一种具有提升性功能的牡蛎肽及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域，具体设及一种具有提升性功能的牡颇肤及其制备方法 和应用。
【背景技术】
[0002] 男性性功能障碍是一个常见病，发病率约占成年男性的10%。随着现代生活节奏 的加快，来自工作、家庭、经济等方面的压力增大，男性发生性功能障碍的概率越高。
[0003] 牡颇，又称嘘、颇黄、海颇子，是一种双壳类软体动物，属软体动物口，瓣觸纲，牡颇 科。牡颇是全球的第一大养殖贝类，主要分布在溫带和热带的各大洋沿岸，同时也是我国四 大养殖贝类之一。《本草拾遗》记载牡颇肉具有"煮食，主虚损，......于姜醋中生食之，主丹 毒，酒后烦热，止渴"的功效。但由于牡颇的生产季节强，且有较强的鱼腥味，限制其应用领 域；目前牡颇主要W鲜吃或作为海产干货出售。因此，W牡颇为原料，结合生物酶解技术制 备蛋白肤产品，拓展其应用领域并提高其附加值，具有较大的经济价值和社会意义。但是在 目前的W酶解技术制备牡颇肤的过程中，酶的使用量偏多造成了生产成本高。同时，不同的 酶解技术所获得的牡颇肤也不太相同，运表现在运些多肤的功效作用及其强弱上，而通过 不同的酶解技术获得高功效的活性多肤一直是技术人员研究的重点。
【发明内容】
[0004] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种具有提升性功能的牡颇肤及其制备方法和 应用，使得所述制备方法能够减少酶的使用量，并且所制备的牡颇肤具有效果更优的提高 性功能和抗氧化的功效，可应用于相关保健品、食品W及药品的制备中。
[0005] 为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：
[0006] 一种具有提升性功能的牡颇肤的制备方法，包括：
[0007]步骤1、将牡颇肉、巧盐和水研磨得到牡颇肉浆液；
[0008] 步骤2、牡颇肉浆液酶解，酶解后离屯、取上清，获得牡颇酶解粗液；
[0009] 步骤3、将牡颇酶解粗液脱色除杂，获得牡颇肤精制液；
[0010] 步骤4、牡颇肤精制液浓缩、喷雾干燥获得所述牡颇肤。
[0011] 本发明针对现有酶解技术中使用酶制剂用量偏多W及目标功效不强、蛋白回收率 不高的缺陷，在对牡颇肉进行酶解提取多肤前，先采用巧盐对其进行预处理，W外加巧离子 激活牡颇肉内源性酶，释放的牡颇肉内源性酶可高效专一水解牡颇蛋白，进而减少商业蛋 白酶的用量，降低生产成本。同时协同后面的酶解步骤，不仅提高了蛋白回收率，还使得所 获得的牡颇多肤具有更佳的功效作用。
[0012] 其中，作为优选，所述巧盐为食品级氯化巧、乳酸巧、碳酸巧、憐酸氨巧或巧樣酸 巧。
[0013] 作为优选，所述巧盐为牡颇肉质量的0. 1-0. 3%的巧盐。
[0014] 在本发明的一些具体实施例中，所述巧盐可W为0. 1 %的氯化巧、0. 3%的乳酸巧 或0.2%的巧樣酸巧。
[0015]作为优选，步骤1中所述水为牡颇肉质量的0.5-1.0倍的软化水。在本发明的一 些具体实施例中，所述水可W为牡颇肉质量的0.5倍的软化水、牡颇肉质量的0.8倍的软化 水或牡颇肉质量的1.0倍的软化水。
[0016] 在使用巧盐预处理牡颇后，进行酶解时均可减少酶制剂的使用量，故常规的酶解 均可，但是作为本发明优选，步骤2为：
[0017] 将牡颇肉浆液先用中性蛋白酶或碱性蛋白酶酶解，然后再用风味蛋白酶酶解，酶 解后灭酶、离屯、，上清液即牡颇酶解粗液。
[0018] 进一步优选地，步骤2为：
[0019] 将牡颇肉浆液至于35~45°C下保溫揽拌1-2小时，然后加入中性蛋白酶或碱性蛋 白酶，调节抑升溫至50~60°C继续水解5-8小时后，调节抑至5. 0-5. 5,加入风味蛋白酶 在50~60°C下继续酶解，2-3小时后灭酶，离屯、，上清液即牡颇酶解粗液。
[0020] 进一步优选地，所述中性蛋白酶为木瓜蛋白酶、渡萝蛋白酶、动物蛋白水解酶、复 合蛋白酶Protamex中的一种或多种；所述中性蛋白酶或碱性蛋白酶的加入量为牡颇肉 浆液质量的0. 3~0.8%〇 ;所述碱性蛋白酶为Alcalase碱性蛋白酶、FoodProA化aline Protease碱性蛋白酶、膜蛋白酶中的一种或多种；所述风味蛋白酶的加入量为牡颇肉浆液 质量的0. 5~1.0%〇。 阳02U其中，对于使用中性蛋白酶酶解时，抑值调整到6. 0-7. 0 ;对于使用碱性蛋白酶酶 解时，抑值调整到7. 5-8. 5。
[0022] 作为优选，步骤3为：
[0023] 往牡颇酶解粗液中添加活性炭揽拌脱色，过滤，所得滤液为牡颇肤精制液。
[0024] 进一步优选地，步骤3为：
[00巧]往牡颇酶解粗液中添加活性炭，45~55°C保溫揽拌0. 5~1. 0小时，过滤，所得滤 液为牡颇肤精制液。
[0026] 采用本发明方法制备的牡颇肤，消耗的中性蛋白酶或碱性蛋白酶未超过0.8%。，风 味蛋白酶未超过1.0%。，而没有采用巧盐预处理的相同酶解工艺，消耗的中性蛋白酶或碱性 蛋白酶为1.0%。，风味蛋白酶也为1.0%。，酶制剂使用量较高。同时，采用本发明酶制剂分两 步进行酶解，相比将其他酶制剂或和本发明相同酶制剂一步酶解的工艺，所获得的牡颇肤 在提升小鼠性功能W及体外抗氧化功能上效果更优。
[0027] 基于上述技术效果，本发明提供了由本发明制备方法制备的牡颇肤，W及所述牡 颇肤在制备提高性功能和/或抗氧化保健品、食品W及药品中的应用。其中，所述药品和保 健品为丸剂、胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒剂、口服液或膏剂。
[0028] 由W上技术方案可知，本发明在对牡颇肉进行酶解前先用巧盐进行预处理，用W 激活释放牡颇内源性酶，减少后续酶解消耗的酶制剂，同时协同牡颇内源性酶，采用特定的 酶制剂组合分两步进行酶解，制备出具有较强的抗氧化活性、可显著提高性功能的牡颇肤。
【具体实施方式】
[0029] 本发明公开了一种具有提升性功能的牡颇肤的制备方法，本领域技术人员可W借 鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域 技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述牡颇肤及其制备方 法和应用已经通过实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围 内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0030] 在具体实施例中设及到牡颇肤体外抗氧化活性（还原力、DPPHICJ的检测方法 和牡颇肤对雄性成熟小鼠提升性功能实验方法参照如下步骤。
[003U 1、采用铁氯化钟还原体系，700nm处测定样品的还原力。将制备的样品W蛋白浓 度进行梯度稀释，取样品液2ml于试管中，加0. 2mol/L憐酸盐缓冲液（PBS，pH6. 6)2ml和 1% (m/V)六合铁氯化钟溶液2ml，混合均匀于50°C恒溫水浴锅中保溫20min，加10%TCA 2ml，充分混匀。取上清液2ml于试管中，加蒸馈水2ml及0. 1 %的化CI3溶液0. 4ml，充分 混匀后静置lOmin，在波长为700nm处测定其吸光度。每个样品按上述步骤操作，平行测定 S次（还原力ICso值指当A700皿=0. 5时，样品的蛋白浓度，单位为mg/ml)。
[0032] 2、选择雄性成熟小鼠，体重18~22g，随机分为空白对照组、样品组、对比样品组， 每组12只，连续给药28d。
[0033] 实验前4她，每只雌鼠皮下注射苯甲酸雌二醇（0. 02mg/只），使雌鼠动情期相同， 试验于晚上7-11时进行。末次给药30min后，将雄性小鼠单独放入笼中5min，使其适应环 境，然后每笼加入1只雌鼠，观察记录下列指标：
[0034] ①雌鼠投入至雄鼠第1次扑捉雌鼠的时间（捕捉潜伏期）；
[0035] ②20min内雄鼠扑捉雌鼠或爬背的动作次数（扑捉次数）；
[0036] ③20min内雄鼠扑捉雌鼠或爬背成功后出现祿阴茎的次数（射精次数）；
[0037] ④自爬背成功出现祿阴茎的时间（射精潜伏期）。
[0038] ⑥20min内各组的扑捉百分率和射精百分率。
[0039] 捕捉百分率=捕捉动物数/动物总数 阳040]射精百分率=射精动物数/动物总数
[0041] 数据处理：采用SPSS19.O软件对实验数据进行分析，每组实验数据均W均值表 示，各组总体方差满足方差齐性条件时，多组间比较采用单因素方差分析；当各组总体方差 不满足方差齐性条件时，