转速80rpm/min)中培养36h，得二级摇瓶种。
[0021]其中，三级发酵罐种的制备步骤为:挑选新鲜无霉变马铃薯1.2kg，去皮后切成小块倒入夹层锅中，加入6L的水，熬制40-60min后，用滤布过滤，补水至6L，搅拌均匀得新鲜土豆汁；将新鲜土豆汁全部加入10L发酵罐种中，同时加入120g蔗糖和3ml的消泡剂，121°C灭菌20min;在无菌环境下用灭过菌的搅拌机将二级摇瓶种搅碎，通过无菌操作接入480ml菌液以冷却的发酵罐中，同时加入定量青霉素，使青霉素浓度为50yg/mL;发酵罐搅拌转速200r/min，罐压0.8-1.2 kg/cm2，通风量0.4 V/V.min，28_32°C，培养过程中在线检测pH值变化、菌丝体含量变化及培养液清亮度的变化，培养36 h后，得三级发酵罐种;培养过程中，pH值逐渐降低，当培养至33-36 h时，ph值由初始值7降低至3.6左右，此刻若pH值低于3或高于4都表示种子异常；随着培养时间的增加，培养基逐渐变得清亮透明，根霉曲特有的甜香味越来越浓郁，菌丝体含量也逐渐增多，当菌丝体含量增加至80-100g/L时即可放罐，此时菌丝体含量达到最大，不再随培养时间的延长而增加。
[0022]其中，四级生产种的制备步骤为:称取48kg大米，粉碎至40目，加入2kg麦麸后混合均匀，放入灭菌锅干蒸lh后拿出冷却，当大米-麦麸培养基冷却至50°C时加入17.5kg新鲜无菌水，搅拌均匀；将培养好的三级种从发酵罐中放出，用灭过菌的搅拌机将菌丝体搅碎，称取3kg菌液接种于上述大米-麦麸培养基中，搅拌均匀后，送至发酵房恒温恒湿培养36h，得四级生产种；
最后，成曲烘干，将四级生产种放入烘房，40-45°C，排湿烘干30-36h，得成曲。
[0023]按照上述步骤培养的根霉曲纯度高，活性强，质量稳定，效率高，周期短，可以在线监测各级菌种的质量，并可以实现工业化生产。本发明采用新的生产工艺技术，根霉曲的生产过程中能够在线监测各级种子质量，整个生产周期也明显缩短，生产出的根霉曲，糖化酶活力从1172U/g提高到1240U/g，杂菌数也大为减少，基本检测不出，使得种曲活性更高，质量更稳定，安全性更好。
[0024]本文中应用了具体实施例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，由于文字表达的有限性，而客观上存在无限的具体结构，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进、润饰或变化，也可以将上述技术特征以适当的方式进行组合;这些改进润饰、变化或组合，或未经改进将发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种高效生产根霉曲的工艺，其特征在于，通过四级培养得到根霉曲，各级种子所采用的培养基各不相同:一级试管种采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基;二级摇瓶种采用麦芽汁液体培养基;三级发酵罐种采用马铃薯-蔗糖液体培养基；四级生产种采用大米麦麸培养基。2.根据权利要求1所述的高效生产根霉曲的工艺，其特征在于，所述大米麦麸培养基中米粉与麦麸的比例为24:1，所述米粉为大米磨粉，过40目筛。3.根据权利要求1所述的高效生产根霉曲的工艺，其特征在于，所述一级试管种采用如下方法培养:配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基；于115 °C灭菌25 min，分装至已灭菌的试管中，制成试管斜面培养基;挑取已活化的根霉菌接种于试管斜面，30 1恒温培养48 h得一级试管种。4.根据权利要求3所述的高效生产根霉曲的工艺，其特征在于，所述马铃薯葡萄糖琼脂培养基的配制方法为:选新鲜无霉变马铃薯，去皮、切块，温火熬制后过滤，补水并加入葡萄糖和琼脂粉，搅拌均匀，最终重量比为马铃薯20%、葡萄糖2%、琼脂粉2%。5.根据权利要求1所述的高效生产根霉曲的工艺，其特征在于，所述二级摇瓶种采用如下方法获得:配制麦芽糖液体培养基，115°C高压灭菌15min，冷却后，无菌环境下将一级试管种接种于三角瓶中，恒温摇床培养36 h，其中温度30°C、转速80 rpm/min，得二级摇瓶种。6.根据权利要求1所述的高效生产根霉曲的工艺，其特征在于，所述三级发酵罐种采用如下方法获得:配制马铃薯-蔗糖液体培养基加入发酵罐中，121°C灭菌20 min，在无菌环境下用灭过菌的搅拌机将二级摇瓶种搅碎，通过无菌操作按8%的接种量接入以冷却的发酵罐中，同时加入青霉素至50 yg/mL，28-32°C下发酵罐培养36 h，培养过程中监测pH值变化。7.根据权利要求6所述的高效生产根霉曲的工艺，其特征在于，所述马铃薯-蔗糖液体培养基采用如下方法配制:挑选新鲜无霉变马铃薯，去皮后切成小块倒入夹层锅中，加入5倍体积的水，熬制40-60 min后，用滤布过滤，补水至5倍体积，搅拌均匀得新鲜土豆汁;将新鲜土豆汁加入发酵罐种中，同时加入2%的蔗糖和0.5%。的消泡剂。8.根据权利要求7所述的高效生产根霉曲的工艺，其特征在于，所述发酵罐培养的具体条件为:发酵罐搅拌转速200 r/min，罐压0.8-1.2 kg/cm2，通风量0.4 V/V.min。9.根据权利要求2所述的高效生产根霉曲的工艺，其特征在于，所述四级生产种采用如下方法获得:配制大米麦麸培养基，放入灭菌锅干蒸1 h后拿出冷却，当大米麦麸培养基冷却至50°C时加入35%质量分数的新鲜纯净水，搅拌均匀；将培养好的三级种从发酵罐中放出，用灭过菌的搅拌机将菌丝体搅碎，按10%的比例接种于上述大米麦麸培养基中，搅拌均匀后，送至已消毒过的发酵房以温度30°C、湿度60%的条件恒温恒湿培养36 ho10.根据权利要求9所述的高效生产根霉曲的工艺，其特征在于，还包括成曲烘干步骤，将四级生产种放入烘房，40-45°C，排湿烘干30-36 h，水分含量降至8-10%时得到根霉曲。
【专利摘要】本发明公开了一种高效生产根霉曲的工艺，通过四级培养得到根霉曲，各级种子所采用的培养基各不相同：一级试管种采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基；二级摇瓶种采用麦芽汁液体培养基；三级发酵罐种采用马铃薯-蔗糖液体培养基；四级生产种采用大米麦麸培养基。该工艺采用液固态结合发酵的生产工艺技术，前三级种子采用液态发酵技术，第四级生产种用固态发酵技术，结合了固态发酵和纯液态发酵各自的优点，制作出的根霉曲纯度高，活性强，质量稳定，效率高，周期短，可以在线监测各级菌种的质量，并可以实现工业化生产。
【IPC分类】C12N1/14, C12R1/845
【公开号】CN105462861
【申请号】CN201610050328
【发明人】季家举, 谢元
【申请人】湖南澳深生物工程有限公司
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2016年1月26日