坏死细胞，为(FITC+/PI+);而右下象限为凋亡细胞，显现(FITC+/PI-)。
[0103] 从图4中可以分析得出，200%的5-Fu对于该病人胃癌细胞杀伤效果更好，同时对 于病人正常组织的影响相对较小。
[0104] 综上所述：目前胃癌化疗方案的有效率多为50%左右，约一半患者对初次化疗方 案并不敏感(原发耐药），也有一部分会出现继发耐药。而使用胃癌及正常配对原代细胞的 体外化疗药物敏感试验的开展，对选择敏感化疗药物、实现对肿瘤患者的个体化治疗、减少 盲目性和耐药的发生具有极其重要的临床意义。本发明与以往的体外试验相比，该技术重 复性强，易标准化，标本的可评估率尚。
[0105] 在本说明书的描述中，参考术语〃一个实施例〃、〃一些实施例〃、〃示例〃、〃具体示 例〃、或〃一些示例〃等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特 点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不 一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何 的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
[0106] 尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例 性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨 的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
【主权项】
1. 一种利用自体肿瘤与正常配对原代细胞筛选肿瘤药物的方法，其特征在于，包括以 下步骤： 51、 提供组织源相同的肿瘤细胞和正常配对的正常原代细胞，并分别对其进行培养； 52、 将所述肿瘤细胞和所述正常原代细胞分别接种，并将所述肿瘤细胞和所述正常原 代细胞分别分为实验组和对照组； 53、 提供多个针对该肿瘤的备选药物，并将多个所述备选药物分别对所述肿瘤细胞和 所述正常原代细胞的实验组进行加药处理； 54、 通过ATP生物荧光药效检测方法检测并分析各备选药物对所述肿瘤细胞和所述正 常原代细胞的抑制率，初筛得到候选药物； 55、 将候选药物组作用的所述肿瘤细胞组和所述正常原代细胞进行流式凋亡检测，筛 选出所述候选药物中对所述肿瘤细胞的抑制率最高且同时对所述正常细胞的抑制率最低 的药物，作为临床推荐药物。2. 根据权利要求1所述的利用自体肿瘤与正常配对原代细胞筛选肿瘤药物的方法，其 特征在于，所述步骤S1包括： 511、 提供组织源相同的肿瘤细胞和正常配对的正常原代细胞，并将所述肿瘤细胞和所 述正常原代细胞分别吹散成单个细胞； 512、 将所述肿瘤细胞和所述正常原代细胞分别加入培养皿内培养； 513、 定期对所述肿瘤细胞和所述正常原代细胞进行观察并拍照，同时进行细胞传代， 培养预定时间后，收集所述肿瘤细胞和所述正常原代细胞。3. 根据权利要求2所述的利用自体肿瘤与正常配对原代细胞筛选肿瘤药物的方法，其 特征在于，在所述步骤S12中，所述肿瘤细胞和所述正常原代细胞的培养温度为36.5°C_ 37.5°C，二氧化碳浓度为4 % -6 %。4. 根据权利要求2所述的利用自体肿瘤与正常配对原代细胞筛选肿瘤药物的方法，其 特征在于，在所述步骤S13中，所述预定时间为5-7天。5. 根据权利要求2所述的利用自体肿瘤与正常配对原代细胞筛选肿瘤药物的方法，其 特征在于，所述步骤S1还包括： 514、 将收集的所述肿瘤细胞和所述正常原代细胞部分冻存。6. 根据权利要求1所述的利用自体肿瘤与正常配对原代细胞筛选肿瘤药物的方法，其 特征在于，所述步骤S2包括： 521、 对所述肿瘤细胞进行精密度检测和敏感度测试，筛选出满足药物筛选要求的所述 肿瘤细胞，并确定所述肿瘤细胞的正式接种数； 522、 将所述肿瘤细胞和所述正常原代细胞分别按照正式接种数接种在96孔板上，并将 所述肿瘤细胞和所述正常原代细胞分别分为实验组和对照组。7. 根据权利要求6所述的利用自体肿瘤与正常配对原代细胞筛选肿瘤药物的方法，其 特征在于，所述步骤S21包括： 5211、 将所述肿瘤细胞分为低数目组、中数目组和高数目组并分别接种，其中，所述低 数目组的肿瘤细胞数为400-600，所述中数目组的肿瘤细胞数为9000-11000，所述高数目组 的肿瘤细胞数大于40000; 5212、 培养预定时间后，分别测定所述低数目组、中数目组和高数目组的RLU值，选择 RLU平均值>400000的最低肿瘤细胞数作为正式接种数。8. 根据权利要求1所述的利用自体肿瘤与正常配对原代细胞筛选肿瘤药物的方法，其 特征在于，所述步骤S3包括： 531、 提供多个备选药物，并将每个所述备选药物分别调配成多个浓度； 532、 将多个浓度的多个所述备选药物分别对所述肿瘤细胞和所述正常原代细胞的实 验组进行加药处理。9. 根据权利要求1所述的利用自体肿瘤与正常配对原代细胞筛选肿瘤药物的方法，其 特征在于，所述步骤S4包括： 541、 提取每个实验组的ATP，利用生物荧光原理测定ATP含量，结果传输计算机； 542、 通过软件分析不同浓度的不同备选药物对所述肿瘤细胞和所述正常原代细胞的 抑制率，绘制曲线； 543、 挑选出对所述肿瘤细胞的抑制率超过60%，同时对所述正常原代细胞的抑制率低 于50%的备选药物，初筛得到候选药物及候选药物的浓度。10. 根据权利要求1所述的利用自体肿瘤与正常配对原代细胞筛选肿瘤药物的方法，其 特征在于，所述步骤S5包括： 551、 收集候选药物组作用的所述肿瘤细胞组和所述正常原代细胞，每个样本的细胞数 为lxlO6; 552、 将每个所述样本分别用孵育缓冲液洗涤1次，500-1000r/min离心5min; 553、 用100ul的标记溶液重悬细胞，室温下避光孵育10-15min; 554、 500-1000r/min离心5min沉淀细胞，并用孵育缓冲液洗1次； 555、 将细胞加入荧光溶液，在4°C下孵育20min，避光并保持振动； 556、 流式细胞仪激发光波长用488nm，用一波长为515nm的通带滤器检测FITC荧光，另 一波长大于560nm的滤器检测PI; 557、 筛选出所述候选药物中对所述肿瘤细胞的抑制率最高且同时对所述正常细胞的 抑制率最低的药物，作为临床推荐药物。
【专利摘要】本发明公开了一种利用自体肿瘤与正常配对原代细胞筛选肿瘤药物的方法，包括S1、提供组织源相同的肿瘤细胞和正常配对的正常原代细胞，并分别对其进行培养；S2、将肿瘤细胞和正常原代细胞分别接种，并将肿瘤细胞和正常原代细胞分别分为实验组和对照组；S3、提供多个针对该肿瘤的备选药物，并将多个备选药物分别对肿瘤细胞和正常原代细胞的实验组进行加药处理；S4、通过ATP生物荧光药效检测方法检测并分析各备选药物对肿瘤细胞和正常原代细胞的抑制率，初筛得到候选药物；S5、将候选药物组作用的肿瘤细胞组和正常原代细胞进行流式凋亡检测，筛选出候选药物中对肿瘤细胞的抑制率最高且同时对正常细胞的抑制率最低的药物，作为临床推荐药物。
【IPC分类】C12Q1/02
【公开号】CN105524973
【申请号】CN201610146330
【发明人】齐来俊
【申请人】南京华奥生物医药技术有限公司
【公开日】2016年4月27日
【申请日】2016年3月15日