一种用于治疗乳腺癌的二萜类化合物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体设及从黄琴的干燥根中分离得到的一种具有治疗 乳腺癌作用的二祗类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 黄琴又名元琴、枯琴，首载于《神农本草经》，为唇形科植物 Scutellari油aicalensisGeorgi的干燥根。黄琴味苦、性寒，有清热燥湿、泻火解毒、止血、 安胎等功效。主治溫热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、频疾、咳血、目赤、胎动 不安、高血压、痴肿巧疮等症。黄琴是我国中医临床常用中药品种之一，具有悠久的用药历 史，主产于河北、山西、内蒙古、迂宁等省区，俄罗斯东西伯利亚，蒙古，朝鲜，日本均有分布。
[0003] 黄琴主要含黄酬类化合物，目前从黄琴中分离的黄酬巧元及巧有40多种。此外黄 琴中还含有大量的二祗类化合物和丰富的微量元素（其中铁、铜、锋、儘的含量均很高）。
[0004] 现代药理研究表明黄琴具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤、抗过敏、清除自由基及 抗氧化作用等作用。黄琴的抗菌和抗病毒作用，与中医经验治疗"天行热疾"、"火咳肺瘦" 和"疗疮火瘍"相一致。黄琴抗菌范围较广，其中对金葡菌、绿脈杆菌的抑制作用最强，且 对钩端螺旋体也有一定的抑制作用。黄琴巧可显著抑制细胞内白=締B4、白=締C4的 生物合成，还可显著抑制人工=肤（fML巧激发的白细胞内Ca2+升高，并促进细胞内cAMP 水平提高，表明黄琴巧显著影响白细胞的多种功能并掲示了其抗炎作用机理。研究显示 5, 7, 2' -S径基黄酬和5, 7, 2'，3'-四径基黄酬能显著抑制小鼠皮肤肿瘤的发生。黄琴中 黄琴茎叶总黄酬及野黄琴巧对LA795细胞的抑制实验显示，它们在一定浓度下对LA795细 胞有抑制作用；同时，不同剂量的黄琴总黄酬皆可抑制移植肉瘤S180瘤株的体内增殖，且 呈量效关系，表现出高效低毒的抗肿瘤活性。黄琴的4种主要黄酬成分在机体的不同系统 中均具有消除自由基和抗氧化活性。黄琴素可预防诸如氨过氧化物酶、超氧化物阴离子等 氧自由基引起的成纤维细胞的损伤。在4种黄琴的黄酬类成分中，黄琴素是最有效的抗氧 化剂。在缺血再灌注模型中，黄琴素可使细胞避免致死量氧化剂的损伤。 阳0化]黄琴是一种较常用的中药，临床应用广泛，近年来对其抗氧化、抗肿瘤和抗HIV病 毒的研究日趋深入，开发黄琴及其活性成分作为降血压、治疗冠屯、病W及防治肿瘤和艾滋 病药物的前景十分广阔。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种从黄琴的干燥根中分离得到的一种具有治疗乳腺癌作 用的二祗类化合物及其制备方法。
[0007] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0008] 具有下述结构式的化合物（I)，
[0009]
[0010] 所述的化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：(a)将黄琴的干燥根粉碎， 用75~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱 和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化）步骤（a) 中乙酸乙醋萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个柱体积，再用75%乙醇洗脱10 个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物浸膏；（C)步骤化）中75% 乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1、45:1、20:1、10:1和1:1的二氯甲 烧-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（C)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体 积比为25:1、20:1和10:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分 2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱， 收集8~10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。
[0011] 进一步地，步骤（a)中，用80%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0012] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0013] 一种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的 载体。
[0014] 所述的化合物（I)在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。
[0015] 所述的药物组合物在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。
[0016] 本发明化合物用作药物时，可W直接使用，或者W药物组合物的形式使用。
[0017] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0018] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 W及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物W单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0019] 图I为化合物（I)结构式；
[0020] 图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较；
[0021] 图3为不同剂量化合物（I)对乳腺癌细胞增殖活力的影响；
[0022] 图4为不同剂量化合物（I)对乳腺癌细胞调亡的影响。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0024] 实施例1:化合物（I)分离制备及结构确证 阳0巧]试剂来源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲烧为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0026] 制备方法：（a)黄琴的干燥根（IOkg)粉碎，用80%乙醇热回流提取（2化X3次）， 合并提取液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和水饱 和的正下醇0LX3次）萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（398g)和正下醇 萃取物；化）步骤（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个 柱体积，再用75 %乙醇洗脱10个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱 物浸膏（163g) ; (C)步骤化）中75 %乙醇洗脱浸膏用200-300目正相硅胶分离，依次用体 积比为85:1 (10个柱体积）、45:U9个柱体积）、20:1(8个柱体积）、10:1(8个柱体积）和 1:1巧个柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到5个组分；(d)步骤（C)中组分3 (49g) 用200-300目正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1 (8个柱体积）、20:1 (10个柱体 积）和10:1巧个柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分 2 (31g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶0DS-C18分离，用体积百分浓度为75%的甲醇水溶 液等度洗脱，收集8~10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)(244mg)。
[0027] 结构确证：无色针晶（甲醇）；HR-ESIMS显示[M+Na]+为m/z471. 1606,结合核磁 特征可得分子式为C23H2诉9,不饱和度为10。核磁共振氨谱数据5H(ppm，DMS0-de，600MHz): H-l(9. 81，S)，H-3(2. 42,d，J= 11.8)，H-3(2. 17,d，J= 11.8)，H-6(4. 16,d，J= 7. 3)， H-7(5. 06,dd，J= 11.6,7. 3)，H-8(2. 48,m)，H-9(2. 57,m)，35,m)，14， dd，J= 16. 4, 5.6)，H-14 (3. 39,d，J=8. 0)，H-15 化.05,d，J=I. 7)，H-16 (7. 13,d，J= I. 7)，