红掌SOC转录因子AaSOC及其编码基因与应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种来源于红掌的一个SOC转录因子AaSOC及其编码基因与应用方法。
【背景技术】
[0002]红掌(Anthurium andraeanum)是世界性盆栽和鲜切花花奔。在我国高档盆花种植中占有相当重要的地位。然而，同其他大宗花卉一样，我国在红掌育种上也是出于较为落后的阶段，主要是因为我们没有掌握足够的种质资源。
[0003]不管是杂交育种还是转基因等生物技术育种，育种时间的缩短对于育种价值不言而喻。红掌分子育种刚刚起步，调控花期的众多转录因子尚未被发掘，
SOC类转录因子在不同物种上均具有显著的促进幼苗开花的功能，为了更好的研究红掌本身该类基因的功能以及培育极早开花的转基因红掌，十分有必要获得红掌自身的SOC类基因资源，本发明既可在红掌中应用，也可以在其他物种，例如烟草等植物中显著缩短育种年限，使转基因植株极早开花。
【发明内容】
[0004]为了克服现有技术的不足，本发明目的是提供来红掌SOC转录因子AaSOC及其编码基因与应用。
[0005]一种红掌SOC转录因子AaSOC，所述转录因子AaSOC的完整预测氨基酸序列如SEQID NO:1所示；编码基因如SEQ ID NO:2所示。
[0006]进一步包括至少90%同源且具有相同功能的所述转录因子AaSOC的衍生物，所述的衍生物包括氨基酸序列或核酸序列。
[0007]—种含有所述红掌SOC转录因子AaSOC的编码基因的重组载体。
[0008]—种含有所述的重组载体的重组基因工程菌。
[0009]—种根据所述的重组载体的重组基因工程菌的构建方法，构建含有转录因子AaSOC的编码基因的重组载体，将所述重组载体转化至农杆菌菌株EHA105中，获得的重组基因工程菌进行诱导培养，培养液分离纯化获得含有转录因子AaSOC的编码基因的重组基因工程菌的菌体细胞。
[0010]一种根据所述的红掌SOC转录因子AaSOC的应用，通过过量表达，促进转化株提早开花。
[0011]与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在:本发明首次从红掌中克隆SOC类调控花期的转录因子，即AaSOC;本发明通过与拟南芥等不同物种同类SOC转录因子序列比对，发现其序列具有保守性;通过转基因实验，发现该基因具有明显的促进转化株提早开花的能力，证明其是一个非常有应用价值的转录因子。
[0012]本发明提供的技术方案，对于研究红掌开花机理、培育矮化、早花品种，意义重大。【附图说明】
[0013]图1是红掌转录因子AaSOC与其他物种同源基因的多序列比对结果；
图2是超量表达红掌转录因子AaSOC导致转基因烟草显著提早开花的实物照片，其中A部分为转基因烟草(左1、2)与对照开花时间和植株长势之比较。B、C部分为转基因烟草现蕾初期生长表现。
【具体实施方式】
[0014]本发明提供一种红掌SOC转录因子AaSOC，所述转录因子AaSOC的完整预测氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。通过超量表达证明该转录因子具有促进植物提前开花的功能，这对红掌本身，亦或是其他物种而言，都是一个重要的培育早花性状的基因资源。
[0015]由于氨基酸序列的特殊性，任何含有SEQID NO:1所示氨基酸序列的肽蛋白的片段或其变体，如其保守性变体、生物活性片段或衍生物，只要该肽蛋白的片段或肽蛋白变体与前述氨基酸序列同源性在90%以上，均属于本发明保护范围之列。具体的所述改变可包括氨基酸序列中氨基酸的缺失、插入或替换;其中，对于变体的保守性改变，所替换的氨基酸具有与原氨基酸相似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸，变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。
[0016]本发明还涉及所述转录因子AaSOC的编码基因，所述转录因子AaSOC的编码基因具有SEQ ID N0:2所示核苷酸序列90%以上同源性，优选所述转录因子AaSOC的编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:2所示。由于核苷酸序列的特殊性，任何如SEQ ID NO:2所示多核苷酸的变体，只要其与该多核苷酸具有90%以上同源性，均属于本发明保护范围之列。所述多核苷酸的变体是指一种具有一个或多个核苷酸改变的多核苷酸序列。此多核苷酸的变体可以使生的变位变异体或非生的变异体，包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个多核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的肽蛋白的功能。
[0017]本发明涉及含有所述转录因子AaSOC的编码基因的载体。
[0018]本发明还涉及一种含有所述转录因子AaSOC的编码基因的重组基因工程菌。所述重组基因工程菌的构建方法为:构建含有转录因子AaSOC的编码基因的重组载体，将所述重组载体转化至农杆菌菌株EHA105中，获得的重组基因工程菌进行诱导培养，培养液分离纯化获得含有转录因子AaSOC的编码基因的重组基因工程菌的菌体细胞。
[0019]本发明还提供所述转录因子AaSOC的编码基因在培育极早开花的植物中的应用。
[0020]本发明的要点之一在于提供了SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列和SEQ ID N0:2所示的核苷酸序列。
[0021]本发明所提供的转录因子AaSOC是从红掌中获得的，它属于具有显著促进早花功能的众多转录因子家族中的一员。通过反转录RT-PCR，获得了该基因的完整编码框，随后构建超量表达载体并异源转化烟草，发现该转录因子具有明显的促进转基因植物提早开花结果的能力。
[0022]本发明进行基因信息克隆的技术手段为同源克隆技术和RACE技术，这是公开已久的基础手段。但是我们的创新与申请保护之处却是围绕AaSOC转录因子所使用和获得的核苷酸与氨基酸序列信息。
[0023]下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此:
实施例1来源于红掌的转录因子AaSOC的获得
于2014年8月取6年生红掌品种“阿拉巴马”的幼嫩荀片和叶片为材料，采用Invitrogen公司生产的Trizol试剂提取总RNA，然后使用Promega公司生产的反转录试剂盒对总RNA进行处理、反转录合成cDNA，以此为模板。采用同源克隆法，设计保守的兼并引物对Pl-TCTCCCCGCGCGGCAAGCCSEQ ID N0:3)，，P2-GAATAATTGATTCTTCTCSEQ ID N0:4)，用上述模板进行扩增，该反应程序为95 0C I min, 94 °C50 s, 57 °C 30 s, 72 °C 45 s, 36个循环，72 0C5 min，所用试剂(LATaq酶)均购自大连宝生物公司，扩增体系:LAtaq酶(5 U/μΙ)0.5 yl?10 XLAtaq buffer Π 5 yl，dNTP mixture 8 μ??template I μ1，ΡΙ I μ1，Ρ2 I μ1，灭菌蒸馏水32.5 μ I。经过PCR扩增获得296 bp的中间片段。
[0024]以上述PCR扩增获得296bp的中间片段为参考，设计3’ RACE和5’RACE引物；以红掌幼嫩花芽为组织材料，按照述方法提取