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【主权项】
1. 细菌生长培养基，所述细菌生长培养基包含： ⑴柠檬酸； (Ii)H3PO4; (iii) 约 〇g/l-约 4g/l(NH4)2SO4; (iv) Ca(NO3)2; (V)MnSO4 ? 7H20 ; (Vi)FeSO4 ? 7H20 ; (vii)KCl; (viii) 约 20g/l_ 约 40g/lNaCl; (ix) MgCl2 ? 6H20 ; (x) 约 42g/l-约 255g/l玉米浆； (xi) 约lg/1-约40g/l转化的高级糖蜜；以及 (xii) 约 0? 约f5ml/l消泡剂； 其中，所述生长培养基的PH为约5-约8。2. 如权利要求1所述的细菌生长培养基，其中，所述生长培养基包含： ⑴约lg/1柠檬酸； (ii) 约 2. 5ml/lH3PO4; (iii) 约 0.4g/lCa(NO3)2; (iv) 约 0? 040g/lMnSO4 ? 7H20 ; (v) 约 0? 032g/lFeSO4 ? 7H20 ; (vi) 约lg/1KCl; (vii) 约 30g/lNaCl; (viii) 约 2. 3g/lMgCl2 ? 6H20 ; (ix) 约54. 4g/l玉米衆； (x) 约24g/l转化的高级糖蜜；以及 (xi) 约lml/1消泡剂； 其中，所述生长培养基的PH为约6. 5。3. 如权利要求1或2所述的细菌生长培养基，其中，与海洋肉汤（MB)培养基相比，所述 细菌生长培养基支持显著更高的细胞产率（g/1/h)。4. 用于生产益生菌组合物的工艺，所述工艺包括如下步骤： 通过将活的Vibriomidae细胞的培养物接种至接种物培养基，制备预发酵培养物； 将所述预发酵培养物接种至权利要求1-3中任一项所述的生长培养基； 在Vibriomidae细胞的生长期期间，控制所述生长培养基的pH、温度、气流量、氧饱和 度和背压； 在对数生长中期和稳定生长期之间，当Vibriomidae细胞处于稳定形式且其中的活细 胞的浓度为2XIO8个细胞/ml至IX10 11个细胞/ml时，收集Vibriomidae细胞；以及 通过将所收集的Vibriomidae细胞重悬于缓冲液中，生产液体产品。5. 如权利要求4所述的工艺，所述工艺进一步包括如下步骤： 将所述液体产品与载体、稳定剂或填料进行混合，以形成生物质糊状物；以及 将所述生物质糊状物进行干燥，以生产干燥产品。6. 如权利要求4或5所述的工艺，其中，所述工艺为间歇工艺。7. 如权利要求4-6中任一项所述的工艺，其中，进入反应器中的气流量为0.5v/v/ m-2.Ov/v/m，优选所述反应器中的气流量为lv/v/m。8. 如权利要求4-7中任一项所述的工艺，其中，所述发酵培养基中的溶解氧处于 20% -100%的饱和度，优选所述溶解氧维持在30%的饱和度。9. 如权利要求4-8中任一项所述的工艺，其中，所述反应器中的背压为0-250kPa，优选 所述反应器中的背压为50kPa。10. 如权利要求4-9中任一项所述的工艺，其中，将所述Vibriomidae细胞在 20°C_34°C的温度下于所述培养基中进行培养，优选将所述Vibriomidae细胞在30°C的温 度下于所述培养基中进行培养。11. 如权利要求4-10中任一项所述的工艺，其中，所述培养基具有的pH为5. 0-8. 0,优 选所述pH为6. 5。12. 如权利要求4-11中任一项所述的工艺，其中，通过离心或过滤从所述生长培养基 中收集Vibriomidae细胞。13. 如权利要求4-12中任一项所述的工艺，其中，将所收集的Vibriomidae细胞重悬 于磷酸盐缓冲液中，以生产液体产品。14. 如权利要求4-13中任一项所述的工艺，其中，将所述液体产品与载体组合以形成 混合产品，所述载体选自于由微晶纤维素、海藻糖、蔗糖和脱脂奶或它们的组合所组成的 组。15. 如权利要求5-13中任一项所述的工艺，其中，将所述生物质糊状物挤出并干燥，以 形成所述干燥产品。16. 如权利要求5-15中任一项所述的工艺，其中，在30°C_70°C的温度下将所述生物质 糊状物挤出，优选在45°C的温度下将所述生物质糊状物挤出。17. 益生菌组合物，所述组合物包含在权利要求1-3中任一项所述的培养基中培养的 活的Vibriomidae细胞，其中，在对数生长中期和稳定生长期之间，当培养物中的活细胞的 浓度为2XIO8个细胞/ml至IX10 11个细胞/ml时，收集Vibriomidae细胞；以及 其中，将所收集的Vibriomidae细胞重悬于缓冲液中。18. 如权利要求17所述的益生菌组合物，其中，将所述重悬的Vibriomidae细胞与载 体、稳定剂或填料进行混合，以形成生物质糊状物；并且其中，所述生物质糊状物是干燥的。19. 权利要求17或18所述的益生菌组合物在鲍鱼水产养殖中的用途。20. 鲍鱼饲料，所述鲍鱼饲料包含权利要求17-19中任一项所述的益生菌组合物，其 中，通过在饲料挤出前进行预混合、真空注入预制备的鲍鱼饲料中或对已有饲料进行表面 涂覆，将所述益生菌组合物与鲍鱼饲料组合。21. 酵母生长培养基，所述酵母生长培养基包含： ⑴柠檬酸； (Ii)H3PO4; (iii) 约 18g/l-约 30g/l(NH4)2SO4; (iv) MgSO4 ? 7H2S04; (V)CaCl2 ? 2H20 ; (vi) 约Og/1-约 40g/lNaCl; (vii)KH2P04； (viii) 约 8g/l-约 212g/l玉米衆； (ix) 约lg/1-约40g/l葡萄糖或HTM;以及 (x) 约 0? 5ml/l_ 约 5ml/l消泡剂； 其中，所述生长培养基的PH为约4-约7。22. 如权利要求21所述的酵母生长培养基，其中，所述生长培养基包含： (i) 约2. 5g/l柠檬酸； (ii) 约 16. 3ml/lH3PO4; (iii) 约 18. 5g/l(NH4)2SO4; (iv) 约 8. 2g/lMgSO4 ? 7H2S04; (v) 约 0? 8g/lCaCl2 ? 2H20 ; (vi) 约 0?lg/1NaCl; (vii) 约 11. 3g/lKH2PO4; (viii) 约 204g/l玉米衆； (ix) 约10g/l葡萄糖或HTM;以及 (x) 约lml/1消泡剂； 其中，所述生长培养基的PH为约5. 6。23. 如权利要求21或22所述的酵母生长培养基，其中，与酵母提取物蛋白胨葡萄糖 (YPD)培养基相比，所述酵母生长培养基支持显著更高的细胞产率（g/1/h)。24. 用于生产益生菌组合物的工艺，所述工艺包括如下步骤： 通过将活的汉逊德巴利酵母细胞的培养物接种至接种物培养基，制备预发酵培养物； 将所述预发酵培养物接种至权利要求21-23中任一项所述的生长培养基； 在汉逊德巴利酵母细胞的生长期期间，控制所述生长培养基的pH、温度、气流量、氧饱 和度和背压； 在对数生长中期和对数生长晚期之间，当活细胞的浓度为4XIO7个细胞/ml至2X10w 个细胞/ml时，收集汉逊德巴利酵母细胞；以及 通过将所收集的汉逊德巴利酵母细胞重悬于缓冲液中，生产液体产品。25. 如权利要求24所述的工艺，所述工艺进一步包括如下步骤： 将所述液体产品与载体、稳定剂或填料进行混合，以形成生物质糊状物；以及 将所述生物质糊状物进行干燥，以生产干燥产品。26. 如权利要求24或25所述的工艺，其中，所述工艺为间歇补料工艺。27. 如权利要求24-26中任一项所述的工艺，其中，进入反应器中的气流量为0. 5v/v/ m-2.Ov/v/m，优选所述反应器中的气流量为lv/v/m。28. 如权利要求24-27中任一项所述的工艺，其中，所述发酵培养基中的溶解氧处于 20% -100%的饱和度，优选所述溶解氧维持在30%的饱和度。29. 如权利要求24-28中任一项所述的工艺，其中，所述反应器中的背压为0-250kPa， 优选所述反应器中的背压为50kPa。30. 如权利要求24-29中任一项所述的工艺，其中，将所述汉逊德巴利酵母细胞在 16°C-34°C的温度下于所述培养基中进行培养，优选将所述汉逊德巴利酵母细胞在24°C的 温度下于所述培养基中进行培养。31. 如权利要求24-30中任一项所述的工艺，其中，所述培养基的pH为4. 0-7. 0,优选 所述pH为5. 6。32. 如权利要求24-31中任一项所述的工艺，其中，通过离心或过滤从所述生长培养基 中收集汉逊德巴利酵母细胞。33. 如权利要求24-32中任一项所述的工艺，其中，将所收集的汉逊德巴利酵母细胞重 悬于磷酸盐缓冲液中，以生成液体产品，优选所述磷酸盐缓冲液包含约4m/m% -20m/m%海 藻糖、优选12. 5m/m%海藻糖；并且其中，所述缓冲液的pH为约4-6,优选所述pH为4. 5。34. 如权利要求25-33中任一项所述的工艺，其中，将所述液体产品与载体组合以形 成混合产品，所述载体选自于由微晶纤维素、海藻糖、蔗糖和脱脂奶或它们的组合所组成的 组。35. 如权利要求25-34中任一项所述的工艺，其中，将所述生物质糊状物挤出并干燥， 以形成所述干燥产品。36. 如权利要求35所述的工艺，其中，在30°C-50°C的温度下将所述生物质糊状物挤 出，优选在45°C的温度下将所述生物质糊状物挤出。37. 益生菌组合物，所述组合物包含在权利要求21-23中任一项所述的培养基中培养 的活的汉逊德巴利酵母细胞，其中，在对数生长中期和对数生长晚期之间，当培养物中的活 细胞的浓度为4XIO7个细胞/ml至2X10 1(]个细胞/ml时，收集汉逊德巴利酵母细胞；以及 其中，将所收集的汉逊德巴利酵母细胞重悬于缓冲液中。38. 如权利要求37所述的益生菌组合物，其中，将所述重悬的汉逊德巴利酵母细胞与 载体、稳定剂或填料进行混合，以形成生物质糊状物；并且其中，所述生物质糊状物是干燥 的。39. 权利要求37或38所述的益生菌组合物在鲍鱼水产养殖中的用途。40. 鲍鱼饲料，所述鲍鱼饲料包含权利要求37-39中任一项所述的汉逊德巴利酵母益 生菌组合物，并且其中，通过在饲料挤出前进行预混合、真空注入预制备的鲍鱼饲料中或对 已有饲料进行表面涂覆，将所述益生菌组合物与鲍鱼饲料组合。41. 鲍鱼饲料，所述鲍鱼饲料包含权利要求17-19中任一项所述的Vibriomidae的益 生菌组合物和权利要求37-39中任一项所述的汉逊德巴利酵母的益生菌组合物。
【专利摘要】本发明涉及利用新型生物加工技术来生产鲍鱼益生微生物的工艺和培养基。目前并不存在用于生产鲍鱼益生菌的商业上可行的生物工艺。本发明促进了如下的鲍鱼益生菌的生物生产：从细菌益生菌Vibrio？midae、或酵母益生菌汉逊德巴利酵母或者它们的组合的小体积低温培养物生产益生菌产物。本发明描述了接种程序、发酵工艺、生物质收集以及将生物质制成可掺入到鲍鱼饲料中的液体产品或干燥产品。
【IPC分类】C12N1/00
【公开号】CN105209596
【申请号】CN201480010923
【发明人】阿韦什·帕索, 加尼西里·穆迪里, 诺杜莫·诺库朗加·苏卢, 拉杰什·拉洛
【申请人】Csir 公司, 开普敦大学
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2014年1月24日
【公告号】WO2014115112A1