l)DCC,活化 30min〇 称取 6. 28g(12. 5mmol) Tos.Glu(OBzl) -OBzl于25血小立角瓶中，用THF溶解后，用NMM调抑至7,然后将该溶液滴 加至茄形瓶的反应液中，最后用NMM调反应液抑值至8。室温反应过夜，TLC显示反应完毕 后，反应混合物减压浓缩至于，残留物加20mL己酸己醋溶解，过滤除去二环己基脈值CU)， 滤液层依次用饱和Na肥〇3溶液（20血X3)，饱和化C1水溶液（20血X3)，5 %K服〇4水溶液 (20血X3)，饱和化C1水溶液（20血X3)，饱和Na肥化水溶液（20血X3)，饱和化C1水溶液 (20血X扣各洗H遍，有机层用无水Na2S〇4干燥，过滤、滤液减压浓缩至干，得到的黄色油状 物经硅胶柱层析纯化（二氯甲焼/甲醇为洗脱剂），得到4. 5g(81. 8%)标题化合物，为无 色固体。ESI-MS(m/z) :559[M+田+。
[0028] 实施例6化合物肥1 ?Met-Glu(OBzl) -OBzl的制备
[0029]称取2. Olg (3.6mmol) Boc-Met-Glu (OBzl)-OBzl于100血茄形瓶中，冰浴下加入 26. 4mL4N氯化氨己酸己醋溶液，冰浴反应化后点板反应完全，减压浓缩，加入EA溶解再浓 缩，反复3次，加入己離，浓缩3次得到1.5g巧0. 1% )标题化合物，为无色固体。
[0030] 实施例7化合物3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲醜-Met-Glu (OBzl) -0BzU5)的 制备
[003U称取100mg(0. 61mm0U3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-駿酸于100血茄形瓶中，加 入40血DMF。在冰浴和揽拌下依次加入67mg〇). 48mmol)册Bt及170mg(0. 73mmol)DCC，活 化 30min。称取 500mg〇). 17mmol)肥1 ?Met-Glu((ffizl)-(ffizl于 25血小H角瓶中，用DMF 溶解后，用NMM调抑至7,然后将该溶液滴加至茄形瓶的反应液中，最后用NMM调反应液抑 值至8。室温反应过夜，TLC显示反应完毕后，反应混合物减压浓缩至干，残留物加20mL二 氯甲焼溶解，过滤除去二环己基脈值CU)，滤液层依次用饱和胞肥〇3水溶液（20mLX3)和 饱和化C1水溶液（20mLX3)各洗H遍，有机层用无水Na2S〇4干燥，过滤、滤液减压浓缩至 干，得到的黄色油状物经硅胶柱层析纯化（二氯甲焼/甲醇为洗脱剂），得到的淡黄色固 体，经二氯甲焼/石油離重结晶得50mg(24.7%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z): 602[M-田-;Mp;41-43°C;[a]〇25 = -11. 67(c= 0. 1，甲醇）；IR(邸r) ;3336,3201，2958， 2850,1735,1651,1616,1577,1504,1458,1384,1361,1334,1296,941,794,736,698,516, 458;lH-NMR(300MHz，DMS0-d6) :5/卵m= 13.17(s，lH)，8.99(s，lH)，8.79(d，J= 9Hz, 1H)，8.66(d，J = 9Hz，lH)，8. 55(s，lH)，8. 25(s，lH)，7. 33(m，10H)，5. 13(s，2H)，5. 06(s，2H)，4. 69 (m，IH)，4. 41 (m，IH)，2. 46 (m，3H)，1. 76-2. 15 (m，6H)，1. 10 (m，2H)。
[0032] 实验例1评价化合物5的抗血栓活性
[0033] 将聚己帰管拉成一端为斜口的细管，定长为10. 0cm，分别为右经静脉（管径较粗） 及左颈动脉（管径较细）插管；中段聚己帰管定长为8. 0cm，血栓线压在颈动脉插管方向， 插管前需在管中充满肝素。
[0034] 化合物5W含吐温80的生理盐水溶解，W20nmol/kg的剂量灌胃，30分钟后腹腔 注射20%的乌拉坦进行麻醉。仰邸位将大鼠固定于鼠板上，剪开颈部皮肤，分离右颈总动 脉及左颈静脉，血管下压线，结扎远必端，静脉靠远必端处剪一小口，进行静脉端插管，注射 肝素，系线固定，再用动脉夹夹住动脉近必端，靠近远必端方向剪一小口，进行动脉端结扎， 系线固定后松开动脉夹，建立体外循环旁路。循环15分钟后先剪断静脉端观察血液循环 是否正常，若正常从动脉端取出血栓线，在纸上沾干浮血后称量并记录其湿重，大鼠断颈处 死。每组大鼠10只，最后进行数据统计并评价化合物活性。数据列入表1。从表4可W看 出，化合物5治疗大鼠的血栓重量明显小于含吐温80的生理盐水治疗大鼠的血栓重量。表 明化合物5具有优秀的抗血栓活性。
[0035] 表1.化合物5的抗栓活性
[0036]
[0037]n= 10 ;生理盐水为含吐温80的生理盐水；a)与含吐温80的生理盐水比较P < 0. 01。
【主权项】
1. 下式的 3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲醜-Met-Glu((ffizl)-(ffizl。2. 权利要求1的3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲醜-Met-Glu(OBzl)-OBzl的制备方 法，该方法包括： (1) k组氨酸在稀硫酸催化下与甲醒进行Pictet-Spengler缩合生成6S-4,5,6, 7-四 氨-3H-咪哇并[4,5-C]化巧-6-駿酸； (2) 6S-4,5,6, 7-四氨-3H-咪哇并[4,5-C]化巧-6-駿酸转化为6S-4,5,6, 7-四 氨-3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲酸甲醋； (3) 6S-4,5,6,7-四氨-3H-咪哇并[4,5-c]化巧-6-甲醋用高儘酸钟氧化为3H-咪哇 并[4,5-C]化巧-6-甲酸甲醋； (4) 3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲酸甲醋在化OH溶液（2脚中皂化成3H咪哇并[4， 5-C]化巧-6-甲酸； 巧)Boc-Met与Glu(OBzD-OBz1 偶联得到Boc-Met-Glu(OBzl)-OBzl; 化)Boc-Met-Glu(OBzl) -OBzl在4N氯化氨己酸己醋溶液中脱Boc保护基得到Met-Glu(OBzl)-OBzl； (7) 3H-咪哇并[4,5-C]化巧-6-甲酸与Met-Glu(OBzl)-OBzl残基偶联得到3H-咪哇 并[4,5-C]化巧-6-甲醜-Met-Glu((Bzl)-Cffizl。3. 权利要求1的3H-咪哇并[4, 5-C]化巧-6-甲醜-Met-Glu(OBzl) -OBzl在制备抗血 栓药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了下式的3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-Met-Glu(OBzl)-OBzl。公开了它的制备方法，公开了它的抗血栓活性，因而本发明公开了它在制备抗血栓药物中的应用。
【IPC分类】A61P7/02, C07K5/097, A61K38/06
【公开号】CN105198959
【申请号】CN201410261204
【发明人】赵明, 彭师奇, 吴建辉, 王玉记, 王佳楠, 利鹏, 吕希佳
【申请人】首都医科大学
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2014年6月13日