一种硫辛酸聚合物杂质的制备及其检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药技术领域，具体涉及一种硫辛酸聚合物杂质的制备及其检测方 法。
【背景技术】
[0002] 右旋硫辛酸，（英文名1?(+从1?11&1^?〇化4(^(1)其分子式 :(：8!114〇232，分子量206.33， 结构式如下：
[0003]硫辛酸含有双硫五元环结构，电子密度高，具备很高的自由基反应能力，其被誉为 "万能抗氧化剂"，能去除机体自由基，能促进机体利用葡萄糖合成维生素C，有效去除黑色 素，还具有抗炎抗衰老的功效。目前被广泛应用于预防和治疗心脏病、糖尿病、肝病和老年 痴呆症。
[0004]临床上，目前的硫辛酸品种主要用于治疗糖尿病周围神经病变（diabetic peripheralneuropathy，DPN)引起的感觉异常。我国在2000年批准了原研的德国史达得公 司的硫辛酸注射液(奥力宝)进口上市，国内一些有关硫辛酸液体或者固体的仿制制剂也都 获得了国内SFDA的批准而相继上市。
[0005]硫辛酸具有旋光性，与混旋硫辛酸，左旋硫辛酸相比，在治疗II型糖尿病促进骨骼 肌摄取葡萄糖;减少血浆胰岛素和游离脂肪酸水平;改善胰岛素作用下的糖原合成以及葡 萄糖氧化作用；增加动物血流含氧量等方面，右旋硫辛酸更具有活性优势。因此，右旋硫辛 酸在预防和治疗心脏病、糖尿病、肝病及老年痴呆等疾病方面具有更广阔的前景。
[0006]但是，右旋硫辛酸具有在理化性质上的重大缺陷，即很不稳定；并且，右旋硫辛酸 的熔点比消旋体更低，只有47°C左右，在较低温度下即可发生聚合，在酸性催化和光照条件 下聚合加剧，影响了其临床治疗的药效和安全性。
[0007] 硫辛酸极易聚合的特性早已被研究者们发现、探索并利用。早在1956年，Thomas等 人在JournaloftheAmericanChemicalSociety中的论文"DisulfidePolymersof DL-LipoicAcid"中首次报道了DL-硫辛酸热聚合的反应。其是将硫辛酸在65°C加热熔融， 保温反应15min，降至室温后，用苯溶剂连续萃取反应产物，直至萃取溶剂的颜色变成无色， 浓缩苯溶剂，最终得到粘稠的淡黄色聚合物。但是，在该报道中没有描述产物的聚合程度及 分子量，并且使用剧毒的苯溶剂来萃取，使得该制备方法难以推广。
[0008] 2010年，日本学者KISANUKI等人在JournalofPolymerScience:PartA: PolymerChemistry上发表的论文"Ring-OpeningPolymerizationofLipoicAcidand CharacterizationofthePolymer"中，将硫辛酸纳入经典的聚合物反应条件下进行聚合。 其中之一是在不加入任何引发剂的情况下，进行本体熔融的封管聚合，所得聚合物的分子 量经GPC分析确定在105-106的范围内，聚合程度非常高。
[0009] 德国欧博康公司在申请的中国专利CN200780029055.3中公开了一种低聚态的硫 辛酸衍生物，聚合度η为4-6，尤其优选的是以碱土金属盐，有机胺盐或者氨基酸盐的形式存 在，并请求保护包含该低聚态的硫辛酸的组合物在制备稳定类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物 的药物中的用途。其是将碱与硫辛酸在水溶液中反应，且高温反应l_5h，然后通过添加不良 溶剂析出低聚态硫辛酸和碱平衡离子的合成物。
[0010] 虽然硫辛酸聚合物及合成反应屡见不鲜，但是将药品储存过程中易产生的硫辛酸 低聚物作为杂质对照品，加上高效液相色谱法，用以测定硫辛酸原料药和制剂中的聚合物 杂质含量，还未见报道。目前，在有关硫辛酸的原料药和制剂品种的质量控制中，有关物质 的检查方面，除了特定控制已知杂质A，即6,8_表三硫辛酸之外，其他杂质基本都是按照未 知杂质控制的。鉴于硫辛酸极易聚合的不稳定的特性，其聚合物杂质很可能混在这些未知 杂质当中而未被单独控制，或者在现有色谱条件下根本没有检出，因此有可能会造成聚合 物杂质引发不良反应例如过敏症状的安全风险。更有可能的是，普遍使用在有关物质检查 项的C18色谱柱系统，也许根本无法检出或有效分离出硫辛酸相关的聚合物杂质，给用药的 疗效和安全性带来了隐患。
[0011]
【发明内容】
[0012] 本发明为了克服上述【背景技术】的不足，提供了一种硫辛酸低聚物的杂质对照品及 其制备方法，还包括运用该硫辛酸低聚物杂质对照品，运用高效的分子排阻色谱法，来测定 硫辛酸原料药和制剂中的聚合物杂质含量的检测方法。
[0013]为了针对性地研究右旋硫辛酸原料药和制剂在日常存储过程中产生的聚合物杂 质的特点，我们将三批中试样品的原料药和制剂，经过6个月加速试验，以及光照影响因素 试验一段时间后的样品，进行聚合物杂质的分离分析。经过适当的后处理过程后，我们把富 含聚合物杂质的母液进行浓缩，将浓缩物通过制备液相的方法进行分离并收集聚合物组分 峰，将富集的聚合物杂质浓缩，送检进行ESI-MS的质谱分析。结果显示，上述杂质浓缩中主 要显示的是二聚体和三聚体的质子峰，由质子峰强度初步判断占绝大部分的比重，质谱中 无四聚体的分子量出现。这表明在常规的生产和储藏条件下，硫辛酸产生的聚合物杂质主 要是二聚体和三聚体，即属于硫辛酸的低聚物，而在此条件下生成硫辛酸高聚物的几率较 小。
[0014]因此，能制备获得纯度符合要求的右旋硫辛酸低聚物作为杂质对照品，将对硫辛 酸的原料药和制剂中的聚合物杂质的定性、定量分析控制具有重要意义。
[0015]本发明的目的之一提供了一种高纯度的硫辛酸低聚物的组合物及其制备方法。
[0016]本发明提供的一种组合物，其包含有如下所示的右旋硫辛酸低聚物，该低聚物由2 至3个右旋硫辛酸单体分子缩聚而成，其中，η= 2-3; ?'flyiT
〇
[0017] 进一步地，该组合物中右旋硫辛酸的二聚体、三聚体的HPLC纯度之和大于98.5%。
[0018] 本发明还提供一种制备如权利要求1或2所述的组合物的方法，其特征在于，包含 如下步骤：
A) 将右旋硫辛酸单体溶于无水的四氢呋喃或二氧六环的溶剂中，加入催化量的偶氮二 异丁腈AIBN，在35-40°C下搅拌10_20min;其中，右旋硫辛酸在溶剂中的质量/体积百分数为 3-15%，单位g/mL; B) 快速降温至10_15°C之间，保温搅拌0.5-1.5h，加入适量稀酸溶液终止反应； C) 将反应液投入乙酸乙酯和水的混合液中，搅拌分层，取乙酸乙酯层，水层再用乙酸乙 酯萃取两遍，合并有机层，浓缩至少量体积后加入异丙基醚，析出淡黄色的半固体，即得到 上述右旋硫辛酸低聚物的组合物。
[0019] 优选地，步骤A中的溶剂选择为四氢呋喃，右旋硫辛酸在四氢呋喃中的质量/体积 百分数为3-5%，单位g/mL;偶氮二异丁腈的质量是右旋硫辛酸质量的0.05-0.1倍。
[0020] 优选地，步骤B中，在10-15°c之间保温搅拌的时间为lh，稀酸溶液选自稀盐酸、稀 磷酸中的一种，浓度为5-10 %。
[0021] 优选地，步骤C所得的右旋硫辛酸低聚物的组合物粗品可通过如下步骤进行重结 晶精制:将粗品悬浮于甲基异戊酮中，搅拌分散，升高温度至45-50°C之间，缓慢加入体积比 为1:1的乙醇/水的混合溶剂，直至完全溶解，趁热过滤，缓慢降至温度0-5°C，收集析出的淡 黄色半固体，30 ± 2°C真空干燥12h，即得精制品。
[0022]优选地，甲基异戊酮的体积是粗品重量的6-9倍，乙醇/水混合溶剂的体积为粗品 重量的3-4倍，体积重量比的单位是mL/g。
[0023] 本发明的另一个目的是提供右旋硫辛酸原料或制剂样品中所述右旋硫辛酸低聚 物杂质的检测方法。
[0024] 本发明人对该分析方法的摸索进行过深入研究。我们发现运用十八烷基硅烷键合 硅胶为填充剂的C18柱，虽然可有效控制已知杂质A及其他未知杂质，但对于聚合物杂质这 一部分研究很不透彻透彻。我们运用按本发明制备方法获得的右旋硫辛酸低聚物对照品， 指针性地定位样品中的聚合物杂质，发现C18柱体系并不能有效指示出聚合物杂质峰。我们 参考有关内酰胺抗生素控制聚合物杂质的方法，采用高效的分子排阻色谱法进行本品中 聚合物杂质的分离和分析，具体色谱条件如下： 岛津LC-20AT(DAD检测器），TSK-GEL-G2000SWXL(7 · 8*300mm，5μπι)色谱柱，以0 · 005mo1 /L磷酸盐缓冲液(pH7.0) [0.005mol/L的磷酸氢二钠溶液-0.005mol/L的磷酸二氢钠溶液 (60:40)]-乙腈(97:3)