H-18(1.21，s)，H-19〇). 93,s)，H-20 (1.28,s)，7-0Ac(2.03,s)，14-C00CH3 (3.71，s); 核磁共振碳谱数据 5c(卵m，DMSO-de，150MHz) :202. 9 (CH，1-0,170. 2 (C，2-0,51.7((?, 3-C)，41.8(C，4-C)，91. 4 (C，5-C)，77. 3 (CH，6-C)，79. 9 (CH，7-C)，36. 3 (CH，8-C)，35. 0 (CH， 9-C)，52.8(C，10-C)，21. 4(邸2,11-C)，148.6(C，12-C)，112. 3(C，13-C)，43. 7(CH，14-C)，108.I(CH，15-C)，141.6(CH，16-C)，173.8(C，17-C)，26.I(CH3, 18-C)，28. 7 (細3,19-C)， II.I(CH3, 20-C)，170. 4 (C，7-OAC)，21. 7 (CH3, 7-OAC)，52.I(CH3,14-COOCH3);碳原子标记参 见图1。红外光谱表明该化合物含有幾基（1742和2852cm1)，包括一个醒基。Ih-NMR谱 显示了S个甲基信号5册.93(s，&-19)，1.21(3, &-18)和1.28(s，&-20)，一个乙酷氧基 5 肥.〇3(3H，s)，一个甲氧基 5 册.71(3H，s，0CH3)，两个含氧次甲基 5H4. 16(d，J= 7. 3Hz， H-6)和 5. 06(dd，J= 11.6,7. 3Hz，H-7)，W及一个 1，2-双取代的巧喃环 5 册.〇5(d，J= I. 7Hz，H-15)和7. 13化J=I. 7Hz，H-16)。通过低场质子信号5H9. 81 (s，H-1)可确定醒 基的存在。此外，"CNMR谱显示出23个碳信号，包括乙酷幾基碳（5C170. 4)，甲氧幾基碳 (5C173.8)，醒基碳（5C202. 9)，两个含氧碳（5C77. 3 和 79. 9)，W及巧喃环（5C108. 1， 112.3，141.6，和148.6)。歷8(：谱中，护14(5册.39)与幾基碳（5(：173.8)，(：-7(5(：79.9) 和C-12(SC148.6)的远程相关性表明幾基位于在C-14位上。H-7(5册.06)与幾基碳 (5C170. 4)，C-6(SC77. 3)，C-14( 5C43. 7)和C-9( 5C35. 0)之间的相关性表明该乙酷氧 基与C-7 相连。此外，H-1(5H9. 81)与C-10(SC52. 8)，C-5(5C91.4)和C-20(SC11. 1) 的远程相关性表明醒基位于C-IO位上。HMBC谱中，含氧质子信号（5H4. 16,H-6)与幾基 碳（5C170. 2，C-2)的相关性表明该化合物含有一个内醋结构。N犯SY谱中，H-14与H-7和 H-9的交叉峰表明运些质子为a构型。此外，H-6与H-8,Me-20和Me-19的相关性表明它 们为0构型。综合氨谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，W及文献关于相关类型核磁数据，可基 本确定该化合物如图1所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致 (图2)。
[0028] 实施例2:化合物（I)药理作用试验
[0029] 一、材料和仪器
[0030] DMEM/F12高糖培养液购于北京Hyclone公司。改良型RPMI-1640培养基购于北 京Hyclone公司。标准胎牛血清购于天津T抓公司。CCK-8细胞活力检测试剂购于日本株 式会社同仁化学研究所。AnnexinV-門TC/PI调亡检测试剂盒购于上海炎彬化工科技有限 公司。JC-I线粒体膜电位探针购于江苏碧云天生物技术研究所。二甲基亚抓值MS0)和憐 酸盐缓冲溶液（PB巧购于Sigma公司产品。化合物（I)自制，制备方法见实施例LHPLC 归一化纯度大于98%。
[0031] -70°C低溫冰箱（FormaScientificInc.公司，美国），电子天平（岛津AEk200 型，日本），超净工作台（SW-CJ-IC型，苏州），恒溫振荡器灯监-C型），高压蒸汽消毒 锅（YX-400B型），C〇2细胞培养箱（F'ormaSeriesII，Hiermalelectronco巧.，美国）， 恒溫水浴锅度册2-1型，国产），倒置相差显微镜（CK40型，Olympus，日本），显微镜 (BX51型，Olympus,日本），显微数码采集系统（DP71型，Olympus,日本），多功能酶标仪 (InfiniteM200型，TECAN，瑞± )，台式室溫高速离屯、机灯化-16G型，北京），台式低溫高 速离屯、机（2K15型，Sigma公司，美国），化60电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公 司），LD4-40大容量离屯、机（北京京立离屯、机有限公司），2K15高溫低速冷冻离屯、机（sigma 公司），UV765紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），激光共聚焦扫描显微镜 (MRC-1024 型，Bio-Rad,英国）。
[0032] 二、试验方法
[0033] 1、细胞株及培养
[0034] 选用乳腺癌MCF-7细胞（雌激素受体阳性Er,人类表皮生长因子受体-2阴性 肥RZ/neu)、乳腺癌MDA-MB-231细胞巧R，肥RZ/neu)和乳腺癌MDA-MB-453巧R，肥RZ/ neiO细胞株，=种细胞株均来自于中国科学院生物化学与细胞生物学研究所。MCF-7细胞 和104-18-231细胞培养于含10%标准胎牛血清的0161/。12高糖培养液中，104-18-453细 胞培养于含10%标准胎牛血清的RPMI-1640培养液中，W上细胞均于37°C、5%C〇2条件下 常规培养传代。=种乳腺癌细胞均为贴壁细胞，贴壁细胞的传代：待细胞贴壁生长2~3d至 80%融合时，弃去旧培养液，用适量的0.Imol/LPBS(抑7. 4)漂洗细胞2次后向瓶内加入适 量0.25%的膜酶（pH7. 4)的O.lmol/LPBS配制，过滤除菌。消化，W刚好盖住细胞培养瓶 底部为宜，光镜下观察，待细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即加入新鲜的培养液终止消化， 并用吸管轻轻反复吹打，使细胞脱离瓶底形成细胞悬液；调整细胞浓度，吸取适量细胞悬液 加入新培养瓶中，加入6mL新鲜培养基，显微镜下观察，放置于细胞培养箱。
[0035] 2、细胞增殖活力检测
[0036] 利用CCK-8法检测化合物（I)对S种乳腺癌细胞增殖活力的影响。CCK-8试 剂盒（CellCountingKit-8)是由日本同仁化学研究所开发的检测细胞增殖的试剂盒， CCK-8试剂中含有WST-8[2- (2-甲氧基-4-硝基苯基）-3- (4-硝基苯基）-5- (2,4-二横酸 苯）-2H-四挫单钢盐]，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗦硫酸二甲醋（I-MethoxyPM巧 的作用下被细胞线粒体中的脱氨酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臘产物，生成的甲臘物 的数量与活细胞的数量成正比。用酶标仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活 细胞数量。
[0037] 具体操作为：将对数生长期的乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-453常规传 代，细胞计数，W2. 5XIOVmL细胞浓度接种于96孔细胞培养板内，每孔200y以培养过夜， 待细胞贴壁且生长良好。实验分5组，每组作6个平行孔，分别加入不同量的化合物（I)， 使其终浓度分别为200、150、100、50mg/mU对照组加等量蒸馈水，培养2地，弃掉培养液，W PBS洗3次，加入新鲜培养液每孔200yL，然后每孔加入10yLCCK-8,培养4h收获细胞， W酶标仪检测450nm处光密度值巧(450)]，W蒸馈水空白调零，计算不同浓度化合物（I) 作用的增殖抑制率。 阳03引细胞增殖抑制率=[对照D(450)-实验组D(450)]/对照D(450)X100%
[0039] 3、细胞调亡的检测
[0040] 利用AnnexinV/PI双染流式细胞分析技术检测化合物（I)对乳腺癌细胞MCF-7、 MDA-MB-231、MDA-MB-453调亡的影响。实验严格按照Annex