容器收纳体的制作方法_3

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液离子(离子半径较大的I价阴离子)使疏水性分子的水溶性增加的作用,并有助于核酸向固相载体吸附,则不特别限定。具体而言,例举有盐酸胍、碘化钠、高氯酸钠等,这些物质中,优选蛋白质变质作用较强的硫氰酸胍或者盐酸胍。这些离液物质的使用浓度因各物质而不同,例如在使用硫氰酸胍的情况下,优选在3M?5.5M的范围内使用,在使用盐酸胍的情况下,优选在5M以上使用。
[0109]由于离液物质存在于水溶液中,从而对于水溶液中的核酸而言,与被水分子包围而存在相比,吸附于固体而存在在热力学上更为有利,所以吸附于磁珠30的表面。
[0110]3-1-3.清洗液
[0111]第一清洗液?第三清洗液12、14、16对结合有核酸的磁珠30进行清洗。
[0112]第一清洗液12是与第一油20以及第二油22均相分离的液体。优选第一清洗液12为水或低盐浓度水溶液,在为低盐浓度水溶液的情况下,优选为缓冲液。优选低盐浓度水溶液的盐浓度为10mM以下,更加优选为50mM以下,最优选为1mM以下。另外,第一清洗液12也可以含有上述那样的表面活性剂,pH并不特别限定。用于使第一清洗液12为缓冲液的盐并不特别限定,但优选TRIS、HEPES, PIPES、磷酸等的盐。并且,优选第一清洗液12含有不阻碍核酸向载体的吸附、逆转录反应、PCR反应等的量的醇。在这种情况下,醇浓度并不特别限定。
[0113]此外,也可以使第一清洗液12含有离液物质。例如,若使第一清洗液12含有盐酸胍,则能够维持或强化吸附于磁珠30等的核酸的吸附并且能够清洗磁珠30等。
[0114]第二清洗液14是与第二油22以及第三油24均相分离的液体。第二清洗液14可以基本上与第一清洗液12相同,也可以为与第一清洗液12不同的组成,但是优选为事实上不含有离液物质的溶液。是为了不向之后的溶液带入离液物质。作为第二清洗液14,例如也可以由5mM TRIS盐酸缓冲液构成。如上所述,优选第二清洗液14含有醇。
[0115]第三清洗液16是与第三油24以及第四油26均相分离的液体。第三清洗液16可以基本上与第二清洗液14相同,也可以为与第二清洗液14不同的组成,但是不含有醇。另夕卜,为了防止将醇带入反应容器400,第三清洗液16能够含有枸橼酸。
[0116]3-1-4.磁珠
[0117]磁珠30是吸附核酸的珠子,为了能够利用位于容器组装体I之外的磁铁3而移动,优选具有比较强的磁性。磁珠30例如也可以是二氧化硅珠子或涂覆有二氧化硅的珠子。磁珠30也可以优选为涂覆有二氧化硅的珠子。
[0118]3-1-5.溶出液
[0119]溶出液32是与第四油26相分离的液体,在溶出容器300中的流路2内作为被第四油26、26夹持的塞子而存在。溶出液32是使吸附于磁珠30的核酸从磁珠30溶出至溶出液32中的液体。另外,溶出液32通过加热在第四油26中成为液滴。溶出液32例如能够使用纯水。这里,“液滴”是指被自由表面包围的液体。
[0120]3-1-6.试剂
[0121]试剂34含有反应所需要的成分。试剂34在反应容器400中的反应为PCR的情况下,能够含有用于对溶出至溶出液的液滴36(参照图8)之中的靶核酸(DNA)进行扩增的DNA聚合酶等酶以及引物(核酸)、与用于检测扩增产物的荧光探针中的至少一个,这里含有引物、酶以及荧光探针中的全部。试剂34与第四油26不相溶,试剂34若与包含核酸的溶出液32的液滴36接触,则溶解发生反应,试剂34在反应容器400内的流路2的重力方向的最下部的区域以固体状态存在。例如,试剂34能够使用冷冻干燥(freeze dry) 了的试剂。
[0122]3-2.容器组装体的操作
[0123]作为容器组装体I的操作的一个例子,使用图7以及图8进行说明。
[0124]容器组装体I的操作包括如下工序:
[0125](A)将吸附容器100、清洗容器200、溶出容器300以及反应容器400接合从而组装容器组装体I的工序;
[0126](B)将含有核酸的样品导入收容有吸附液10的吸附容器100的工序;
[0127](C)从第二清洗容器220向吸附容器100移动磁珠30的工序;
[0128](D)摆动吸附容器100使核酸吸附于磁珠30的工序;
[0129](E)使吸附有核酸的磁珠30从吸附容器100依次通过第一油20、第一清洗液12、第二油22、第二清洗液14、第三油24、第三清洗液16以及第四油26而向溶出容器300移动的工序;
[0130](F)在溶出容器300内使核酸从磁珠30溶出至溶出液32的工序;以及
[0131](G)使包含核酸的液滴与反应容器400内的试剂34接触的工序。
[0132]以下,依次对各工序进行说明。
[0133](A)组装容器组装体I的工序
[0134]如图7(a)所示,在组装工序中,以从吸附容器100接合至反应容器400从而形成从吸附容器100连续至反应容器400的流路2的方式组装容器组装体I。此外,在图7(a)中,吸附容器100安装有盖110,但将盖110安装于柱塞部130是在(B)工序之后进行的。
[0135]更具体而言,向反应容器400的反应接收部404插入溶出容器300的溶出插入部302,向溶出容器300的溶出接收部304插入第三清洗容器230的第三插入部232,向第三清洗容器230的第三接收部234插入第二清洗容器220的第二插入部222,向第二清洗容器220的第二接收部224插入第一清洗容器210的第一插入部212,向第一清洗容器210的第一接收部214插入吸附容器100的吸附插入部122。
[0136](B)导入样品的工序
[0137]在导入工序中,例如将附着有样品的棉棒从吸附容器100的安装盖110的开口插入吸附液10之中,将该棉棒浸渍于吸附液10之中而进行。更具体而言,将棉棒从吸附容器100的位于插入注射部120状态下的柱塞部130的一侧的端部的开口插入。接下来,将棉棒从吸附容器100取出,并且安装盖110。这是图7(a)的状态。另外,样品也可以利用移液管等向吸附容器100导入。另外,若样品为糊状、固体状,例如也可以利用匙、镊子等使其附着于柱塞部130的内壁或向吸附容器100投入。如图7(a)所示,在注射部120以及柱塞部130之中,吸附液10填充到中途,但在供盖110安装的开口侧残留有空间。
[0138]在样品中含有成为靶的核酸。以下,有时将其简称为靶核酸。靶核酸例如是DNA和 / 或 RNA (DNA -Deoxyribonucleic Acid、和 / 或 RNA -Ribonucleic Acid)。在将革巴核酸从样品提取出来并溶出至后述的溶出液32之后,例如被用作PCR的铸模。作为样品,能够例举血液、鼻腔粘液、口腔粘膜、其他各种生物体试样等。
[0139](C)移动磁珠的工序
[0140]在移动磁珠30的工序中如下进行:在对如图7 (a)所示那样被第二清洗容器220的第三油24、24夹持而以塞子状存在的磁珠30施加了配置于容器外部的磁铁3的磁力的状态下,使磁铁3朝向吸附容器100移动。
[0141]与该磁珠30的移动相配合、或者比此更早地使盖110以及柱塞部130向从注射部120抽出的方向移动,从而使吸附液10内的样品从柱塞部130内向注射部120内移动。通过该柱塞部130的移动,被前端部134关闭的流路2与吸附液10连通。
[0142]磁珠30随着磁铁3的移动在流路2内上升,如图7 (b)所示,到达存在样品的吸附液10内O
[0143](D)使核酸吸附于磁珠的工序
[0144]使核酸吸附的工序通过使吸附容器100摆动而进行。吸附容器100的开口被盖110封闭使得吸附液10不会泄漏,因此该工序能够高效地进行。通过该工序,靶核酸因离液剂的作用吸附于磁珠30的表面。在该工序中,在磁珠30的表面,也可以吸附除靶核酸以外的核酸、蛋白质。
[0145]作为使吸附容器100摆动的方法,可以使用公知的涡流振动筛等装置,也可以通过操作者的手振荡混合。另外,也可以一边利用磁珠30的磁性从外部施加磁场一边摆动吸附容器100。
[0146](E)移动吸附有核酸的磁珠的工序
[0147]在移动吸附有核酸的磁珠30的工序中,通过一边从吸附容器100、清洗容器200以及溶出容器300的外部施加磁铁3的磁力一边移动磁铁3,从而使磁珠30在吸附液10、第一油?第四油20、22、24、26以及第一清洗液?第三清洗液12、14、16之中移动。
[0148]磁铁3例如能够使用永久磁铁、电磁铁等。另外,磁铁3可以通过操作者的手进行移动,也可以利用机械装置等进行移动。磁珠30具有被磁力吸引的性质,因此利用该性质,使磁铁3相对于吸附容器100、清洗容器200以及溶出容器300的相对配置变化,使磁珠30在流路2内移动。磁珠30通过各清洗液时的速度并不特别限定,也可以使其在同一清洗液内沿流路2的长边方向往复地移动。此外,在使除磁珠30以外的粒子等在管内移动时,例如能够利用重力、电位差来进行移动。
[0149](F)使核酸溶出的工序
[0150]在使核酸溶出的工序中,在溶出容器300内,使核酸从磁珠30溶出至溶出液的液滴36。虽然图7中的溶出液32在溶出容器300的流路的较细部分作为塞子存在,但在如上述那样使磁珠30移动的期间,通过加热反应容器400使内置液膨胀,从而如图8所示那样作为液滴36在溶出容器300内向上方移动。而且,如图8(a)所示,若磁珠30到达溶出容器300的溶出液的液滴36,则吸附于磁珠30的靶核酸因溶出液的作用而溶出至溶出液的液滴36内。
[0151](G)与试剂34接触的工序
[0152]在与试剂34接触的工序中,使包含核酸的液滴36与位于反应容器400内的最下部的试剂34接触。具体而言,如图8(b)所示,通过推动盖110,利用柱塞部130的前端部134将第一油20按下,从而在将施加有磁铁3的磁力的磁珠30维持在规定位置的状态下,使溶出有靶核酸的溶出液的液滴36向反应容器400移动,与位于反应容器400的最下部的试剂34接触。与液滴36接触的试剂34溶解并与溶出液中的靶核酸混合,能够实施例如使用热循环的PCR。
[0153]4.PCR 装置
[0154]使用图9以及图10对使用容器组装体I进行核酸溶出处理和PCR的PCR装置50进行说明。图9是PCR装置50的简要结构图。图10是PCR装置50的框图。
[0155]PCR装置50具有旋转机构60、磁铁移动机构70、推压机构80、荧光测定器55以及控制器90。
[0156]4-1.旋转机构
[0157]旋转机构60包括旋转用马达66和加热器65,通过驱动旋转用马达66使容器组装体I以及加热器65旋转。旋转机构60使容器组装体I和加热器65旋转而上下反转,由此含有靶核酸的液滴在反应容器400的流路内移动,进行热循环处理。
[0158]加热器65包括未图示的多个加热器,例如能够包括溶出用、高温用以及低温用的加热器。溶出用加热器对容器
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