滤液为牡颇肤精制液。
[0087] (4)采用真空浓缩法将牡颇肤精制液浓缩至固形物40%，进行喷雾干燥，得对比 样品1。 阳0蝴对比例2对比牡颇肤的制备方法
[0089] (1)将牡颇去壳，取肉清洗干净，过绞肉机绞碎，加入牡颇肉碎肉质量0. 1 %的氯 化巧和0. 8倍的水，然后过胶体磨得到牡颇肉浆液。
[0090] (2)将牡颇肉浆液至于40°C下保溫揽拌1. 5小时后，往牡颇肉浆液内加入其量 1. 0%。的Alcalase和1. 0%。的风味蛋白酶，体系抑调至8. 0,在50°C下保溫水解11小时，然 后在95°C下加热15min进行灭酶，最后离屯、，取上清液，得到牡颇酶解粗液；
[0091] (3)往牡颇酶解粗液加入其质量0. 5%的活性炭，在55°C下保溫揽拌0. 7小时，过 滤，所得滤液为牡颇肤精制液。
[0092] (4)采用真空浓缩法将牡颇肤精制液浓缩至固形物40%，进行喷雾干燥，得对比 样品2。
[0093] 实施例9 :不同肤样品的酶解蛋白回收率和体外抗氧化活性
[0094] 试验样品：实施例1-3制备的牡颇肤样品1-3,对比例1-2制备的对比样品1-2。 [00巧]结果见下表。
[0096] 表1不同肤样品的酶解蛋白回收率和体外抗氧化活性
[0098] X当样品固形物浓度为img/ml时在A700nm下的吸收值。
[0099] 由表1数据分析可知，采用本发明的方法对牡颇肉进行水解，可得到较高的蛋白 回收率（79. 95-82. 41 % )，而对比例1加入更大量的酶制剂，蛋白回收率仅为71. 24%，主要 是因为本专利首先通过添加酶制剂激活剂（巧盐）激活牡颇肉的内源酶，并在内源酶的最 适溫度下（35-45°C)水解一段时间，促进牡颇肉的自溶，从而减少商业酶制剂用量仍可得 到较好的水解效率；对比例2中的蛋白回收率高达83. 01%，验证了内源酶在水解中的重要 性。
[0100] 同时，采用本发明方法制备的牡颇肤的体外抗氧化值（还原力和DDPH清除率）均 优于对比例样；牡颇肤样品具有更高还原力和更低的DPPHICw值， 阳101] 运主要是因为本发明选择的特定的酶制剂组合W及两步酶解水解更有利于抗氧 化活性的释放。 阳102] 对比例2虽然具有较高的蛋白回收率，但其体外抗氧化值（还原力和DPPH)较低， 由此可证明本专利选择的酶制剂是水解牡颇获取抗氧化活性最佳酶制剂组合。
[0103] 依据本实施例的方法，对牡颇肤样品4-8进行检测，结果显示，牡颇肤样品4-8的 蛋白回收率在82%左右，显著高于对比样品1，与对比样品2差别不明显，但是牡颇肤样品 4-8的还原力在0. 55左右，高于对比样品1和2 ;孤PH清除率，不高于3. 5mg/ml，比对比样 品1和2更低；综合试验结果可知，本发明所提供的牡颇肤样品在具有较高的蛋白回收率的 同时，具有更高还原力和更低的DPPHICs。值。
[0104] 实施例10 :不同牡颇肤样品对雄性小鼠交配能力的影响
[01化]试验样品：实施例1-3制备的牡颇肤样品1-3,对比例1-2制备的对比样品1-2。 阳106] 结果见表2和表3。 阳1〇7] 表2不同牡颇肤样品对雄性小鼠交配能力的影响{孟主及，rr=12)
[0109] 注：**示与对照组比较，P<0. 01，*示与对照组比较，P<0. 05,a示与对比1比较， P<0. 01，b示与对比样2比较，P<0.Ol
[0110]表3不同牡颇肤样品对雄性小鼠交配能力的影响（呆±,,，rp=12)
阳11引注：**示与对照组比较，P<0. 01，*示与对照组比较，P<0. 05,a示与对比1比较，P<0. 01，b示与对比样2比较，P<0.Ol
[0114] 由表2、表3数据分析可知：
[0115] 与空白对照组相比，采用本专利制备的牡颇肤样品（牡颇肤样品1、2、3)在捕捉次 数、射精次数的提升上与空白对照相比有极其显著性差异（P<〇. 01);
[0116] 与空白对照组相比，采用本专利制备的牡颇肤样品（牡颇肤样品1、2、3)，在捕捉 潜伏期、射精潜伏期时间的间隔上与空白对照相比有极其显著性差异（P<〇. 01)，并明显提 高扑捉百分率和射精百分率；且捕捉百分率、射精百分率高于空白对照组。
[0117] 与对比样品相对，采用本专利制备的牡颇肤样品（牡颇肤样品1、2、3)在捕捉次 数、射精次数与对照样品（对比样品1和对比样品2)相比有显著性的提升（P<0. 01)。并显 著（P<0. 01)提高扑捉百分率和射精百分率；且捕捉百分率、射精百分率高于对照样品组。
[0118] 依照本实施例的方法，将牡颇肤样品4-8检测，各牡颇肤样品检测结果与上述 对比样品W及空白对照组相比，均在捕捉次数、射精次数上有明显提升（P<〇. 01)，并显著 (P<0. 01)提高扑捉百分率和射精百分率，在捕捉潜伏期、射精潜伏期时间的间隔上也均具 有显著性差异（P<〇. 01)。
[0119] 目前，虽然还未见文献直接证明抗氧化与提升性功能具有直接关系，但本发明从 抗氧化及提升性功能的两个角度对牡颇肤活性进行研究，发现二者有一定的相关性，即依 本专利方法制备的牡颇肤样品既具有良好的体外抗氧化功效，同时对小鼠的性功能有良好 的改善作用。
[0120] W上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可W做出若干改进和润饰，运些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种具有提升性功能的牡蛎肽的制备方法，其特征在于，包括： 步骤1、将牡蛎肉、钙盐和水研磨得到牡蛎肉浆液； 步骤2、牡蛎肉浆液酶解，酶解后离心取上清，获得牡蛎酶解粗液； 步骤3、将牡蛎酶解粗液脱色除杂，获得牡蛎肽精制液； 步骤4、牡蛎肽精制液浓缩、喷雾干燥获得所述牡蛎肽。2. 根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述钙盐为食品级氯化钙、乳酸钙、碳 酸钙、磷酸氢钙或柠檬酸钙。3. 根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤1所述钙盐为牡蛎肉质量的 0. 1-0. 3%的钙盐。4. 根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤2为： 将牡蛎肉浆液先用中性蛋白酶或碱性蛋白酶酶解，然后再用风味蛋白酶酶解，酶解后 灭酶、离心，上清液即牡蛎酶解粗液。5. 根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，步骤2为： 将牡蛎肉浆液至于35~45°C下保温搅拌1-2小时，然后加入中性蛋白酶或碱性蛋白 酶，调节pH升温至50~60°C继续水解5-8小时后，调节pH至5. 0-5. 5,加入风味蛋白酶在 50~60°C下继续酶解，2-3小时后灭酶，离心，上清液即牡蛎酶解粗液。6. 根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述中性蛋白酶为木瓜蛋白酶、菠萝蛋 白酶、动物蛋白水解酶、复合蛋白酶Protamex中的一种或多种；碱性蛋白酶为Alcalase碱 性蛋白酶、FoodProAlkalineProtease碱性蛋白酶、胰蛋白酶中的一种或多种。7. 根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述中性蛋白酶或碱性蛋白酶的加入 量为牡蛎肉浆液质量的〇. 3~0. 8%。。8. 根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述风味蛋白酶的加入量为牡蛎肉浆 液质量的0.5~1.0%。。9. 权利要求1-8任意一项所述制备方法制备的牡蛎肽。10. 权利要求9所述牡蛎肽在制备提高性功能和/或抗氧化保健品、食品以及药品中的 应用。
【专利摘要】本发明涉及生物技术领域，公开了一种具有提升性功能的牡蛎肽及其制备方法和应用。该方法将牡蛎肉、钙盐和水研磨得到牡蛎肉浆液；牡蛎肉浆液酶解，酶解后离心取上清，获得牡蛎酶解粗液；将牡蛎酶解粗液脱色除杂，获得牡蛎肽精制液；牡蛎肽精制液浓缩、喷雾干燥获得所述牡蛎肽。本发明在对牡蛎肉进行酶解前先用钙盐进行预处理，用以激活释放牡蛎内源性酶，减少后续酶解消耗的酶制剂，同时协同牡蛎内源性酶，采用特定的酶制剂组合分两步进行酶解，制备出具有较强的抗氧化活性、可显著提高性功能的牡蛎肽。
【IPC分类】C12P21/06
【公开号】CN105219826
【申请号】CN201510750039
【发明人】肖小春, 翟旭峰, 郭晓蕾, 娄勇军, 马忠华
【申请人】无限极（中国）有限公司
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年11月5日