一种新的克罗烷型二萜化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体设及从构树的干燥根中分离得到的一种具有治疗 神经胶质瘤作用的二祗类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 构树jOa/w'i/era化.）Vent.为桑科构树属植物，分布于中国黄 河、长江和珠江流域，日本、越南、印度等国亦有分布，资源十分丰富。构树的根、叶、果实和 树皮在中医里皆有使用。构树皮能利尿消肿，桂风湿，还可W用于治疗神经性皮炎及癖症； 树液可W利水解毒，治水肿癖疾和蛇、虫、蜂、蜗、狗咬；构树叶具有清热凉血、利湿和杀虫作 用，可用于鼻赃，肠炎，频疾。构树果实也是中东地区重要的民间药材。
[0003] 构树在我国分布广泛，是一种药用价值很高的植物，其叶、树皮、根皮和果实在临 床均有实际应用价值。构树的化学成分复杂，国内外研究者主要关注的化学成分包括黄酬 类、木脂素类和祗类。其中祗类又W二祗研究较多。二祗广泛分布于植物界，植物分泌的乳 汁、树脂等均W二祗类衍生物为主，尤W松柏科植物最为普遍，是一类由4个异戊二締单位 构成、含20个碳原子的化合物类群。结构显示多样性，主要类型有贝壳杉烧、克罗烧、松 香烧、乌头烧等。许多二祗的含氧衍生物具有多方面的生物活性，如紫杉醇、穿屯、莲内醋、关 附甲素、雷公藤内醋、甜菊巧等都具有较强的生物活性。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种从构树的干燥根中分离得到的一种具有治疗神经胶质 瘤作用的二祗类化合物及其制备方法。 阳〇化]本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的： 具有下述结构式的化合物（I)，
[0006] 所述的化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：（a)将构树的干燥根粉碎，用 75~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和的 正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步骤（a)中乙 酸乙醋萃取物用大孔树脂除杂，先用5%乙醇洗脱10个柱体积，再用75%乙醇洗脱8个柱体 积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（C)步骤（b)中75%乙醇洗脱物 浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为90:1、55:1、25:1、8:1和2:1的二氯甲烧-甲醇梯度 洗脱得到5个组分；（d)步骤（C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1、 8:1和4:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2用十八烷基娃 烧键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为65%的甲醇水溶液等度洗脱，收集9~10个柱体 积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。
[0007] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0008] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为80%。
[0009] 一种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载 体。
[0010] 所述的化合物（I)在制备治疗神经胶质瘤的药物中的应用。
[0011] 所述的药物组合物在制备治疗神经胶质瘤的药物中的应用。
[0012] 本发明化合物用作药物时，可W直接使用，或者W药物组合物的形式使用。
[0013] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0014] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 W及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物W单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。 阳〇1引说明书附图 图1为化合物（I)结构式； 图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0017] 实施例1 :化合物（I)分离制备及结构确证 试剂来源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲烧为分析纯，购自上海凌峰化学试 剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。 阳01引制备方法：（a)将构树的干燥根（IOkg)粉碎，用80%乙醇热回流提取（2化X3次)， 合并提取液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油酸（3LX3次)、乙酸乙醋（3LX3次）和水饱和 的正下醇（3LX3次）萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（386g)和正下醇萃取 物；（b)步骤（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用5%乙醇洗脱10个柱体 积，再用75%乙醇洗脱8个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏 (155g); (C)步骤（b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为90:1 (8个柱 体积)、55:1 (8个柱体积)、25:1 (8个柱体积)、8:1 (10个柱体积）和2:1 (5个柱体积）的 二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（C)中组分4 (41g)用正相硅胶进一步 分离，依次用体积比为12:1 (8个柱体积)、8:1 (10个柱体积)和4:1 (6个柱体积）的二氯 甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (17g)用十八烷基硅烷键合的 反相硅胶分离，用体积百分浓度为65%的甲醇水溶液等度洗脱，收集9-10个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I) (39mg)。
[0019] 结构确证：HR-ESIMS显示[M+Na]+为m/z397. 1308,结合核磁特征可得分子式 为Cz化2〇7,不饱和度为10。核磁共振氨谱数据Sh(卵m，DMSO-成，500MHz) :H-1 (3. 27,山 方3. 5)，H-2 (3. 51，m)，H-3 (2. 33，ddd，方 15. 0,5. 0，1.5)，H-3 (1.81，ddd，^15.5，12.5， 2.5)，H-4(2.59，dd，^12.5,5.0)，H-6(1.27，ddd，^11.0,3.0，1.0)，H-6(1.59，m)，H-7 (2. 06，m)，H-7 (1.60，m)，H-8 (2. 57，m)，H-ll(2. 88，dd，方 16. 0,7. 5)，H-11 (2. 04，m)， H-12 (5. 61，dd，方8. 5,1. 5)，H-14 (6. 30,m)，H-15 (7. 37,t，方I. 5)，H-16 (7. 29,m)， H-19 (4. 10,d，方8. 5)，H-19 (4. 16,dd，方8. 5,2. 0)，H-20 (I. 19,s)，2-0H(5. 40,s);核 磁共振碳谱数据Sc(卵m，DMS〇-成，12甜z):56. 0 (CH，1-C)，58. 7 (CH，2-C)，19. 6 (邸2， 3-C)，35. 8 (CH，4-C)，47.I(C，5-C)，21.I(邸2,6-〇，16. 3 (邸2,7-〇,43. 3 (CH，8-C)，41.6 (C，9-C)，73. 3 (C，10-C)，：M. 9 (邸2，11-〇,71.7 (CH，12-C)，126. 2 (C，13-C)，108. 5 (CH， 14-C)，144. 4 (CH，15-C)，138. 6 (CH，16-C)，173. 0 (C，17-C)，175. 4 (C，18-C)，70. 3 (邸2， 19-C)，26. 6 (邸3,20-〇;碳原子标记参见图1。IR光谱表明该化合物含有径基（3470cmi)， 丫-和5-内醋（1761和1735cm1)和巧喃环（877cm1)基团。"CNMR谱显示有20个信号， 含有一个甲基，五个亚甲基，八个次甲基和六个季碳。一维和二维核磁共振数据表明该化合 物含有环氧基（5 册.27，5C56. 0，CH-1 和 5C73. 3，C-10)，叔甲基（5m. 19，s，5C26.6 CH3-2O)和巧喃环（5 册.30,H-14 ;SH7. 37,H-15, 5H7. 29,H-16)。此外，还可得知该化合 物含有一个12，17-5内醋（5册.61，5(：71.7，邸-12;5(：173.0，（：-17)和一个18，19-丫 内醋（5C175. 4，C-18;5H4. 16,4. 10，5C70. 3，邸2-19)。COSY谱中H-3[ (5 肥.33，ddd， 方 15. 0,5. 0,1. 5)，（ 5m. 81，ddd，方 15. 5,12. 5,2. 5)]与H-2 ( 5 册.51，m)的相关性表明 C-2 ( 5C58. 7)位上连有一个径基。另外，H-2与H-I( 5册.27,d，方3. 5)的相关性表明 该化合物存在1，10-环氧基团。HMBC谱中，H-2与C-IO( 5C73. 3)，W及H-I与C-2和C-3 (5C19. 6)的相关性验证了上述径基和环氧基团的位置。综合氨谱、碳谱、HMBC谱和N犯SY 谱，W及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立体构型进一步通 过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致（图2)。 W20] 实施例2 :化合物（I)药理作用试验 一、材料和仪器 人神经胶质瘤细胞株U251购自于上海麦莎生物科技有限公司。实验动物裸鼠，购自南 方医科大学实验动物中屯、，为4~6周龄的雄性BALB/c，nu/nu小鼠，体质量12~15g。化合物 (I)自制(含量98%W上)。5-氣尿喀晚购于南通制药厂，膜蛋白酶购于美国Amresco公司， 不完全DMEM培养基购于GibeoB化公司，胎牛血清购于杭州四季青公司，十二烷基硫酸钢、 乙二胺四乙酸、过硫酸胺、甘油、二甲基亚抓购于Sigma公司，蛋白酶K(Merka公司），P-琉 基乙醇(广州威佳公司），苯甲基横献氣(广州威佳公司），亮抑酶肤(广州威佳公司），抑蛋白 酶肤(广州威佳公司），丙締献胺(上海生工生物工程公司），双丙締献胺(上海生工生物工程 公司）。
[0021] 光学显微镜（OLYMP