或类似功能的元件。下面通过参考附 图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
[0025] 下面结合图1具体描述根据本发明实施例的利用自体肿瘤与正常配对原代细胞筛 选肿瘤药物的方法。
[0026] 如图1所示，根据本发明实施例的利用自体肿瘤与正常配对原代细胞筛选肿瘤药 物的方法具体包括以下步骤：
[0027] S1、提供组织源相同的肿瘤细胞和正常配对的正常原代细胞，并分别对其进行培 养。
[0028] S2、将肿瘤细胞和正常原代细胞分别接种，并将肿瘤细胞和正常原代细胞分别分 为实验组和对照组。
[0029] S3、提供多个针对该肿瘤的备选药物，并将多个备选药物分别对肿瘤细胞和正常 原代细胞的实验组进行加药处理。
[0030] S4、通过ATP生物荧光药效检测方法检测并分析各备选药物对肿瘤细胞和正常原 代细胞的抑制率，初筛得到候选药物。
[0031] S5、将候选药物组作用的肿瘤细胞组和正常原代细胞进行流式凋亡检测，筛选出 候选药物中对肿瘤细胞的抑制率最高且同时对正常细胞的抑制率最低的药物，作为推荐药 物。
[0032] 换言之，根据本发明实施例的利用自体肿瘤与正常配对原代细胞筛选肿瘤药物的 方法是一种基于肿瘤病人〃定制〃的化药筛选模式，该模式首先培养出患者肿瘤组织里的肿 瘤原代细胞和正常细胞组成配对细胞，再对候选化药进行筛选，选出杀伤力最大同时对正 常细胞伤害最小的一组药物。
[0033] 由此，根据本发明实施例的利用自体肿瘤与正常配对原代细胞筛选肿瘤药物的方 法，可以针对不同病人建立不同的药物筛选体系，判定不同肿瘤候选药物的药效，并提供相 应浓度的最佳肿瘤药物，保证在有效杀死肿瘤细胞的同时，最大限度地降低药物对于病人 的副作用。
[0034]根据本发明的一个实施例，步骤S1包括:S11、提供组织源相同的肿瘤细胞和正常 配对的正常原代细胞，并将肿瘤细胞和正常原代细胞分别吹散成单个细胞。
[0035] S12、将肿瘤细胞和正常原代细胞分别加入培养皿内培养。
[0036] S13、定期对肿瘤细胞和正常原代细胞进行观察并拍照，同时进行细胞传代，培养 预定时间后，收集肿瘤细胞和正常原代细胞。
[0037]其中，在步骤S12中，肿瘤细胞和正常原代细胞的培养温度为36.5°C_37.5°C，二氧 化碳浓度为4%-6%，优选地，在步骤S13中，预定时间为5-7天，优选为6天。
[0038]由此，通过该步骤可以收集到需要的肿瘤细胞和正常原代细胞。
[0039]在本发明的一些【具体实施方式】中，步骤S1还包括:S14、将收集的肿瘤细胞和正常 原代细胞部分冻存。
[0040]也就是说，在本申请中，除了将一部分肿瘤细胞和正常原代细胞用于进行药物筛 选之外，还将一部分肿瘤细胞和正常原代细胞进行冷冻保存，冷冻保存的细胞在必要时可 以复苏，使临床医生考虑用新药物、DC-CIK治疗、CAR-T细胞治疗、基因治疗等新方案时，月中 瘤原代细胞可作为最原始材料(作为抗原刺激物或者找突变基因位点材料)和最科学也是 对各种治疗方案药效最直接的检验工具。
[0041 ]根据本发明的一个实施例，步骤S2包括:S21、对肿瘤细胞进行精密度检测和敏感 度测试，筛选出满足药物筛选要求的肿瘤细胞，并确定肿瘤细胞的正式接种数。
[0042] S22、将肿瘤细胞和正常原代细胞分别按照正式接种数接种在96孔板上，并将肿瘤 细胞和正常原代细胞分别分为实验组和对照组。
[0043] 具体地，步骤S21包括：
[0044] S211、将肿瘤细胞分为低数目组、中数目组和高数目组并分别接种，其中，低数目 组的肿瘤细胞数为400-600,中数目组的肿瘤细胞数为9000-11000,高数目组的肿瘤细胞数 大于40000。
[0045] S212、培养预定时间后，分别测定低数目组、中数目组和高数目组的RLU值，选择 RLU平均值>400000的最低肿瘤细胞数作为正式接种数。
[0046] 换言之，在对肿瘤细胞组和正常原代细胞进行药物筛选之前，还需要对肿瘤细胞 进行精密度检测和敏感度测试，从而筛选出满足药物筛选要求的肿瘤细胞，并且确定细胞 的接种数，由此可以衡量培养出的肿瘤细胞是否满足药物筛选的要求，为之后的药物筛选 结果提供更有力的依据。
[0047] 在本发明的一些【具体实施方式】中，步骤S3包括:S31、提供多个备选药物，并将每个 备选药物分别调配成多个浓度。
[0048] S32、将多个浓度的多个备选药物分别对肿瘤细胞和正常原代细胞的实验组进行 加药处理。
[0049] 也就是说，在对肿瘤细胞和正常原代细胞的实验组进行试验时，先筛选出可能对 肿瘤细胞具有抑制作用的多种备选药物，然后将每个备选药物分别调配成多种浓度，并将 每个备选药物的每个浓度分别对肿瘤细胞和正常原代细胞的实验组进行加药处理。由此， 可以进一步提尚试验的准确性。
[0050] 根据本发明的一个实施例，步骤S4包括:S41、提取每个实验组的ATP，利用生物荧 光原理测定ATP含量，结果传输计算机。
[0051] S42、通过软件分析不同浓度的不同备选药物对肿瘤细胞和正常原代细胞的抑制 率，绘制曲线。
[0052] S43、挑选出对肿瘤细胞的抑制率超过60%，同时对正常原代细胞的抑制率低于 50 %的备选药物，初筛得到候选药物及候选药物的浓度。
[0053] 由此，可以筛选出对肿瘤细胞的抑制率相对较高，而对正常原代细胞的抑制率相 对较低的候选药物和相应的候选药物的浓度。
[0054] 进一步地，在本发明的一些【具体实施方式】中，步骤S5包括：
[0055] S51、收集候选药物组作用的肿瘤细胞组和正常原代细胞，每个样本的细胞数为1 X106〇
[0056] S52、将每个样本分别用孵育缓冲液洗涤1次，500-1000r/min离心5min。
[0057] S53、用100ul的标记溶液重悬细胞，室温下避光孵育10-15min。
[0058] S54、500-1000r/min离心5min沉淀细胞，并用孵育缓冲液洗1次。
[0059] S55、将细胞加入荧光溶液，在4°C下孵育20min，避光并保持振动。
[0060] S56、流式细胞仪激发光波长用488nm，用一波长为515nm的通带滤器检测FITC荧 光，另一波长大于560nm的滤器检测PI 〇
[0061 ] S57、筛选出候选药物中对肿瘤细胞的抑制率最高且同时对正常细胞的抑制率最 低的药物，作为推荐药物。
[0062] 由此，根据本发明实施例的筛选方法可以针对不同病人建立不同的药物筛选体 系，判定不同肿瘤候选药物的药效，并提供相应浓度的最佳肿瘤药物，保证在有效杀死肿瘤 细胞的同时，最大限度地降低药物对于病人的副作用。
[0063] 总而言之，根据本发明实施例的利用自体肿瘤与正常配对原代细胞筛选肿瘤药物 的方法利用病人自身的肿瘤和正常配对原代细胞的培养来检测抗癌药物的药效更能直观 的帮助病人选择对其有用的抗癌药物，帮助肿瘤患者有针对性的使用药物。
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