含有大颗粒谷物的皱盖假芝发酵培养基及其制作方法
【专利说明】
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及一种皱盖假芝培养基及制作方法，尤其涉及一种含有大颗粒谷物的皱盖假芝培养基及其制作方法，属于食用菌培养技术领域。
【【背景技术】】
[0002]皱盖假芝(Amauroderma rude，俗名血芝)是一种珍稀药用菌，体外试验证实，其多糖对人胸腺肿瘤细胞、人脑胶质肿瘤细胞、人前例腺癌细胞、人宫颈癌细胞、人肝癌细胞和人肺癌细胞等具有显著的细胞增殖抑制作用。其效力甚至优于灵芝、云芝等多种食药用菌[1]。在小鼠活体试验中发现，服食皱盖假芝多糖后的小鼠，脾淋巴细胞增殖、巨噬细胞、NK细胞被激活;荷瘤小鼠在服食皱盖假芝多糖后，肿瘤组织体积极显著缩小[2]。另外，在急慢性毒理试验中，均证实其多糖无明显毒性。
[0003]发明“一种皱盖假芝的人工栽培方法”(CN103749151B)中显示，皱盖假芝子实体产生的周期约为80天，为了更快地获得其中多糖等活性成分，则必须借助真菌菌丝体发酵技术。菌丝体的发酵技术分为固体发酵和液体发酵。液体发酵的特点在于菌丝和发酵液容易分离，可分别取材;而固体发酵的优点则在，通过不同的谷物，可获得不同类型的发酵产物，是皱盖假芝抗肿瘤有效成分的筛选源。但是大颗粒型谷物原料硬度较大，颗粒内水分分布不均匀，菌丝无法在上面正常生长。
【
【发明内容】
】
[0004]针对上述现有技术存在的问题，本发明的目的是提供一种含有大颗粒谷物的皱盖假芝发酵培养基的制作方法。
[0005]为实现上述目的，本发明采用以下技术方案:
[0006]含有大颗粒谷物的皱盖假芝发酵培养基的制备方法，包括以下步骤:
[0007](1)原料预处理:取一定量的大颗粒谷物，用纯化水浸没，置于98°C的水浴中1-2小时，待谷物中心无干燥部位时停止水浴，倒去煮液并沥干谷物上残留的煮液；
[0008](2)加营养液:按照干原料与营养液的质量体积比(g/mL)为1:0.3-1:0.5的量往步骤(1)预处理后的谷物中加入营养液并搅拌；
[0009](3)灭菌:将沾有营养液的原料进行高温高压湿热灭菌；
[0010](4)将灭菌冷却后的原料，在无菌的状态下搅拌以使颗粒充分分散不粘联。
[0011]优选的，上述步骤(1)中，大颗粒谷物为最好为高粱或大麦。
[0012]优选的，上述步骤(2)中，营养液配方为:葡萄糖10g/L、蛋白胨5g/L、酵母浸出粉2g/L、磷酸氢二钾 1 g/L、硫酸镁 0.5g/L、pH5.5。
[0013]优选的，上述步骤(3)中，灭菌时间为30-75min，灭菌条件为121°C、0.1MPa。
[0014]在上述制作方法制得的含有大颗粒谷物的皱盖假芝发酵培养基中接入菌种后，菌丝体生长正常。
[0015]和现有技术相比，本发明的有益效果在于:
[0016]本发明通过对大颗粒型谷物的预处理，添加适当的营养液，制作出了适合皱盖假芝菌丝体生长的固体发酵培养基，克服了现有技术中皱盖假芝菌丝体不能在大颗粒型谷物原料上正常生长的缺陷，为皱盖假芝固体发酵培养基原料提供了更多的选择，有利于获得更多不同类型的皱盖假芝菌丝体发酵产物。
【【附图说明】】
[0017]图1:实施例1中培养基接种3天后的发酵情况；
[0018]图2:实施例1中培养基接种8天后的发酵情况；
[0019]图3:实施例2中培养基接种3天后的发酵情况；
[0020]图4:实施例2中培养基接种8天后的发酵情况。
【【具体实施方式】】
[0021]以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。
[0022]实施例1
[0023]按照下列步骤制作一种含有大颗粒谷物的皱盖假芝发酵培养基:
[0024](1)原料预处理:取40g红高粱，加入250mL锥形瓶中，再加入纯化水没过红高粱，置于98°C的水浴中加热1小时，利用纱布过滤出去煮液，然后在瓶口垫吸水纸，倒扣锥形瓶，加快煮液吸干；
[0025](2)加营养液:往预处理后的红高粱中加入15mL营养液，其中营养液的配方为:葡萄糖1(^/1、蛋白胨58/1、酵母浸出粉28/1、磷酸氢二钾18/1、硫酸镁0.58/1、？!15.5，稍微搅拌谷粒以使其表面沾有营养液；
[0026](3)灭菌:将沾有营养液的原料在121 °C、0.1ΜPa条件下进行高温高压湿热灭菌75min；
[0027](4)在无菌的状态下，搅拌灭菌冷却后的原料，以使颗粒充分分散不粘联，得到含有高粱的皱盖假芝固体发酵培养基。
[0028]利用常规方法，往制得的培养基中接入12d-20d的液体皱盖假芝菌种，每个锥形瓶中接入6mL液体菌种。持续观察接种后菌丝体的发酵情况，观察结果显示，接种24小时后，菌丝体萌发，接种3天后，可见菌丝沿高粱颗粒表面生长，菌丝白色、粗壮、呈毛毡状(如附图1所示)；接种8天后，菌丝体基本上布满培养料表面，部分菌丝体区域出现皱盖假芝特有的黑褐色色素沉积(如附图2所示)，表明菌丝体生长正常。
[0029]实施例2
[0030]按照下列步骤制作一种含有大颗粒谷物的皱盖假芝发酵培养基:
[0031](1)原料预处理:取40g大麦，加入250mL锥形瓶中，再加入纯化水没过红高粱，置于98°C的水浴中加热1小时，利用纱布过滤出去煮液，然后在瓶口垫吸水纸，倒扣锥形瓶，加快煮液吸干；
[0032 ] (2)加营养液:往预处理后的大麦中加入15mL营养液，其中营养液的配方为:葡萄糖10g/L、蛋白胨5g/L、酵母浸出粉2g/L、磷酸氢二钾lg/L、硫酸镁0.5g/L、pH5.5，稍微搅拌谷粒以使其表面沾有营养液；
[0033](3)灭菌:将沾有营养液的原料在121°C、0.1MPa条件下进行高温高压湿热灭菌75min；
[0034](4)在无菌的状态下，搅拌灭菌冷却后的原料，以使颗粒充分分散不粘联，得到含有高粱的皱盖假芝固体发酵培养基。
[0035]利用常规方法，往制得的培养基中接入12d-20d的液体皱盖假芝菌种，每个锥形瓶中接入6mL液体菌种。持续观察接种后菌丝体的发酵情况，观察结果显示，接种24小时后，菌丝体萌发，接种3天后，可见菌丝沿大麦颗粒表面生长，菌丝白色、粗壮、呈毛毡状(如附图3所示)；接种8天后，菌丝体基本上布满培养料表面，部分菌丝体区域出现皱盖假芝特有的黑褐色色素沉积(如附图4所示)，表明菌丝体生长正常。
[0036]实施例3
[0037]按照下列步骤制作一种含有大颗粒谷物的皱盖假芝发酵培养基:
[0038](1)原料预处理:取40g红高粱，加入250mL锥形瓶中，再加入纯化水没过红高粱，置于98°C的水浴中加热2小时，利用纱布过滤出去煮液，然后在瓶口垫吸水纸，倒扣锥形瓶，加快煮液吸干；
[0039](2)加营养液:往预处理后的红高粱中加入12mL营养液，其中营养液的配方为:葡萄糖1(^/1、蛋白胨58/1、酵母浸出粉28/1、磷酸氢二钾18/1、硫酸镁0.58/1、？!15.5，稍微搅拌谷粒以使其表面沾有营养液；
[0040](3)灭菌:将沾有营养液的原料在121°C、0.1MPa条件下进行高温高压湿热灭菌30min；
[0041](4)在无菌的状态下，搅拌灭菌冷却后的原料，以使颗粒充分分散不粘联，得到含有高粱的皱盖假芝固体发酵培养基。
[0042]利用常规方法，往制得的培养基中接入12d-20d的液体皱盖假芝菌种，每个锥形瓶中接入6mL液体菌，观察接种后菌丝发酵情况与实施例1类似。
[0043]实施例4
[0044]按照下列步骤制作一种含有大颗粒谷物的皱盖假芝发酵培养基:
[0045](1)原料预处理:取40g大麦，加入250mL锥形瓶中，再加入纯化水没过红高粱，置于98°C的水浴中加热1.5小时，利用纱布过滤出去煮液，然后在瓶口垫吸水纸，倒扣锥形瓶，加快煮液吸干；
[0046](2)加营养液:往预处理后的大麦中加入20mL营养液，其中营养液的配方为:葡萄糖10g/L、蛋白胨5g/L、酵母浸出粉2g/L、磷酸氢二钾lg/L、硫酸镁0.5g/L、pH5.5，稍微搅拌谷粒以使其表面沾有营养液；
[0047](3)灭菌:将沾有营养液的原料在121°C、0.1MPa条件下进行高温高压湿热灭菌50min；
[0048](4)在无菌的状态下，搅拌灭菌冷却后的原料，以使颗粒充分分散不粘联，得到含有高粱的皱盖假芝固体发酵培养基。
[0049]利用常规方法，往制得的培养基中接入12d-20d的液体皱盖假芝菌种，每个锥形瓶中接入6mL液体菌种，观察接种后菌丝发酵情况与实施例2类似。
[0050]以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。
【主权项】
1.含有大颗粒谷物的皱盖假芝发酵培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)原料预处理:取一定量的大颗粒谷物，用纯化水浸没，置于98°c的水浴中1-2小时，待谷物中心无干燥部位时停止水浴，倒去煮液并沥干谷物上残留的煮液； (2)加营养液:按照干原料与营养液的质量体积例为1:0.3-1:0.5的量往步骤(1)预处理后的谷物中加入营养液并搅拌； (3)灭菌:将沾有营养液的原料进行高温高压湿热灭菌； (4)将灭菌冷却后的原料，在无菌的状态下搅拌以使颗粒充分分散不粘联。2.根据权利要求1所述的含有大颗粒谷物的皱盖假芝发酵培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，大颗粒谷物为为高粱或大麦。3.根据权利要求1所述的含有大颗粒谷物的皱盖假芝发酵培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，营养液配方为:葡萄糖10g/L、蛋白胨5g/L、酵母浸出粉2g/L、磷酸氢二钾 1 g/L、硫酸镁 0.5g/L、pH5.5。4.根据权利要求1所述的韩哟大颗粒谷物的皱盖假芝发酵培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，灭菌时间为30-75min，灭菌条件为121°C、0.1MPa。5.—种含有大颗粒谷物的皱盖假芝发酵培养基，其特征在于，根据权利要求1-4中任一项所述的制作方法制得。
【专利摘要】本发明涉及一种含有大颗粒谷物的皱盖假芝培养基及其制作方法，通过对大颗粒型谷物的预处理，添加适当的营养液，制作出了适合皱盖假芝菌丝体生长的固体发酵培养基，克服了现有技术中皱盖假芝菌丝体不能在大颗粒型谷物原料上正常生长的缺陷，为皱盖假芝固体发酵培养基原料提供了更多的选择，有利于获得更多不同类型的皱盖假芝菌丝体发酵产物。
【IPC分类】C12N1/14, C12R1/645
【公开号】CN105483024
【申请号】CN201510979425
【发明人】张一帆, 夏凤娜, 杨小兵, 谢意珍
【申请人】广东省微生物研究所, 广东粤微食用菌技术有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月22日