临床上被广泛用作谷氨酰胺的替代品。
[0003] 丙氨酰谷氨酰胺最早由德国森尤斯研制，1999年进口到中国。丙氨酰谷氨酰胺作 为肠外营养药物，可用于提高患者细胞免疫功能，有效降低危重患者的感染风险，尤其对严 重感染、恶性肿瘤等重伤病人的治疗和恢复有重要作用，可缩短患者总住院时间。丙氨酰谷 氨酰胺的使用能较好地维持血循环中淋巴细胞总数，缓解手术及化疗导致的免疫抑制。丙 氨酰谷氨酰胺作为肠外营养的使用是十分有效的，能减轻胃肠癌手术化疗患者机体的蛋白 分解，有效地改善氮平衡，维持血循环中淋巴细胞的数目，从而改善患者营养状况，增强机 体对手术及化疗的耐受性，被公认为是肠外营养一个十分重要的组成部分。
[0004]目前已知的制备丙氨酰谷氨酰胺的方法有如下3种：
[0005] (1)以高光学纯度的手性试剂氯丙酸为起始原料与氯化亚砜反应生成氯丙酰 氯，然后与L一谷氨酰胺在碱性条件下反应得到。最后在浓氨水中氨解得N-(2)_L-丙氨 酰-L-谷氨酰胺。国外申请的专利大多为此种方法，该方法的缺陷是所用原料为手性试剂， 极为昂贵，不适于大规模工业生产。同时合成酰氯的步骤中所需温度较高会产生较多副反 应在最后一步中可能产生内消旋体，对分离造成困难。且所合成的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺 旋光低。
[0006] (2)以L-丙氨酸为原料与0)(：12反应生成N-羧酸酐然后与L-谷氨酰胺在水中反 应PH值保持在10左右得到N-2-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。该方法反应步骤少而简单，但该 反应使用到的光气为剧毒物质，不利于管理，且对从业人员的操作规范要求极高，万一泄露 会造成极大的危险和财产损失。
[0007] (3)以L-丙氨酸为原料，采用二碳酸二叔丁酯保护丙氨酸得到Boc-丙氨酸， Boc-丙氨酸的羧基用不同试剂活化生成不同的活性中间体，接着与L-谷氨酰胺在碱性条 件下缩合生成Boc-丙氨酸-谷氨酰胺，然后用TFA水解脱去保护基得到N-(2) -L-丙氨 酰-L-谷氨酰胺。该线路步骤较多，合成繁琐，所以总产率很低。
[0008] 上述3种丙氨酰谷氨酰胺的常规制备方法，除上述缺陷外，制备过程中均缺乏对 晶体形态的优化过程，因而其化合物性能方面都存在单方面的局限性。
[0009] 为了克服上述制备中的问题，本发明人提出了一种采用粒子过程晶体产品分子组 装与形态优化技术制备N- (2) -L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物的方法。此方法对晶体形成过 程进行了优化控制，得到了纯度高、收率高、引湿性低、稳定性好的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷 氨酰胺化合物。制备过程中使用的合成原料价格均较低，毒性低，过程易于控制，工业化价 值高。
[0010] 使用上述发明中所述的N- (2) -L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物为原料，制备丙氨酰 谷氨酰胺药物组合物。该制剂制备过程中不需任何赋形剂，较以往产品制备过程更加简单 且具有更好的稳定性，从而完成了本发明。
【发明内容】
[0011] 本发明的目的之一在于提供一种N- (2) -L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物，该化合物 通过采用粒子过程晶体产品分子组装与形态优化技术制备而来，具有纯度高、收率高、引湿 性低、稳定性好的特点。
[0012] 本发明所述的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物制备包括下列步骤：
[0013] UBoc-L-丙氨酸的合成
[0014] 将水和2-甲基四氢呋喃、L-丙氨酸混合降温，加入氢氧化钠和二碳酸二叔丁酯反 应，用稀盐酸调pH，用有机溶剂萃取3次，用饱和食盐水洗，有机相加入无水Na2SO4干燥5小 时，过滤，负压旋蒸，得到Boc-L-丙氨酸。
[0015] 2、N-羧基酸酐的合成
[0016] 将Boc-L-丙氨酸、双（三氯甲基）碳酸酯、2-甲基四氢呋喃混合反应，悬蒸浓缩， 加入正己烷，静置，抽滤，取滤出固体用2-甲基四氢呋喃溶解、过滤，取滤液悬蒸浓缩，加入 正己烷、静置，抽滤，即得N-羧基酸酐。
[0017] 3、N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物的合成
[0018] 将N-羧基酸酐溶于2-甲基四氢呋喃中，然后加入含L-谷氨酰胺、氢氧化钠的混 合水溶液中反应，用2-甲基四氢呋喃洗3次，取水层，备用。使用pH4. 2柠檬酸缓冲液洗涤 弱碱性阴离子交换树脂，洗至流出液PH为4. 2,将上述N- (2) -L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液 上柱进行分离，结束后用75 %乙醇进行洗脱，负压旋蒸，得N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺 化合物。
[0019] 优选地，上述合成步骤1中，水、2-甲基四氢呋喃和L-丙氨酸的重量比为 5:0. 5:0. 05〇
[0020] 优选地，上述合成步骤1中，向水、2-甲基四氢呋喃和L-丙氨酸混合溶液中加入氢 氧化钠和二碳酸二叔丁酯时的温度为〇~2°C。
[0021] 优选地，上述合成步骤1中，所述氢氧化钠和二碳酸二叔丁酯加入的重量比为 1:3 ~1:5〇
[0022] 优选地，上述合成步骤1中，所述反应条件为温度16~18°C、时间8~12小时。
[0023] 优选地，上述合成步骤1中，所述稀盐酸调节的pH为1. 5~3. 0。
[0024] 优选地，上述合成步骤1中，所述有机溶剂为醚类溶剂（如二乙醚，四氢呋喃）、酯 类溶剂（如乙酸乙酯）、卤代烃类溶剂（如二氯甲烧，氯仿）、硝基烃类溶剂（硝基甲烧、硝 基乙烷）烷烃类溶剂（如甲醇、异戊醇）。更优选地为乙酸乙酯。
[0025] 优选地，上述合成步骤2中，所述Boc-L-丙氨酸、双（三氯甲基）碳酸酯和2-甲 基四氢呋喃的重量比为1:4:8。
[0026] 优选地，上述合成步骤2中，所述反应条件为温度0~2°C、时间1~2小时。
[0027] 优选地，上述合成步骤3中，所述N-羧基酸酐与2-甲基四氢呋喃的重量比为 1:5 ~1:10〇
[0028] 优选地，上述合成步骤3中，所述L-谷氨酰胺、氢氧化钠和纯化水的重量比为 1:0. 5 ~0. 8:50。
[0029] 优选地，上述合成步骤3中，所述反应条件为温度15~25°C，时间0. 5~2小时。
[0030] 优选地，上述所有合成步骤中，所述负压旋蒸条件均为温度30°C，压力-0. 5MPa。
[0031] 综上所述的N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物采用粒子过程晶体产品分子组 装与形态优化技术制备，具体步骤为将水、2-甲基四氢呋喃和L-丙氨酸混合，降温至0~ 2°C时，加入氢氧化钠和二碳酸二叔丁酯16~18°C反应8~12小时，用稀盐酸调pH至 1. 5~3. 0,用有机溶剂萃取3次，用饱和食盐水洗3次，有机相加入无水Na2SO4干燥5小时， 过滤，压力-〇? 5MPa，30°C旋蒸，得到Boc-L-丙氨酸；将Boc-L-丙氨酸、双（三氯甲基）碳酸 酯、2-甲基四氢呋喃混合0~2°C反应1~2小时，压力-0. 5MPa，30°C旋蒸浓缩，加入正己 烷，静置，抽滤，取滤出固体用2-甲基四氢呋喃溶解、过滤，取滤液压力-0. 5MPa，30°C旋蒸 浓缩，加入正己烷、静置，抽滤，即得N-羧基酸酐；将N-羧基酸酐溶于2-甲基四氢呋喃中， 然后加入含L-谷氨酰胺、氢氧化钠的混合水溶液中15~25°C反应0. 5~2小时，用2-甲 基四氢呋喃洗3次，取水层，备用。使用pH4. 2柠檬酸缓冲液洗涤弱碱性阴离子交换树脂， 洗至流出液pH为4. 2,将上述N- (2) -L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液上柱进行分离，结束后用 75%乙醇进行洗脱，压力-〇. 5MPa，30°C旋蒸，得N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺化合物。
[0032] 本发明第二目的在于提供一种包含本发明所述丙氨酰谷氨酰胺化合物的丙氨酰 谷氨酰胺药物组合物的制备工艺，该制备工艺具有如下特点：制备过程操作简单，不需任何 赋形剂，较以往产品具有更好的稳定性。
[0033] 本发明所述的丙氨酰谷氨酰胺药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
[0034] (1)在万级洁净区配料室内，将采用上述方法制备的丙氨酰谷氨酰胺化合物加注 射用水溶解，加入药用活性炭，搅拌吸附，粗滤脱碳，再经〇. 45ym和0. 22ym微孔滤膜串联 精滤，然后分装于冻干托盘中，冷冻干燥，得丙氨酰谷氨酰胺无菌冻干粉末。
[0035] (2)在百级洁净区，控制相对湿度低于45%，用自动分装机进行无菌分装，加塞， 乳盖。
[0036] 优选地，上述制备方法中，所述丙氨酰谷氨酰胺水溶液浓度为10%~30%。
[0037] 优