为流动相，流速为0.8mL/min，检测波长为254nm，进样量20yL，柱温为 25。。。
[0025] 我们发现和参考，中国药典中在抗生素品种聚合物杂质控制时大多数是采用不加 校正因子的自身对照法，因此，我们采用首先尝试不加校正因子的自身对照法来计算，同时 使用低聚物对照品的溶液进行色谱峰的定位。我们制备的低聚物对照品在上述色谱条件 下，显示的是位于主峰硫辛酸之前的一个单峰，分离度良好。具体检测步骤是： (1) 取右旋硫辛酸原料药适量，精密称定，用适量乙腈溶解后，加流动相稀释成每lmL含 1 .〇mg的溶液，作为供试品溶液； (2) 精密量取供试品溶液适量，用流动相稀释成每lmL含10yg的溶液作为对照溶液A; (3) 另精密称取右旋硫辛酸低聚物对照品适量，加乙腈溶解并定量稀释成每lmL含10yg 的溶液作为低聚物对照品溶液B; (4) 取对照溶液A的20yL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高为满量 程的 20-25 %; (5) 再精密量取上述三种溶液各20yL，分别注入液相色谱仪，记录供试品溶液色谱图； 供试品溶液的色谱图中如显示低聚物峰，按照不加校正因子的自身对照法计算含量，不得 大于对照溶液A主峰面积的0.5倍(0.5% )。
[0026] 在获得制备的右旋硫辛酸低聚物对照品的基础上，我们尝试开发杂质对照品的外 标法进行计算。我们制备的低聚物对照品在所采用的色谱条件下显示的是位于主峰硫辛酸 之前的单峰，分离度良好。具体检测步骤是： (1) 取右旋硫辛酸原料药适量，精密称定，用适量乙腈溶解后，用流动相稀释制成每lml 中约含1.Omg的溶液，作为供试品溶液； (2) 另取右旋硫辛酸低聚物对照品适量，精密称定，用稀释液制成每lml中约含10yg的 溶液，作为对照品溶液； (3) 照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录VD)测定，精密量取对照品溶液20 yL注入液相色谱仪，记录色谱图，调节检测灵敏度，使杂质对照品的峰高约为满量程的20-25% ； (4) 再精密量取供试品溶液与对照品溶液各20yL，分别注入液相色谱仪； (5) 供试品溶液如有与对照品溶液中杂质A保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积 计算，其含量不得过〇. 5 %。
[0027]右旋硫辛酸制剂的检测方法可按照原料药的方法进行调整即得。
[0028] 本发明还有一个目的是提供所述右旋硫辛酸低聚物对照品在右旋硫辛酸的原料 药或制剂检测中的用途。
[0029] 综上所述，本发明取得了如下有益的技术效果和进步： (1)采用本制备方法可简便地实现右旋硫辛酸原料药或制剂中可能存在的杂质，即低 聚物的制备，可作为硫辛酸检测方法中杂质对照品使用。本制备方案操作简便，其实原料易 得，制备量完全可满足作为右旋硫辛酸检测方法中的杂质对照品使用的需要。我们也曾尝 试仅使用本体熔融的热聚合方式进行缩聚，但聚合程度难以把握，无法获得低聚物比如二 聚体三聚体，相反获得的是分子量在一万以上的高聚物。我们发现右旋硫辛酸的低浓度溶 液3-5%，在自由基引发剂偶氮二异丁腈的催化下，控制好引发温度和聚合反应的持续时 间，即可获得较为理想的右旋硫辛酸的低聚物，质谱分析主要为二聚体和三聚体，再经重结 晶精制后，即可纯度达标98.5%的杂质对照品。
[0030] (2)采用高效的分子排阻色谱法来控制右旋硫辛酸中的低聚物含量，能达到硫辛 酸与低聚物的完全分离，两者峰形较好，理论板数按照右旋硫辛酸即能达到3000以上，且对 于低聚物的检测灵敏度较其他常规方法高，最低检测限能达到0.1ug/mL，在右旋硫辛酸原 料药和制剂的制备和储藏过程中能有效的监控其低聚物的产生与变化情况，为右旋硫辛酸 制剂的临床应用提供进一步的安全保障。
[0031] (3)本发明提供了一种能对右旋硫辛酸的聚合物杂质进行快速且准确检测的分析 方法，能将缩合物杂质和右旋硫辛酸先后分开，并能准确测定其聚合物杂质的含量，且聚合 物杂质的出峰位置比较固定，利于解决其定位的问题。整个测试分析全过程在20min以内， 大大缩短了检测时间。所用方法简便，灵敏，准确，重复性好，十分利于聚合物的检查和含量 测定。
【附图说明】 图1为供试品溶液典型的色谱图，其中，1表示主峰，2表示低聚物峰，3表示该色谱条件 下的其他降解产物。
【具体实施方式】
[0032]下面结合具体的实施例对本发明的技术方案作进一步的说明。
[0033]实施例1右旋硫辛酸低聚物的制备 将右旋硫辛酸单体l〇g，溶于无水二氧六环200mL中，加入催化量的偶氮二异丁腈0.5g， 在35-40°C下搅拌15min，之后快速降温至10-15°C之间，保温搅拌lh，加入5%稀盐酸约10mL 终止反应;将反应液投入乙酸乙酯400mL和水400mL的混合液中，搅拌分层，取乙酸乙酯层， 水层再用乙酸乙酯200mL萃取两遍，合并有机层，浓缩至少量体积约50mL后加入异丙基醚 300mL，析出淡黄色的半固体，过滤，30± 2°C真空干燥10h，即得到上述右旋硫辛酸低聚物的 组合物约7.5g，收率75 %，HPLC纯度为98.5 %。
[0034]实施例2右旋硫辛酸低聚物的精制 将实施例1所得右旋硫辛酸低聚物粗品5g悬浮于甲基异戊酮40mL中，搅拌分散，升高温 度至45-50°C之间，缓慢加入体积比为1:1的乙醇/水的混合溶剂约15mL，保温搅拌直至完全 溶解，趁热过滤，缓慢降至温度〇_5°C，收集析出的淡黄色半固体，30±2°C真空干燥12h，即 得精制品3.5g，纯度为99.5%。
[0035]实施例3右旋硫辛酸低聚物精制品的制备 将右旋硫辛酸单体8g，溶于无水四氢呋喃180mL中，加入催化量的偶氮二异丁腈0.4g， 在35-40°C下搅拌20min，之后快速降温至10-15°C之间保温搅拌lh，加入5%稀磷酸20mL终 止反应;将反应液投入乙酸乙酯400mL和水400mL的混合液中，搅拌分层，取乙酸乙酯层，水 层再用乙酸乙酯200mL萃取两遍，合并有机层，浓缩至少量体积约40mL后加入异丙基醚 250mL，析出淡黄色的半固体，过滤，30± 2°C真空干燥12h，即得到上述右旋硫辛酸低聚物的 组合物约5.9g，收率78%，HPLC纯度为98.6 % ;将所得产物进一步精制，即将上述5g样品悬 浮于甲基异戊酮45mL中，搅拌分散，升高温度至45-50°C之间，缓慢加入体积比为1:1的乙 醇/水的混合溶剂约20mL，保温搅拌直至完全溶解，趁热过滤，缓慢降至温度0-5°C，收集析 出的淡黄色半固体，30 ± 2°C真空干燥12h，即得精制品，约3.2g，HPLC纯度为99.6%。
[0036] 核磁氢谱1H-匪Rjppm3.05(3H，m，6-H，8-H2) ;2.62(2H，t，J= 7Hz，2-H2) ;2.25 (2H，m，7-H2);1.37-1.95(6H，m，3,4,5-H2)。
[0037] 质谱ESI-MS(质谱条件:ESI电离源，负离子模式，极化电压-4200V，进样速度5μ!7 min，采用频率ls，质量范围200-2000Da) 11^ = 415.7，[二聚体+!1] +;437.4，[二聚体+恥]+;111/2 = 621.8，[三聚体+!1] +;644.1，[三 聚体+Na] +。
[0038] 实施例4对比实施例，右旋硫辛酸的本体熔融热聚合反应 称取硫辛酸8g置于50mL反应瓶中，在65°C加热片刻后，得到熔融粘稠油状物，投入磁力 搅拌子，在油状物中快速搅拌，60-65°C间保温反应0.5h。降至室温，加入适量DMF溶出产物 后，缓慢滴加到甲基叔丁基醚之中，得到浅黄色的絮状产物，搅拌片刻后随即所称淡黄色的 一团半固体物。将该半固体物物依次用乙醇和乙酸乙酯洗涤，30 ± 2°C真空干燥12h，即得右 旋硫辛酸的热聚产物。
[0039]采用快速轰击质谱分析法测试，FAB-MS(M-H) -:205(68)，413(8·9)，619(2·9)，825 (1.5)，1031(0.88)，1237(0.62)，1443(0.47)，1649(0.3)，1855(0.17)，2061(0.17)，2269 (0.13),2475(0.11)〇
[0040] 由上述结果可知，该聚合物的分散度较大，分子量变化从二聚体η= 2至多聚体η= 10不等。
[0041] 实施例5不加校正因子的自身对照法测定原料药中的聚合物杂质 具体色谱条件如下：岛津LC-20AT(DAD检测器），TSK-GEL-G2000SWXL(7.8*300mm，5ym) 色谱柱，以0 · 005mol/L磷酸盐缓冲液(pH7 · 0) [0 · 005mol/L的磷酸氢二钠溶液-0 · 005mol/L 的磷酸