一种培养基、生物转化菌丝体、提取物及用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物制药技术领域，具体设及一种培养基、生物转化菌丝体、提取物及 用途。
【背景技术】
[0002] 血液凝固（blood coagulation)是指血液由流动的液体状态变成不能流动的凝胶 状态的过程，是生理性止血过程的重要环节。血液凝固的实质就是血浆中的可溶性纤维蛋 白原转变成不溶性的纤维蛋白的过程。当形成的纤维蛋白交织成网时，可把血细胞及血液 的其他成分网罗在内，从而形成血凝块。血液凝固是一系列复杂的酶促反应过程，需要多种 凝血因子的参与。凝血酶原的激活是在凝血酶原酶复合物作用下进行的。因此，凝血过程可 分为凝血酶原酶复合物的形成、凝血酶原激活和纤维蛋白生成Ξ个基本过程。凝血酶原酶 复合物的形成有内源性凝血和外源性凝血两条途径。
[0003] 内源性凝血途径，当血液与带负电荷的胶原蛋白（皮肤血管外壁)或异体表面(如 高岭±、玻璃等)接触时，因子Μ就由酶原激活成Ma，后者除能激活因子XI外，又同时使血 浆前缓激肤释放酶激活。激活后的激肤释放酶在高分子量激肤原的促进下反过来又进一步 使因子Μ激活，但此时不再是接触激活而是肤键水解激活，使成为因子Mf。运是一正反馈 效应，不论Ma或Mf都具有相同的活力。激活后的Ma在化存在下接着又使因子Κ激活。活 化的因子Ka在Ca2+与憐脂存在下与因子Μ形成复合物，使因子X激活为因子Xa。激活后的 因子X与化2+、憐脂及因子V共同形成一复合物，后者最终使凝血酶原激活为凝血酶。活化 的凝血酶能使可溶性纤维蛋白原转变成不溶性的纤维蛋白。本次采用的体外试管法测定凝 血活性，原理也即家兔全血接触玻璃试管后，启动内源性凝血通路，最终导致血凝块的形 成。
[0004] 外源性凝血途径，体内组织损伤时释放出因子虹，也称为组织因子。在化存在下 它能与血液中已活化的因子Μ形成复合物，就能使因子X激活，此后就与内源性激活途径 的反应步骤相同。通过外源性途径血液凝固在10多秒钟内即可完成，而通过内源性途径则 需数分钟。
[0005] 银杏叶中含有天然活性黄酬及苦内醋等与人体健康有益的多种成份，具有溶解胆 固醇，扩张血管的作用，对改善脑功能障碍、动脉硬化、高血压、眩晕、耳鸣、头痛、老年痴呆、 记忆力减退等有明显效果。其防病、治病、健身的价值在明代《本草纲目》中早有记载。经国 家卫生部口检测证明：饮用银杏茶可明显降低血清胆固醇、甘油Ξ脂和低密度血脂蛋白，减 少体内胆存脂肪的作用。对于高血脂的调节、高血压和冠屯、病等屯、脑血管系统疾病患者辅 助性防治W及肥胖型人群的减肥等有良好的功效，是预防治疗老年痴呆的理想饮品。是目 前世界公认的治、防屯、脑血管疾病最理想的药物成份。
[0006] 猴头菌丝体中的活性物质最重要的是多糖及糖蛋白，目前国内外对猴头多糖的研 究表明，猴头菌多糖具有多种生物活性和药理作用，能增强巨隧细胞的吞隧功能，促进溶血 素的形成，抗白细胞下降，降血糖、抗凝血、抗血栓、抗突变和抗衰老等。因此，猴头菌多糖备 受人们关注，成为近年来分子生物学、医药、食品科学等领域研究和开发应用的热点。
[0007] 生物转化"菌丝体"是指利用菌丝体(包括真菌）的代谢功能，使有机物分解的生物 化学反应过程。W适宜的培养基为营养，通过菌丝体的生长代谢和生命活动产生丰富的次 生代谢产物。借鉴中医药组方思想，将单味中药、具有类似或协同作用的中药作为部分培养 基进行菌丝体转化，目的是产生新化合物、增强功效或者降低单一药物不良作用。
[0008] 据文献查询，猴头菌丝体未有抗凝血作用。银杏叶敛肺，平喘，活血化疲，止痛，用 于肺虚咳喘，冠屯、病，屯、绞痛，高血脂，抗凝固，有一定概率提高记忆力。
[0009] 中国专利申请号为200710190182.3的专利申请公开了一种猴头菌转化银杏叶提 取物的制备方法及用途，W猴头菌为出发菌株，进行一级种子培养和发酵培养，得到具有降 低血糖的猴头菌发酵液;发酵培养基组成为:葡萄糖10-40g^，教皮l-5g/l，蛋白腺2-lOg/ 1，玉米粉5-20g/l，MgS〇4 · 7出0 0-lg/l和憐酸二氨钟0.1-2g/l，碳酸巧l-10g/l，0.2-5%的 EGB，发酵培养的条件是:溫度为20-35°C，揽拌速率80-200巧m，初始抑为4.0-7.5，通气量 0.1:1-2:1。其用于预防或治疗糖尿病的药物或保健品。
[0010]猴头菌转发银杏叶提取物(EGB化艺条件的研究，食品科学，2007，Vol. 28，No. 10， 公开了猴头菌转化EGB的最适pH为6.0，溫度为27 °C，EGB添加量为0.5 %，无需采用补加工 艺。在20L发酵罐中扩大培养时，猴头菌转化EGB的最佳工艺条件为7化前通气量为化/min， 7化后为4.化/min,转速为12化/min。其发酵培养基(单位:g/L)为:教皮10,玉米粉10,葡萄 糖20，蛋白腺4，憐酸二氨钟1.2，硫酸儀0.6。
[0011] 上述两篇文献中载明的都是猴头菌转化银杏叶提取物的技术，一方面，银杏叶提 取物的价格相比银杏叶更贵，另一方面，转化后得到的产物主要用于降血糖和抑制非酶糖 基化反应。
【发明内容】
[0012] 本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种培养基、生物转化菌丝体、提取物及用 途，所述提取物的制备方法简单，成本较低，产物用于制备抗凝血药物。
[0013] 本发明所述培养基包括如下重量份的组分：
[0014] 麦教490~350份，玉米面140~100份，谷慷63~45份，白糖7~5份，银杏叶300~ 500份，水400~600份。
[0015] 优选的，所述培养基包括如下重量份的组分：
[0016] 麦教420份，玉米面120份，谷慷54份，白糖6份，银杏叶400份，水500份。
[0017] 本发明还提供一种生物转化菌丝体，制备方法为:将猴头菌类菌株接种至所述的 培养基中，在20~27Γ下，猴头菌培育30~40天，烘干，得到生物转化菌丝体。
[0018] 本发明的猴头菌为猴头菌科真菌猴头菌巧ericium e;rinaceum(Bull .ex Fr.) Pers.) 〇
[0019] 所述生物转化菌丝体是猴头菌科真菌猴头菌化ericium e;rinaceum(Bul 1. ex 化.化ers.)的菌丝体与其附生含有银杏叶成份的固体培养基的干燥混合物。
[0020] 本发明还提供一种提取物，制备方法为：
[0021 ] (1)将生物转化菌丝体进行水提，50-70°C下用水浸泡，水的重量为生物转化菌丝 体重量的6~10倍，得到提取液；
[0022] (2)将上述提取液减压浓缩，将减压浓缩所得的浓缩液在50-70°C条件下抽真空干 燥，得到提取物。
[0023] 优选的，水浸泡或抽真空干燥的溫度为60°C。
[0024] 本发明还提供一种提取物在制备抗凝血药物或保健食品中的用途。
[0025] 猴头菌丝体具有较弱抗凝血作用，银杏叶的抗凝血活性在加工过程中大大损失。 猴头菌是一种药用真菌，能很好地吸收培养基中营养，彻底转化培养基，产生新的活性物质 及代谢物，为此，本发明将银杏叶加入到培养基中，并对培养基的组分和含量进行调配，猴 头菌对银杏叶进行中药菌丝体转化，得到新的菌丝体，本发明对所得的生物转化菌丝体进 行提取，得到的提取物进行了体外抗凝血实验，结果发现，水提样品WAPTT为评价指标，体 外抗凝血作用由强到弱为:生物转化菌丝体>银杏叶药材S猴头菌丝体>空白对照，皿转 化物体外抗凝血活性比银杏叶药材高5.548倍;比猴头菌丝体高7.137倍。该生物转化菌丝 体提取物能显著增加凝血活性，具有显著的抗凝血作用，因此可应用于制备抗凝血药物或 保健食品。
[0026] 本发明低溫水浸泡生物转化菌丝体，在50-70°C下水浸泡，无溫度破坏，既能溶解 有效成分但又不破坏有效成分;50-70°C减压浓缩，不会破坏有效成分，特别是活性酶类物 质;为了不影响有关活性物质，本发明优选采用60°C条件下抽真空干燥。
【具体实施方式】
[0027] 实施例1
[0028] -种生物转化菌丝体提取物，其制备方法包括如下步骤：
[0029] (1)取农副产品麦教490g、玉米面140g、谷慷63g、白糖7g，W及中药材银杏叶粗粉 (银杏叶)300g，混匀，加入约500g水拌匀，即得培养基。再装瓶、灭菌，接入猴头菌，在27°C条 件下转化培养40天，取出菌丝体，烘干，即得生物转化菌丝体；
[0030] (2)取生物转化菌丝体，60°C水浸泡2次，每次浸泡2小时，水的重量为生物转化菌 丝体重量的6倍；
[0031] (3)将提取后获得的提取液减压浓缩，将减压浓缩所得的浓缩液在60°C条件下抽 真空干燥，即得提取物。
[0032] 实施例2
[0033] -种生物转化菌丝体提取物，其制备方法包括如下步骤：
[0034] (1)取农副产品麦教420g、玉米面120g、谷慷54g、白糖6g，W及中药材银杏叶粗粉 (银杏叶)400g，混匀，加入约500g水拌匀，即得菌丝体培养基;再装瓶、灭菌，接入猴头菌，在 20°C条件下转化培养35天，取出菌丝体，烘干，即得生物转化菌丝体；
[0035] (2)取生物转化菌丝体，60°C水浸泡3次，每次浸泡3小时，水的重量为生物转化菌 丝体重量的8倍；
[0036] (3)将提取后获得的提取液减压浓缩，将减压浓缩所得的浓缩液在60°C条件下抽 真空干燥，即得提取物。
[0037] 实施例3
[0038] -种生物转化菌丝体提取物，其制备方法包括如下步骤：
[0039] (1)取农副产品麦教350g、玉米面lOOg、谷慷45g、白糖5g，W及中药材银杏叶粗粉 (银杏叶）500g，混匀，加入约500g水拌匀，即得菌丝体培养基;再装瓶、灭菌，接入猴头菌，在 25 Γ条件下转化培养30天，取出菌丝体，烘干，即得生物转化菌丝体；
[0040] (2)取生物转化菌丝体，50°C水浸泡3次，每次浸泡4小时，水的重量为生物转化菌 丝体重量的10倍；
[0041] (3)将提取后获得的提取液减压浓缩，将减压浓缩所得的浓缩液在70°C条件下抽 真空干燥，即得提取物。
[0042] 实施例4
[0043] 银杏叶渗入比例对比试验
[0044] 猴头菌丝体生物转化产业化培养已经很成熟，原料投料W干料计，比率固定为:麦 教70%、玉米粉20%、谷慷9%、白糖1 %，本发明把中药材银杏叶作为培养基之一，中药材银 杏叶参入的比率分别占30%、40%、50 %，设计实验方案，总投料5000g，分别按上述实施例 1、实施例2、实施例3配制培养基，加水混匀、灭菌、接种、培养，平行对照，培养条件完全一 致，培养过程中观察菌丝体生长状况、生长周期、污染情况、生长速度，挖瓶后烘干称重计算 收率，检测样品中的纤维素酶、麦角酱醇含量(考察转化是否彻底）、银杏总黄酬醇巧含量、 祗类内醋含量，干燥后的样品分别标注为狀-1、狀-2、狀-3。试验结果统计如下表：
[0045] ____
[0046] 试验结果表示:银杏叶占50%