一种对映-贝壳杉烷型二萜化合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种对映-贝壳杉烷型二萜化合物及其制备方法和应用，属于药物化 学的技术领域。
【背景技术】
[0002] 狭叶凤尾蕨Pteris henryi Chirst系凤尾蕨科凤尾蕨属。植物为多年生草本，植 株高25-40cm。凤尾蕨属植物包括300种以上的植物，其中有超过66种分布在中国。但是 该属植物只有很少的植物化学研究的相关报道。我们目前对于狭叶凤尾蕨的研究表明，狭 叶凤尾蕨是一种多年生草本，分布于云南、四川、贵州海拔2000m以下的石灰岩地区。全草 入药。味苦、涩，性凉。归肝、膀胱经。清热解毒，敛疮止血，利湿。主治烧烫伤，狂犬咬伤， 外伤出血，带下量多，小便涩痛[潘炉台，赵俊华，孙庆文.贵州药用蕨类植物植物[M].贵 州贵阳：贵州科技出版社，2012, 07:113.]。
[0003] 凤尾蕨属植物中含有多种二萜类化合物，其中以对映-贝壳杉烷、对映-贝壳杉 烯为基本骨架，羟基取代一般在2,6, 7,9, 1 1，15等位，少部分在16, 17位，15位羟基氧化 生成15-氧-对映贝壳杉烷或15-氧-对映-贝壳杉烯，部分化合物的19位与6位结合 成对映贝壳杉烧内酯或对映贝壳杉稀内酯。在这些二砲化合物中，7 a，9-dihydroxy-15_o x〇-ent-kaur-16-en_19, 6 β -olide (6F)，是一个典型的对映-贝壳杉烧结构，这个化合物 被报道有显著的抗肿瘤活性[邓亦峰，梁念慈.半边旗二萜类化合物的液-质联用图谱鉴 定[J]· 2005,28(4):278-280 ;X Zhang, J H Li, C W He, et al. Study on the diterpenoid constituents and anticancer action of Pteris semipinnata[J]. Chin Pharm J, 1999, 34(8):512-514 ；C ff He, N C Liang1L E Mo. Inhibitory effect of compound 6F isolated from Pteris semipinnata L.on biosynthesis of DNA, RNA and protein in HL-60cells[J]. Journal of Guangdong Medical College, 2002, 20(4) :247-250.]
[0004] 本发明所述的对映-贝壳杉烷型二萜化合物为首次从狭叶凤尾蕨中分离提取得 到，在现有技术中未有报道，而实验证明这个化合物具有明显的抗病毒、抑制HIV病毒的活 性。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种对映-贝壳杉烷型二萜化合物（狭叶凤尾蕨甲素）及 其制备方法和应用，所述化合物具有明显的抗病毒、抑制HIV病毒的活性。
[0006] 本发明的技术方案：
[0007] -种对映-贝壳杉烷型二萜化合物，所述化合物化学名为对 映-2 β，13 α，16 α -三羟基-贝壳杉烧，分子式为C2()H3(j03，化学结构式如下：
[0008]
[0009] 前述的对映-贝壳杉烷型二萜化合物的制备方法为：
[0010] (1)甲醇冷浸提取：取阴干的狭叶凤尾蕨叶，经粉碎后用甲醇冷浸提取，减压浓 缩，得稀甲醇提取液；
[0011] (2)浓缩稀甲醇提取液：将稀甲醇提取液减压浓缩得甲醇浸膏；
[0012] (3)萃取：甲醇浸膏用蒸馏水溶解，再用乙酸乙酯萃取，保留乙酸乙酯萃取相，得 稀乙酸乙酯萃取液；
[0013] (4)浓缩稀乙酸乙酯萃取液：将稀乙酸乙酯萃取液减压浓缩，得乙酸乙酯浸膏；
[0014] (5)柱层析分离：将乙酸乙酯浸膏与硅胶拌样，转入层析柱，硅胶粒度200~300 目，用石油醚-乙酸乙酯洗脱液洗脱，将洗脱液进行薄层检测，浓缩合并类似洗脱流分，静 置，过滤，得粗品。
[0015] (6)单体化合物的纯化：粗品用甲醇反复重结晶，即得。
[0016] 上述对映-贝壳杉烷型二萜化合物的制备方法中，所述步骤（1)中，甲醇浓度为 85 %~95 %，提取次数为2-4次，每次2-4日。
[0017] 具体地说，所述步骤（1)中，甲醇浓度为95%，提取次数为3次，每次3日。
[0018] 上述对映-贝壳杉烷型二萜化合物的制备方法中，所述步骤（3)中，乙酸乙酯萃取 3~4次。
[0019] 所述步骤（5)中洗脱剂石油醚-乙酸乙酯的体积比为1 :0、9 :1、7 :1或5 :1。
[0020] 具体地说，所述步骤（5)中洗脱剂石油醚-乙酸乙酯的体积比为9 :1。
[0021] 所述对映-贝壳杉烷型二萜化合物在制备抗病毒药物中的应用。
[0022] 所述对映-贝壳杉烷型二萜化合物在制备抗HIV药物中的应用。
[0023] 本发明从贵州省安顺市产的狭叶凤尾蕨（Pteris henryi Chirst)中首次提取分 离得到一种对映-贝壳杉烷型二萜化合物，名称为狭叶凤尾蕨甲素，化学名为对映-2 β， 13 α，16 α -三羟基-贝壳杉烷。本发明产品经超导核磁共振波谱、高分辨质谱、傅立叶变换 红外光谱等多种手段检测，确定了狭叶凤尾蕨甲素的分子式为C mH34O3，化学结构式：
[0025] 产品狭叶凤尾蕨甲素为白色片状晶体，易溶于乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇等有机 试剂，熔点为 246 ~248°C;光学活性，[a ]nD-5. 66° (c 2. 12，MeOH) ;UV(CH30H) λ_204ηπι; IR(KBr) v nax3386cm 1Hffl) 〇
[0026] 我们对这个化合物测试了一系列的生物活性，包括对抗癌、抗真菌和抗HIV。实验 证明狭叶凤尾蕨甲素在制备HIV药物中的应用，在IC 5。值为9. 1 μ M时对HIV病毒的选择系 数（SI)为 12. 2。
【附图说明】
[0027] 图1为紫外光谱图，说明了狭叶凤尾蕨甲素结构中羟基的存在；
[0028] 图2为红外光谱图，说明了狭叶凤尾蕨甲素结构中含氧官能团（-OH)，甲基的存 在；
[0029] 图3为高分辨质谱图，说明了狭叶凤尾蕨甲素的分子量；
[0030] 图4为核磁共振1H NMR谱图，说明了狭叶凤尾蕨甲素结构中氢（-CH-OH)的归属；
[0031] 图5为核磁共振13C NMR谱图，说明了狭叶凤尾蕨甲素结构中碳（-C-OH等）的归 属；
[0032] 图6为核磁共振DEPT谱图，说明了狭叶凤尾蕨甲素结构中甲基，亚甲基，次甲基， 季碳的个数；
[0033] 图7为本发明所述化合物的关键1H-1HCOSYai-Hh HMBC (丨丨〇(:)和 ROESY (ΗΠΗ)相关谱图.
[0034] 图8为本发明所述化合物的晶体结构.
[0035] 图9为本发明所述化合物对HIV/VSV-G的抑制作用.
【具体实施方式】
[0036] 下面结合实施例对本发明作进一步阐述。必须说明下述实施例是用于说明本发明 而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保 护的范围。
[0037] 实施例1 :
[0038] 旋光Rudolph-型旋光仪（美国鲁道夫公司）测定；核磁共振氢谱1HNMR,核磁共振 碳谱 13CNMR和2D NMR由JEOL 500MHZ超导核磁共振波谱仪测定（四甲基硅醚TMS为内标）； 高分辨质谱HR-S頂S由VG Autospec-3000质谱仪（在70eV)测定；紫外光谱UV由HP8453 紫外可见分光光度计（惠普公司）测定；红外光谱IR由VECT0R22型傅立叶变换红外光谱 仪（德国BRUKER仪器公司，KBr压片）测定；恪点由XT-4双目显微熔点测定仪（北京泰克 仪器有限公司）测定；柱层析硅胶（200-300目）及薄层层析硅胶均为青岛海洋化工产；其 它试剂均为分析纯。
[0039] -、狭叶凤尾蕨中对映-贝壳杉烷型二萜化合物狭叶凤尾蕨甲素的提取分离方 法：
[0040] 本发明实验药材于2010年9月采自贵州省安顺，由贵阳中医学院赵俊华教授鉴定 为狭叶凤尾蕨Pteris henryi Chirst，植物标本存放在贵阳中医学院中药研究所（标本凭 证：20101003)。
[0041] 狭叶凤尾蕨甲素的制备步骤依次如下：
[0042] (1)甲醇冷浸提取：狭叶凤尾蕨叶经自然风干后粉碎，取粉碎的狭叶凤尾蕨叶 5Kg，用95 %的甲醇冷浸提取3次，得稀甲醇提取液；
[0043]