图；泳道2为用VHSV-P以VHSV的 RNA为模板的PCR扩增产物的电泳图；泳道3为用IHNV-P以IHNV的RNA为模板的PCR扩 增产物的电泳图。
[0047] 图2为SVCV测序结果。
[0048] 图3为VHSV测序结果。
[0049] 图4为IHNV测序结果。
[0050] 图5为SVCV-P的特异性检测结果。其中，泳道M为DL2000Marker;泳道1的模板 为SVCV;泳道2的模板为VHSV;泳道3的模板为IHNV;泳道4的模板为EHNV;泳道5的模 板为HRV;泳道6的模板为IPNV;泳道7的模板为VNNV;泳道8的模板为KHV;泳道9为阴 性对照。
[0051] 图6为VHSV-P的特异性检测结果。其中，泳道M为DL2000Marker;泳道1的模板 为VHSV;泳道2的模板为SVCV;泳道3的模板为IHNV;泳道4的模板为EHNV;泳道5的模 板为HRV;泳道6的模板为IPNV;泳道7的模板为VNNV;泳道8的模板为KHV;泳道9为阴 性对照。
[0052] 图7为IHNV-P的特异性检测结果。其中，泳道M为DL2000Marker;泳道1的模板 为IHNV;泳道2的模板为SVCV;泳道3的模板为VHSV;泳道4的模板为EHNV;泳道5的模 板为HRV;泳道6的模板为IPNV;泳道7的模板为VNNV;泳道8的模板为KHV;泳道9为阴 性对照。
[0053] 图8为SVCV-P的灵敏度实验结果。其中，泳道M为DNA分子量Marker，各条带分 子量大小从上至下依次为 2500bp、2000bp、1500bp、1000bp、750bp、500bp、250bp和 100bp; 泳道1的模板为1000拷贝/50yL的PMD18-T-SVCV;泳道2的模板为100拷贝/50yL的 PMD18-T-SVCV;泳道3的模板为10拷贝/50yL的PMD18-T-SVCV;泳道4的模板为1拷贝 /50yL的PMD18-T-SVCV;泳道5和6为阴性对照。
[0054] 图9为VHSV-P的灵敏度实验结果。其中，泳道M为DNA分子量Marker，各条带分 子量大小从上至下依次为200(^口、100(^口、75(^口、50(^口、25(^口和10(^ ?;泳道1的模板为 1000 拷贝 /50yL的PMD18-T-VHSV;泳道 2 的模板为 100 拷贝 /50yL的PMD18-T-VHSV; 泳道3的模板为10拷贝/50yL的PMD18-T-VHSV;泳道4的模板为1拷贝/50yL的 PMD18-T-VHSV;泳道5、6、7、8和9为阴性对照。
[0055] 图10为IHNV-P的灵敏度实验结果。其中，泳道M为DNA分子量Marker，各条带分 子量大小从上至下依次为 2500bp、2000bp、1500bp、1000bp、750bp、500bp、250bp和 100bp; 泳道1的模板为1000拷贝/50yL的PMD18-T-IHNV;泳道2的模板为100拷贝/50yL的 PMD18-T-IHNV;泳道3的模板为10拷贝/50yL的PMD18-T-IHNV;泳道4的模板为1拷贝 /50yL的PMD18-T-IHNV;泳道5和6为阴性对照。
【具体实施方式】
[0056] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
[0057] 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0058] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0059] 下述实施例中的鲤春病毒血症病毒（SVCV)(付峰；刘荭；黄使；蔡生力.鲤春病毒 血症病毒（SVCV)的研究进展[J].中国水产科学，2006(02))公众可从中华人民共和国山东 出入境检验检疫局获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途 使用。
[0060] 下述实施例中的病毒性出血性败血症病毒（VHSV)(倪穗；余晓巍；王建平等.应 用巢式逆转录聚合酶链反应检测鱼类病毒性出血性败血症病毒（VHSV)[J].海洋与湖沼， 2009(07))公众可从中华人民共和国山东出入境检验检疫局获得，该生物材料只为重复本 发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
[0061] 下述实施例中的传染性造血器官坏死病毒（IHNV)(岳志芹；刘荭；梁成珠等.实 时定量RT-PCR检测鱼类传染性造血器官坏死病毒方法的建立与应用[J].水生生物学报， 2008(01))公众可从中华人民共和国山东出入境检验检疫局获得，该生物材料只为重复本 发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
[0062] 下述实施例中的流行性造血器官坏死病毒（EHNV)(黄辉三；李明玉；母尹楠 等.流行性造血器官坏死病毒（EHNV)PCR快速检测试剂盒的研制.台湾海峡，2011(01))公 众可从中华人民共和国山东出入境检验检疫局获得，该生物材料只为重复本发明的相关实 验所用，不可作为其它用途使用。
[0063] 下述实施例中的传染性胰脏坏死病病毒（IPNV)(徐晔；段宏安；周毅.实时荧光 定量RT-PCR检测鱼类传染性胰脏坏死病病毒方法的建立.安徽农业科学，2011 (11))公众 可从中华人民共和国山东出入境检验检疫局获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验 所用，不可作为其它用途使用。
[0064] 下述实施例中的牙鲆弹状病毒（HRV)(孙颖杰，岳志芹，刘荭等.牙鲆弹状病毒 环介导等温扩增检测方法的建立与应用[J].华中农业大学学报，2010, 29(2))公众可从中 华人民共和国山东出入境检验检疫局获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用， 不可作为其它用途使用。
[0065] 下述实施例中的病毒性神经坏死病病毒（VNNV)(刘荭；史秀杰；高隆英等.鱼 病毒性神经坏死病病毒（VNNV)不同基因型鉴别方法的建立及在VNN检疫和监测中的应 用.水产学报，2004(06))公众可从中华人民共和国山东出入境检验检疫局获得，该生物材 料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
[0066] 下述实施例中的锦鲤疱疹病毒（KHV)(李俊超，马杰，曾令兵等.抗锦鲤疱疹病 毒的植物药物筛选及其效果比较[J].淡水渔业，2014,（3) :62-67)公众可从中华人民共和 国山东出入境检验检疫局获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其 它用途使用。
[0067] 下述实施例中的pMD18_Tsimple载体为宝生物工程（大连）有限公司产品，货号 为。
[0068] 下述实施例中的链霉亲和素包被的磁珠为Dynabeads*M_280Tosylactivated(Dy nabeads品牌产品），在北京思尔成生物技术有限公司的货号为142-03。
[0069] 下述实施例中的真空吸附栗（vacuumpreptool)为德国QIAGEN产品。
[0070] 下述实施例中的变性缓冲液（denatureationbuffer)为德国QIAGEN产品，货号 为 19083。
[0071] 下述实施例中的冲洗缓冲液（washing buffer)为德国QIAGEN产品，货号为 19086。
[0072] 实施例1、用于检测鲤春病毒血症病毒、病毒性出血性败血症病毒和传染性造血器 官坏死病毒的引物的制备
[0073] 检测鲤春病毒血症病毒（SVCV)指纹序列的物质包括鲤春病毒血症病毒指纹序列 的测序引物SVCV-S和扩增鲤春病毒血症病毒指纹序列的引物对SVCV-P。所述鲤春病毒 血症病毒指纹序列为序列表中SEQIDNo. 1的第511-526位核苷酸。所述SVCV-S为序列 表中SEQIDNo. 4所示的单链DNA;所述SVCV-P为由序列表中SEQIDNo. 2所示的单链 DNA(SVCV-P-F)和SEQIDNo. 3 所示的单链DNA(SVCV-P-R)组成的引物对，所述SVCV-P-R 的Y端有生物素标记，SVCV-P的扩增产物为序列表中SEQIDNo. 1的第454-591位核苷 酸所示的DNA分子，扩增产物为138bp。其中，SEQIDNo. 1为鲤春病毒血症病毒G基因的 DNA序列（NCBI中的登录号为AJ318079. 1)。
[0074] 检测病毒性出血性败血症病毒（VHSV)指纹序列的物质包括病毒性出血性败血 症病毒指纹序列的测序引物VHSV-S和扩增病毒性出血性败血症病毒指纹序列的引物对 VHSV-P。所述病毒性出血性败血症病毒指纹序列为序列表中SEQIDNo. 5的第451-467位 核苷酸。所述VHSV-S为序列表中SEQIDNo. 8所示的单链DNA;所述VHSV-P为由序列表 中SEQIDNo. 6 所示的单链DNA(VHSV-P-F)和SEQIDNo. 7 所示的单链DNA(VHSV-P-R)组 成的引物对，所述VHSV-P-R的5'端有生物素标记，VHSV-P的扩增产物为序列表中SEQID No. 5的第427-631位核苷酸所示的DNA分子，扩增产物为205bp。其中，SEQIDNo. 5为病 毒性出血性败血症病毒G基因的DNA序列（NCBI中的登录号为AB672616. 1)。
[0075] 检测传染性造血器官坏死病毒（IHNV)指纹序列的物质包括传染性造血器官坏 死病毒指纹序列的测序引物IHNV-S和扩增传染性造血器官坏死病毒指纹序列的引物对 IHNV-P。所述传染性造血器官坏死病毒指纹序列为序列表中SEQIDNo. 9的第553-565位 核苷酸。所述IHNV-S为序列表中SEQIDNo. 12所示的单链DNA;所述IHNV-P为由序列表 中SEQIDNo. 10 所示的单链DNA(IHNV-P-F)和SEQIDNo. 11 所示的单链DNA(IHNV-P-R) 组成的引物对，所述IHNV-P-R的5'端有生物素标记，IHNV-P的扩增产物为序列表中SEQ IDNo. 9的第532-592位核苷酸所示的DNA分子，扩增产物为6lbp。其中，SEQIDNo. 9为 传染性造血器官坏死病毒N基因的DNA序列（NCBI中的登录号为FJ265710. 1)。
[0076] 表1、SVCV、VHSV和IHNV的指纹序列和引物
[0077]
[0078] 实施例2、SVCV-P、VHSV-P和IHNV-P扩增条件的优化
[0079] 1、重组载体的构建
[0080] 将pMD18_Tsimple载体BamHI和Hindlll识别位点间的序列替换为SEQIDNo. 1 所示的核苷酸序列（即SVCVG基因），保持PMD18-Tsimple载体的其他序列不变，得到重 组载体，将该重载载体命名为PMD18-T-SVCV。
[0081] 将pMD18-Tsimple载体HindIII和XhoI识别位点间的序列替换为SEQIDNo. 5 所示的核苷酸序列（即VHSVG基因），保持pMD18-Tsimple载体的其他序列不变，得到重 组载体，将该重载载体命名为PMD18-T-VHSV。
[0082] 将pMD18_Tsimple载体Hindlll和B