和测试的任何 其他细胞系中为可重复的。
[0065]MSRl序列的激活和桔抗
[0066] 能够直接或间接改变MSRl元件活性的药物能够为许多疾病提供强效的治疗/处 理，因为它具有改变受MSRl簇自然调控的基因中的任何一种的基因表达的潜能。
[0067] 激活（活化）化合物可用于上调一种或多种基因的表达。MSRl簇的激活对与包含 MSRl的基因中的突变相关的常染色体显性病况特别有用，其中所述疾病机制为单倍型不足 或功能丧失。可能存在许多多基因疾病，其中MSRl元件的激活将具有治疗价值（表3和 4)〇
[0068] 拮抗（失活）化合物可用于下调一种或多种基因的表达。这对于疾病的治疗方法 极其有用，其中包含MSRl的基因的过表达对于发病是重要的，如许多类型的癌症。可能存 在许多多基因疾病，其中MSRl元件的拮抗具有治疗价值（表3和4)。
[0069] 这些序列中的任何一种的药物操纵能够用作治疗方法。以下可能是必需的：将需 要开发组织特异性的和MSRl特异性的药物，以解决许多基因座处同时发生的基因表达异 常调控的问题。MSR元件簇-频率的全基因组的列表显示在表1中。
[0070] 基_治疗方法
[0071] MSRl元件能够用作基因治疗情形下强效的治疗工具。
[0072] 基因治疗属于涉及通过给予患者遗传物质而治疗和治愈疾病的医药领域。最常用 的基因治疗策略包括使用病毒载体。这一系统使用已被修饰为无病原性的天然存在的病毒 作为用于基因递送的"媒介物"，常用的病毒载体的实例包括逆转录病毒、腺病毒和腺相关 病毒（AAV)。AAV组群为最常用的病毒载体，因为已证明它们是最安全、最有效的并且能够 提供良好的长期稳定的基因转移。有时也使用非病毒基因载体，其由通过非病毒"媒介物" 递送的DNA质粒组成。实例包括化学载体（如基于阳离子聚合物、脂质、清洁剂和肽的技 术）或纳米粒子。
[0073] 基因治疗的一个关键方面是能够控制所转导的基因的表达水平，以便获得足够的 水平用于治病，而无潜在地有害的基因过表达。这一概念与所有基因治疗有关，而不管所使 用的载体系统。缺少稳健的方法来调控转导的基因表达水平已阻碍了基因治疗领域的进 展。已在患有晚期或终末期疾病的患者中进行了例如帕金森氏病的基因治疗的临床试验
[26]，由于安全性的考虑，禁止早期干预，导致了令人失望的结果[27]。因此，具有严格基因 表达调控的载体的开发已成为基因治疗领域中的重要目标。
[0074] 通用MSRl序列可用于控制载体递送系统如AAV、其他病毒载体和非病毒体系中所 需的基因的表达。所有载体均包含核心启动子序列，其驱动所需的基因的表达。已证明当 位置靠近核心启动子时，MSRl的可变拷贝数能够改变基因表达（图3)。
[0075] 在这种情况下，2个拷贝的元件增强报告子活性（相比单独的pTK核心启动子）约 2.8倍，3个拷贝的元件中度增加活性（1.3倍），而4个拷贝的元件降低报告子活性（0.6 倍）。可以看出这是一个逐步的效应，因此可能较高拷贝数的MSRl元件会继续降低报告子 活性，而一个拷贝可能进一步增加活性。在本实例中，显然这一策略将允许小心控制转导的 基因的基因表达。
[0076] 此外，预测能够通过在MSRl元件与核心启动子之间引入"填充序列"来介导基因 表达的更显著的变化。
[0077] 已显示当重复元件距离核心启动子约180bp时，MSR1CNV对报告子活性具有显著 的影响（图2)。可能的是，该序列长度的改变，与MSRl拷贝数改变和序列的较小改变组合 将对基因表达水平产生不同的影响。因此，这一策略能够允许开发"基因滴定法"，其中载体 中的基因表达水平能够被严格控制，直到实现最佳的基因表达。
[0078] 将这一方法应用于体外基因疗法的开发以确定基因表达的正确水平，以及用于临 床试验（体内）是可能的，其中可以使用基因的初始剂量并根据临床结果进行变化。
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