使用甲烷硅基化的季铵化合物(siqac)提取dna/rna的方法
【技术领域】 阳OOU本申请设及用于DM和/或RNA提取的方法和组合物。
【背景技术】
[0002] DNA提取方法为本领域所熟知，且在诊断、药学和研究中具有若干应用。例如，所述 方法用于动植物基因工程中，W诊断多种疾病状况，生产数种药物，并用于基因指纹和罪案 调查。从细胞或衣壳中提取遗传材料的现有技术已知方法包含数个步骤。首先，需要裂解 细胞或衣壳，然后，在后续处理步骤中标注或捕获DNA和/或RNA，根据需要进行纯化，然后 释放到溶液中进行检测。
[0003] 现有技术方法包含的第一步骤是破坏细胞或衣壳壁。该步骤成为裂解，设及破坏 细胞或衣壳的壁或膜，并将其内容物释放到环境介质中，得到裂解物。本领域已知数种细胞 裂解方法，包括物理破坏法，例如机械破碎、液体均化、超声处理、加热、冷冻/解冻循环和 手动研磨。但是，所述方法具有数种缺陷，包括成本、再现性和样品局部加热。替代性方法 包括基于清洁剂的细胞裂解，使用酶（例如溶菌酶和纤维素酶）来分解细胞壁，W及渗透压 冲击。虽然优选地可在溫和化学条件下执行裂解，许多生物细胞较难于破坏，所述方法也不 够有效。
[0004] 除DNA和RNA外，通过破坏膜或壁得到的细胞或衣壳裂解物还含有许多可溶（例 如蛋白）和不可溶（例如细胞碎片，如细胞壁）材料。在大多数现有技术方法中，从细胞裂 解物的其他成分中分离得到基因材料并宜为进行纯化。分离和纯化的常见技术为本领域技 术人员所知，并包括苯酪-氯仿提取和随后的酒精沉淀和娃±纯化。可W离屯、去除固体材 料。可能需要重复洗涂和沉淀步骤来得到足够纯化的样品，W用于后续应用中。提取过程 结束后，DNA或RNA通常悬浮在水性溶剂中。 阳0化]在许多应用中，分离纯化的DNA或RNA用于PCR(聚合酶链式反应）方法中。PCR方法为本领域技术人员所熟知。在许多RCR技术中，必须使用具有高纯度的样品才能得到 可靠的结果。
[0006] 现有的DNA和/或RNA提取方法的问题包括多步骤方法的复杂性，完成方法所需 的时间量，所需试剂和仪器的成本，W及由于纯化步骤中的材料损失可能带来的低DNA或 RNA产出。
【发明内容】
阳007] 本发明的目标之一，在于提供一种从细胞或衣壳中DNA和/或RNA的方法，该方法 能够克服现有技术中的至少一种缺陷。
[0008] 本发明的第一方面中，提供从细胞或衣壳中提取DNA和/或RNA的方法，所述方法 包括令所述细胞或衣壳与包含具有含娃官能团的季锭化合物的组合物相接触。
[0009] 本发明的方法可W设及DNA提取，也可W设及RNA提取，还可W设及DNA和RNA的 提取。可W从任何合适的细胞或衣壳提取DM和/或RNA。衣壳是包裹遗传材料的病毒外 壳。病毒可W是任何合适的病毒。
[0010] 所述细胞可W选自原核细胞、真核细胞或古细菌细胞。所述细胞可W来自革兰氏 阳性细菌或革兰氏阴性细菌、分支杆菌、支原体、真菌或寄生生物；或来自动物或植物。所 述细胞可W是动物细胞，例如源于人类、哺乳类或其他动物的细胞。所述细胞可W是植物细 胞。所述细胞可W是人类或动物组织细胞。所述细胞可W选自结缔组织细胞、神经组织细 胞或上皮组织细胞。所述细胞可W来自人或动物的体液，例如血液、粘液、疲液、尿液、呕吐 物或其他分泌物。 W11] 革兰氏阴性细菌的例子包括但不限于，来自W下属的细菌：拟杆菌属 度acteroides)，己尔通体属度artonella)，包特菌属度ordetella)，包柔氏螺旋 体属度orrelia)，布鲁氏菌属度rucella)，弯曲菌属（Camp}dobacte;r)，衣原体属 (化lamydia)，埃希氏菌属巧scherichia)，弗朗西斯氏菌属（化ancisella)，嗜血杆菌 属化aemo地ilus)，螺杆菌属化elicobacter)，克雷白氏杆菌属化lebsiella)，军团 菌属（Legionella)，钩端螺旋体属（Xeptospira)，莫拉氏菌属（Moraxella)，奈瑟氏 菌属（Neisseria),己氏杆菌属（Pasteurella)，变形杆菌属（Proteus),假单胞菌属 (Pseudomonas),沙口 氏菌属（Salmonella),志贺氏菌属（化igella)，螺菌属（Spirillum)， 链杆菌属（Streptobacillus)，密螺旋体属（Treponema)，弧菌属（Vibro)，和耶尔森 氏菌属（Yersinia)。革兰氏阳性细菌的例子包括但不限于，来自W下属的细菌：放线 菌属（Actinomyces),芽抱杆菌属（Bacillus),梭状芽抱杆菌属（Clostridium)，棒状 杆菌属（Corynebacterium)，利斯特氏菌属（Xisteria)，诺卡氏菌属（Nocardia)，消 化链球菌属（P巧tostreptococcus)，丙酸杆菌属（Propionibacterium)，葡萄球菌属 (Staphylococ州S)，链球菌属（Str巧tococ州S)，和链霉菌属（Str巧tomyces)。
[0012] 真菌细胞的示例包括曲霉属真菌的任意种类。酵母菌细胞的示例包括但不限于， 毕赤酵母属（Pichia)、酵母属（Saccharomyces)、裂殖酵母属（Schizosaccharomyces)或许 旺酵母属（Schwanniomyces)的任意种类。
[0013]寄生细胞包括但不限于，属于W下属的寄生细胞：棘阿米己属（Acanthamoeba)， 钩口 线虫属（Anc}dostoma)，Ascaradia属，己贝虫属度油esia)，Balamuthia属， 肠袋虫属度alantidium)，布鲁格氏丝虫属度rugia)，支睾吸虫属（Clonorchis)， 隐抱子虫属（Cryptosporidium)，双腔吸虫属（Dicrocoelium)，Dic}ftocaulus属， 双核阿米己属值ientamoeba)，Diphylobot虹ium属，恶丝虫属值irofilaria)，棘 球缘虫属巧chinococcus)，棘口吸虫属巧chinostoma)，晓虫属巧nterobius)，片 吸虫属（Fasciola)，拟片吸虫属（Fascioloides)，贾第虫属（Giardia)，膜壳缘虫 属化ymenolepsis)，等抱球虫属（Isospora)，利什曼原虫属（Leishmania)，中殖孔 属（Mesocestoides)，莫尼茨缘虫属（Moniezia)，板口钩虫属（Necator)，耐格里 属Ofeegleria)，盘尾属（Onchocerca)，后睾吸虫属（Opisthorchis)，并殖吸虫属 (Paragonimus)，追原虫属（Plasmodium),杆线虫（化油ditida)，血吸虫属（Schistosoma), 旋尾目（Spirurida)，类圆线虫属（Strongyloides)，带缘虫属（Taenia)，滴虫属 (Trichomonas),鞭虫属（Trichuris)，弓咖虫属（Toxocara)，锥虫属（Trypanosoma),钩虫 属OJncinaria)和吴策线虫属（Wuchereria)所述细胞可W是结缔组织细胞。结缔组织细 胞包括存储细胞（例如褐色或白色脂肪细胞和肝脂肪细胞），细胞外基质巧CM)分泌型细胞 (如成纤维细胞，软骨细胞，和成骨细胞），W及血液/免疫系统细胞（如淋己细胞（T淋己细 胞，B淋己细胞，或浆细胞），粒细胞（诸如嗜碱性粒细胞，嗜酸性粒细胞和嗜中性粒），和单 核细胞）。所述细胞可W是上皮细胞。上皮细胞类型的细胞专口用于分泌的腺细胞（诸如 外分泌和内分泌腺上皮细胞），和表面上皮细胞（如角化和非角化表面上皮细胞）。所述细 胞可^是神经组织细胞。神经组织细胞包括胶质细胞和中枢或外周神经系统神经元。所述 细胞可^是肌细胞。肌肉组织的细胞包括骨骼肌、屯、肌和平滑肌细胞。许多这些类型的细胞 可^进一步细分。所述细胞可^是内胚层、中胚层或外胚层来源的细胞。所述细胞可^是 干细胞或成熟分化的细胞。示例性干细胞包括造血干细胞，神经干细胞，间充质干细胞。示 例性成熟分化的细胞类型包括脂肪细胞（如白脂肪细胞或褐色脂肪细胞），屯、肌细胞，软骨 细胞，内皮细胞，外分泌腺细胞，成纤维细胞，肝细胞，角质形成细胞，巨瞻细胞，单核细胞， 黑素细胞，神经细胞，中性粒细胞，成骨细胞，破骨细胞，膜岛细胞如β细胞，骨骼肌细胞， 平滑肌细胞，Β细胞，浆细胞，Τ淋己细胞诸如调节性、细胞毒性、和辅助Τ细胞，^及树突状 细胞。
[0014] 所述病毒可?是DNA病毒或RNA病毒。病毒包括但不限于^下病毒科：腺病毒 科（Adenoviridae)，沙粒病毒科（Arenaviradae)，动脉炎病毒科（Arteriviridae)，囊泡病 毒科（Ascoviridae)，非洲猪磕病毒科（Asfarviridae)，星状病毒科（Astroviridae)，杆 状病毒科化aculoviridae)，杆菌状核糖核酸病毒科化arnaviridae)，双核糖核酸病毒科 (Birnaviridae)，玻那病毒科化ornaviridae)，雀麦花叶病毒科化romoviridae)，布尼亚 病毒科化unyaviridae)，杯状病毒科（Caliciviridae)，花挪莱病毒科（Caulimoviridae)， 强思镶嵌病毒科（Comoviridae)，冠状病毒科（Coronaviridae)，金色病毒科 (Qiiysoviridae)，环状病毒科（Circoviridae)，长线形病毒科（Closteroviridae)， 囊病毒科（Cystoviridae)，二顺反子病毒科Oicistrovi