一种克罗烷型二萜化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体设及从苦石莲的干燥成熟种子中分离得到的一种 具有治疗人神经胶质瘤作用的克罗烧型二祗类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 苦石莲（Hance)系豆科植物南蛇巧的种子，又名瞭芙云实，老鸦枕头。其性苦寒， 归屯、、脾、肾经，是一种药食同源植物，主要分布于广东、广西、四川、云南等地。有清热化湿， 散疲止痛等功效，常用于风热感冒，频疾淋浊，吵逆，痴肿，疮癖，跌打损伤等症。
[0003] 苦石莲主要含二祗类、黄酬类、不饱和脂肪酸等多种化学成分。苦石莲化学成分研 究中对二祗类的研究最为活跃，研究发现了新的、大量的二祗类化合物多数具有较强的药 理活性。
[0004] 苦石莲作为一种药用资源在民间用于治疗流感、乙肝、皮肤病等一直有着广泛的 用药基础，其具有抗炎、镇痛、抗病毒、抗肿瘤、抗肝损伤、降血脂、抗动脉粥样硬化等药理作 用。王寒等研究发现苦石莲不同提取组分能够有效抑制THP-I细胞中白介素-6,白介素-8 的分泌，从而发挥抗炎、镇痛作用。吴兆华等从苦石莲中分离纯化的苦石莲蛋白质具有抑 制小鼠黑色素瘤细胞增殖的活性及抑菌活性；从其种子中分离得到的瞭芙云实星（minaxin A)经研究发现其对人肝癌化pG2细胞的生长有抑制作用。刘明等用苦石莲乙醇提取物预防 性给药，用四氯化碳所致肝损伤模型为研究对象，研究结果显示：苦石莲乙醇提取物能抑制 小鼠急性肝损伤血清AST和ALT水平，对小鼠急性肝损伤具有保护作用。苦石莲中含有的 亚油酸、油酸、等不饱和脂肪酸具有降低血脂和胆固醇、减少动脉粥样硬化、抑制癌细胞生 长和促进大脑发育等作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从苦石莲的干燥成熟种子中分离得到的一种具有治疗 人神经胶质瘤作用的克罗烧型二祗类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物（I)，
[0008]
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：(a)苦石莲的干燥成熟种子 粉碎，用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋 和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化）步 骤（a)中乙酸乙醋萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇 洗脱12个柱体积，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱物浸膏；（C)步骤化）中 70%乙醇洗脱物浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、50:1、30:1、10:1和1:1的二 氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次 用体积比为15:1、10:1和5:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中 组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗 脱，收集8~10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。
[0010] 进一步地，步骤（a)中，用75%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] 一种药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物（I) 和药学上可接受的载体。
[0013] 所述的化合物（I)在制备治疗人神经胶质瘤的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备治疗人神经胶质瘤的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可W直接使用，或者W药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 W及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物W单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[001引图1为化合物（I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021] 实施例1:化合物（I)分离制备及结构确证
[0022] 试剂来源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲烧为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[002引制备方法：（a)将苦石莲的干燥成熟种子（8kg)粉碎，用75%乙醇热回流提取 (2化X3次），合并提取液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋0LX3 次）和水饱和的正下醇（3LX3次）萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（347g) 和正下醇萃取物；(b)步骤（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用15%乙醇 洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗脱12个柱体积，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩得70% 乙醇洗脱物浸膏（129g) ; (C)步骤化）中70%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积 比为80:1 (8个柱体积）、50:1 (8个柱体积）、30:U6个柱体积）、10:1 (8个柱体积）和1:1 (5 个柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（C)中组分4 (31g)用正相 硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1 (8个柱体积）、10:1 (10个柱体积）和5:U6个柱体 积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (Hg)用十八烷基娃 烧键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体 积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)(48mg)。
[0024] 结构确证：HR-ESIMS显示[M+Na]+为m/z395. 1102,结合核磁特征可得分子式为 〔2〇&。〇7,不饱和度为11。核磁共振氨谱数据5h(卵m，DMS0-de，500MHz) :H-2(5. 86,山J= 10. 0)，H-3 (5. 47,dd，J= 10. 0, 2.W，H-4 (2. 66,d，J= 2.W，H-6 (I. 69,dd，J= 14. 5， 4. 0)，H-6 (I. 27,dddd，J= 14. 5,14. 5,4. 0, 2. 0)，H-7 (I. 76,ddd，J= 17. 5,6. 5,4. 0)， H-7(2. 39,m)，35,m)，55,dd，J=14. 0,3. 5)，H-12巧.72,dd，J=12. 5， 3.W，H-14 化.39,dd，J= 2. 0,1. 0)，H-15 (7. 30,t，J= 2. 0)，H-16 (7. 36,t，J=I. 0)， H-19(4.19,d，J= 9. 0)，H-19(4.08,dd，J= 9. 0, 2. 0)，H-20(I.01，s);核磁共振碳谱数据 5C(卵m，DMSO-de，125MHz) :200.8(C，1-C)，134.5(CH，2-C)，118.2(CH，3-C)，51.I(CH，4-C)， 41.0 (C，5-C)，31.6(邸2,6-C)，25.9(邸2, 7-C)，74.3 (C，8-C)，39.2 (C，9-C)，43.0(CH，10-C)， 34. 8(細2, 11-C)，71. 3(CH，12-C)，124. 7(C，13-C)，107. 8(CH，14-C)，142.I(CH，15-C)， 138.4(CH，16-C)，171.5 (C，17-C)，174.I(C，18-C)，69.5(邸2,19-C)，17.I(邸3, 20-C);碳原 子标记参见图1。IR光谱表明该化合物含有径基（3472cmI)，内醋（1762和1734cmI)和巧 喃环（879cm1)基团。"CNMR谱显示有20个信号，含有一个甲基，四个亚甲基（包含一个 含氧亚甲基），八个次甲基（包含五个締控碳和一个含氧碳）和八个季碳（包含=个幾基 碳，一个締控碳和一个含氧季碳）。根据电和"CNMR谱数据分析可知该化合物含有一个 12，17-5-内醋（5册.72,5(：71.3，邸-12;5(：171.5，(：-17)和18，19-丫-内醋（5(：174.1，C-18 ; 5H4. 19,4. 08，5C69. 5,邸2-19)。此外，季碳处于低场的化学位移（5C74. 3)，表明 C-8位存在一个径基。根据HMBC谱中H-12 (S册.72,dd，J= 12. 5, 3. 5)与C-13 (SC124. 7)， C-14( 5C107. 8)和C-16(SC138. 4)的相关性，可推断巧喃环位于C-12(SC71. 3)位上。 HMBC谱中&-6, &-7,H-10, &-11和&-20与C-8的相关性验证了上述推论，且为a构型。 综合氨谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，W及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合 物如图1所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致（图2)。
[00幼实施例2:化合物（I)药理作用试验
[0026] 一、材料和仪器
[0027] 人神经胶质瘤细胞株U251购自于上海麦莎生物科技有限公司。实验动物裸鼠，购 自南方医科大学实验动物中屯、，为4~6周龄的雄性BALB/c，nu/nu小鼠，体质量12~15邑。 化合物（I)自制（含量98%W上）。5-氣尿喀晚购于南通制药厂，膜蛋白酶购于美国 Amresco公司，不完全DMEM培养基购于GibeoB化公司，胎牛血清购于杭州四季青公司，十二 烷基硫酸钢、乙二胺四乙酸、过硫酸胺、甘油、二甲基亚抓购于Sigma公司，蛋白酶K(Merka 公司），P-琉基乙醇（广州威佳公司），苯甲基横献氣（广州威佳公司），亮抑酶肤（广州威 佳公司），抑蛋白酶肤（广州威佳公司），丙締献胺（上海生工生物工程公司），双丙締献胺 (上海生工生物工程公司）。
[002引光学显微镜（OLYMPUSBxsl，日本），Olympus数码相机（OlympusD70,日本），显微 摄影系统（CoolSNAP-