罐内种 子培养基的2%，然后盖好罐上的接种帽，通过无菌通风培养制得种子罐菌种液。
[0016] 其中，发酵液制备步骤:将发酵设备的管道、无菌空气过滤系统进行灭菌处理;其 中通风量每100公斤培养液每分钟通入氮气0.1立方米，通入时间为3小时，发酵罐培养:种 子罐培养基配方中各组分的重量百分比为:核桃仁2.5%、花生仁2.5%、酪蛋白酸钠0.3%、L一 精氨酸〇. 3%、磷酸氢二钾0.2%、番茄粉0.2%、卷心菜粉0.1%、牛肉膏0.5%、酵母浸粉0.2%、蛋 白胨1%、丁酸钙0.5%、快速渗透剂T 0.2%、柠檬酸胺0.2%、丝氨酸0.1%、葡萄糖酸0.6%、氯化 钠0.3%、乳糖2%、葡萄糖2%、乙酸钠0.7%、可溶性淀粉0.2%、无水氯化钙0.1%、50万单位脂肪 酶1%、10万单位无花果酶1%、聚醚消泡剂0. 1%、自来水83.2%，PH自然；制备发酵罐培养基： 首先将所述发酵罐培养基配方中的水投入到经灭菌处理的发酵罐中，然后开动搅拌机，结 束向搅拌罐中加入核桃仁、花生仁、酪蛋白酸奶和无水氯化钙进行搅拌并过滤收集浆液，将 浆液加热至53°C ~57°C后在搅拌下加入脂肪酶进行酶解后再加入无花果酶进行酶解得到 酶解液，将所述的酶解液和余量的水投入至灭菌的发酵罐并加入余量的原料进行搅拌，转 速为80-140转/每分钟，经过高温灭菌及降温处理后，PH值自然，发酵30-40小时。
[0017] 得到发酵罐培养基;制备诱导液:将丁酸钙、快速渗透剂T、乳糖放至20kg中的自来 水中进行搅拌溶化后得到诱导液;接种:通过差压法将种子罐菌种送至发酵罐中，将所述发 酵罐培养基接入种子罐菌中，其中接种量是每l〇〇kg发酵罐培养基接入种子罐菌种8kg，并 在接种过程中加入诱导液进行诱导，得到发酵液;收集湿菌泥:开动管式离心机，调整转速 8000转/分钟，以每分钟进料20公斤的进料速度进行例行，弃上清，收集湿菌泥。然后进行二 次离心，转速为13000/分钟，弃上清，收集湿菌泥。其中，无菌空气用量为每100公斤种子培 养基每分钟用无菌空气0.05立方，PH值自然，搅拌速度80-180转/每分钟，罐压0.05兆帕，温 度31-37°C，培养时间20~24小时。
[0018] 进一步的，制备试管培养基过程中的酶解液和制备一级种子培养液过程中的酶解 液的制备是通过过滤后的浆液中加入50万单位的脂肪酶10g酶解10~30分钟，再加入10万单 位的无花果酶l〇g酶解20~70分钟得到。
[0019] 进一步的，制备种子培养基过程中酶解液和制备发酵罐培养基过程中酶解液的制 备是通过过滤后浆液中加入50万单位的脂肪1000g，酶解10~40分钟，再加入10万单位的无 花果酶1000g，酶解20~70分钟得到。
[0020] 进一步的，混合发酵菌的形式包括囊剂、粉剂、片剂、膏剂、液体、奶制品，其中粉剂 包括用无菌粉碎机将冻干料粉碎成细度为80目的粉菌;囊剂的复配包括将冻干料粉碎成细 度为80目的菌粉10g，与代谢物干燥粉15g、微晶纤维素20g、硅胶粉20g、乳糖10g，硬脂酸镁 15g、L-谷氨酰胺10g放入固体搅拌混合机中混合均匀，在无菌条件下分装入胶囊;膏剂包括 粉菌进行低温浓缩后的膏状物。
[0021] 其中，双歧杆菌乳酸菌混合发酵菌可以运用在农作物的培育中，将双歧杆菌乳酸 菌混合发酵菌按1:3000倍稀释后喷施在黄瓜、茄子的开花到收获的生长过程;可将双歧杆 菌乳酸菌混合发酵菌按1:5000倍的稀释后浇灌于果树的根本。
[0022] 有益效果:通过本发明制备出的双歧杆菌混合菌具有菌的活性高、活菌收率高，保 质期时间长，最大程度的使双歧杆菌产生更多的有效物质，避免了双歧杆菌受到氧气、水 分、光线、保护基质等条件的影响，可以运用在人体、禽畜、蔬菜以及水果的保健、生长上，在 人体上可用于便秘、腹泻、腹痛等肠道紊乱综合症，胃肠道炎、预防癌症、预防治疗结肠炎、 食欲不振、消化不良、营养吸收差，纠正儿童偏食、厌食等病症;改善脂肪代谢紊乱，防止动 脉硬化和高血压，预防调节肥胖、减肥等效果，还可提高人体免疫力、缓解失眠等亚健康状 态，提高钙、磷、铁的吸收利用率、促进铁和维生素 D的吸收，清除人体自由基、抗衰老、延缓 肌肤老化等;在禽畜上防止仔猪腹泻，有效改善猪的消化机能，降低猪肉中胆固醇含量，提 高瘦肉率，日增重明显，减少猪的死亡率，降低饲养成本;还可提高肉鸡的出肉率，腹泻明显 下降，减少死淘率，达到提前出栏的效果，减少蛋鸡死亡率，延长产蛋高峰期，提高产蛋率， 减少蛋的破损率，提高鸡体的自身抗病能力，减少抗生素用量，增加动物的抗应激性;在蔬 菜上该产品可改善作物营养，增殖作物根际有益菌，激活植物细胞，提高光合作用和抗逆性 能力，减少虫害，增产增收;在水果上具有缩短果实成熟期，达到提前上市，增强了果树的抗 病能力，成品苹果保质期长，含糖高，汁多，口感好，增产显著。
【具体实施方式】
[0023] 实施例1 制备扩大菌种液 培养基的配制：核桃仁10克、花生仁10克、酪蛋白酸钠5克、L一精氨酸3克、番茄粉3 克、牛肉膏6克、酵母浸粉2克、蛋白胨5克、柠檬酸胺0.1克、丝氨酸0.6克、氯化钠3克、 乳糖5克、葡萄糖8克、乙酸钠8克、无水氯化钙0.1克、磷酸氢二钾3.2克、50万单位脂肪酶10 克、10万单位无花果酶10克、自来水1 〇〇〇毫升，PH自然。
[0024]操作:原料的预处理： 先取配方中的水300毫升，放入研磨机中，然后放入核桃仁、花生仁、酪蛋白酸钠、无水 氯化钙，然后开动研磨机将其打成浆状，过滤弃渣收集浆液，然后再将配方中剩余的水，加 入到浆液中，将浆液加热至55°C±2°C，在搅拌下加入50万单位的脂肪酶10克酶解10分钟， 再加入10万单位的无花果酶10克酶解30分钟即可得到酶解液;然后向酶解液中加入配方中 的其它原料，搅拌溶化分装于25X200的试管中，每支试管装20毫升，用硅胶塞牛皮纸封口， 放入医用消毒器中0.1 - 0.14兆帕灭菌20分钟，培养基灭菌完毕，得到试管培养基。
[0025]接种:在无菌条件下，分别打开购进的冻干管菌种，因用的是4株菌种，在此须分别 接种培养，然后分别向每个开启的冻干管中加入以上灭好菌的试管培养基1毫升，摇动溶化 备用，得到冻干管菌悬液，然后取以上灭好菌的试管培养基4支，再将以上溶化好的冻干管 菌悬液各取1毫升分别加入到4支试管中，用胶塞，外用保鲜膜、牛皮纸包扎，保持不透气状 态，放入摇床上震荡培养，以180-190转/分钟，温度37°C的条件下培育36小时即可，此称为 扩大菌种液。
[0026] 实施例2 制备一级种子培养液 配方:核桃仁20克、花生仁20克、酪蛋白酸钠10克、L一精氨酸5克、番茄粉6克、牛肉膏8 克、酵母浸粉3克、蛋白胨3克、柠檬酸胺0.15克、丝氨酸0.8克、葡萄糖酸0.4克、氯化钠3克、 乳糖10克、葡萄糖15克、乙酸钠6克、无水氯化钙0.1克、磷酸氢二钾2克、50万单位脂肪酶10 克、10万单位无花果酶10克、自来水1 〇〇〇毫升，PH自然。
[0027]操作：原料的预处理：首先取配方中的水600毫升，放入研磨机中，然后加入核桃 仁、花生仁、酪蛋白酸钠、无水氯化钙，然后开动研磨机将其打成浆状，过滤弃渣收集浆液， 然后将配方中剩余的水加入到浆液中，将浆液加热至55°C ± 2°C，在搅拌下加入50万单位的 脂肪酶10克、酶解20分钟，再加入10万单位的无花果酶10克，酶解60分钟即可，此称为酶解 液，然后向酶解液中加入配方中的其它原料，搅拌溶化备用，得到一级种子培养液。
[0028] 实施例3 制备一级菌种液 将一级种子培养液按用量分装于三角瓶中，然后用八层纱布外加二层牛皮纸扎好瓶 口，放入医用消毒器中灭菌，灭菌前首先打开消毒器上的排气阀门，等有少量蒸汽排出时关 闭。当消毒器上的压力达到〇 .05兆帕时，打开排气阀门排气6-8分钟，然后关闭排气阀门， 继续加温，当压力达到0.1-0.14兆帕时，保持25分钟即可，灭菌完毕后离开加热源，让其自 然降温，当压力表归零时，打开消毒器，取出灭好菌的三角瓶培养基放超净工作台中让其自 然降温到37°C，然后将以上培养好的扩大菌种液分别加入到三角瓶灭好菌的培养基中。接 种分别是4%、即一级种子培养液100毫升、加入扩大菌种液4毫升，完毕后用无菌保鲜膜及牛 皮纸密封三角瓶口，不要透气，然后放摇床上，150转/分钟，37°C，培育24小时即可，得到一 级菌种液。
[0029] 实施例4 种子罐菌种培养 配方:核桃仁1.5%、花生仁1.5%、酪蛋白酸钠0.2%、L一精氨酸0.3%、番茄粉0.2%、牛肉 膏0.4%、蛋白胨0.2%、丁酸钙0.5%、柠檬酸胺0.02%、丝氨酸0.04%、葡萄糖酸0.5%、氯化钠 0.3%、乳糖0.5%、葡萄糖1%、乙酸钠0.3%、无水氯化钙0.03%、可溶性淀粉0.3%、50万单位脂 肪酶1%、10万单位无花果酶1%、磷酸氢二钾0.2%、聚醚消泡剂0.01%、自来水90%，PH自然。
[0030] 操作:原料的预处理;首先，取配方中的水20公斤，放入研磨机中，然后加入配方中 的核桃仁、花生仁及酪蛋白酸钠、无水氯化钙，开动研磨机将其打成浆状，过滤弃渣收集浆 液，将浆液加热至55°C±2°C，在搅拌下加入50万单位的脂肪酶1000克，酶解10分钟，然后再 加入10万单位的无花果酶1000克，酶解30分钟即可，此称为酶解液。
[0031] 将配方中余下的水及酶解液投入到已空罐灭好菌的种子罐中，开动搅拌机，加入 配方中所需要的原料，然后在不停地搅拌下通入蒸汽加温，首先利用罐夹