三氟甲基吡唑基胍F₁F₀-ATP酶抑制剂及其治疗用图

三氟甲基吡唑基胍F₁F₀-ATP酶抑制剂及其治疗用图
【专利摘要】本发明提供抑制F1F0?ATP酶的三氟甲基吡唑基胍化合物以及使用三氟甲基吡唑基胍化合物作为治疗剂以治疗医学障碍，比如免疫障碍，炎性病症，或癌症的方法。
【专利说明】三氟甲基吡唑基胍Ffo-ATP酶抑制剂及其治疗用途
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2013年12月10日提交的美国临时专利申请序号61/914,085以及2014 年4月15日提交的美国临时专利申请序号61 /979，619的利益以及优先权;其各自的内容通 过援引并入本文。 发明领域
[0003] 本发明提供一酶（例如，线粒酶）的抑制剂和它们的治疗用 途。特别地，本发明提供抑制FiFo-ATP酶的三氟甲基吡唑基胍化合物以及使用三氟甲基吡唑 基胍化合物作为治疗剂治疗许多医学病症的方法。
[0004] 发明背景
[0005] 多细胞生物体发挥对细胞数量的精确控制。在细胞增殖和细胞死亡之间的平衡实 现这种内稳态。细胞死亡经坏死或通过自杀形式的细胞死亡，称为细胞凋亡，发生在几乎每 种类型的脊椎动物细胞中。凋亡由引起共同、基因上的程序性死亡机制的各种胞外或胞内 信号触发。
[0006] 多细胞生物体利用细胞凋亡来指导受损的或不必要的细胞为了生物体的益处而 破坏它们自己。因此，细胞凋亡过程的控制对于正常发育是非常重要的，例如，手指和脚趾 的胚胎发育需要通过细胞凋亡，受控的去除过量的互连组织，正如大脑内神经突触的形成。 类似地，受控的细胞凋亡负责月经开始时子宫（子宫内膜）内衬的脱落。虽然细胞凋亡在组 织雕刻和正常细胞维持中起重要作用，它也是防御威胁生物体健康的细胞和入侵者(例如， 病毒)的初级防御的组成。
[0007] 许多疾病与细胞凋亡的细胞死亡失调有关。已经建立了在异常细胞凋亡的调节和 各种肿瘤、自身免疫和病毒疾病的致病性之间的因果关系模型。例如，在细胞介导的免疫应 答中，效应细胞(例如，细胞毒性T淋巴细胞("CTLs"））通过诱导感染的细胞经历凋亡破坏病 毒感染的细胞。随后，当不再需要效应细胞时，该生物体依赖于细胞凋亡过程破坏效应细 胞。通过CTL在彼此甚至它们本身中诱导细胞凋亡，自身免疫通常被阻止。在该过程中的缺 陷与各种免疫性疾病，比如红斑狼疮和类风湿性关节炎相关。
[0008] 多细胞生物体还利用细胞凋亡指导受损的细胞核酸（例如，DNA)在癌变前破坏其 自身。一些致癌病毒通过重编程感染的(转化的)细胞以中止正常的细胞凋亡过程来克服这 种安全措施。例如，几种人乳头瘤病毒(HPV)已经牵涉通过产生能使p53细胞凋亡启动子失 活的蛋白质（E6)，抑制转化的细胞的细胞凋亡的去除引起宫颈癌。类似地，埃-巴二氏 (Epstein-Barr)病毒(EBV)，单核细胞增多症和伯基特淋巴瘤的病原体，重编程感染的细胞 以产生防止异常细胞的正常细胞凋亡去除的蛋白质，因此，允许癌变的细胞增殖并在生物 体中扩散。
[0009] 还有其他病毒破坏性地操纵细胞的细胞凋亡器而不直接导致癌症发展。例如，在 被人免疫缺陷病毒(HIV)感染的个体中免疫系统的破坏被认为是通过感染的CD4+T细胞(约 1/100,000)，指导未感染的姐妹细胞经历细胞凋亡而发展的。
[0010] 某些由非病毒方式引起的癌症也已经通过细胞凋亡建立起逃避破坏的机制。黑色 素瘤细胞，例如，通过抑制基因编码Apaf-l的表达避免细胞凋亡。其他癌细胞，尤其是肺和 结肠癌细胞，分泌抑制CTL介导的清除异常细胞的引发的高水平可溶性诱饵分子。细胞凋亡 器的错误调节也已经牵涉各种变性病症和血管疾病。
[0011] 细胞凋亡过程及其细胞机制受控的调节对于多细胞生物体的存活是重要的。一般 地，发生在细胞中的生化变化以有序的队列指导经历细胞凋亡发生。但是，如上所示，细胞 凋亡调节缺陷可以导致在生物体中的严重有害影响。
[0012] 存在改进组合物和方法的需求，所述组合物和方法用于在遭受疾病和病症折磨的 受试者中调节细胞凋亡过程，所述疾病和病症的特征在于这些过程(例如，病毒感染，过度 增殖性自身免疫性障碍，慢性炎症病症，和癌症）的错误调节。本发明解决了该需求并提供 了其他相关的优点。
[0013] 发明概述
[0014]本发明提供抑酶（例如，线粒酶）的三氟甲基吡唑基胍化合 物，包含三氟甲基吡唑基胍化合物的药物组合物，以及使用这样的化合物和药物组合物治 疗许多医学病症的方法。本发明部分地涉及发现具有令人惊奇的优异的药物性质的组合 物。例如，令人惊奇的发现化合物3_氯-N_( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5_(二氟甲基)-1Η-Ρ比 唑-3-基）氨基）亚甲基）苯甲酰胺（化合物1)与3-氯-N-(( (3-氯苯基）氨基）（（5-(三氟甲 基)-1Η-吡挫-3-基)氨基）亚甲基)苯甲酰胺(化合物2)相比具有减少的脱革巴(off-target) 效应。例如，惊奇的发现化合物1比化合物2针对细胞色素 P450 2D6酶效力低约三倍。化合物 1针对细胞色素 P450 2D6酶减少的效力改善了化合物在服用额外药物的患者中的安全特 性，或作为与化合物1的结合疗法的一部分以治疗本文所述医学障碍，或用于治疗不同的疾 病。该组合物和方法的其他优点和益处描述在例如详细说明和实施例中。
[0015]因此，本发明的一个方面提供了由式I表示的化合物族：
[0017] 或几何异构体或互变异构体;或前述任何的药学上可接受的盐或溶剂化物;其中 R1是位于它所连接的苯基的间位或对位上的氯基团。
[0018] 本发明的另一个方面提供了由下式表示的化合物：
[0020]或几何异构体或互变异构体;或前述任何的药学上可接受的盐。本发明的另一个 方面提供了由下式表示的化合物：
[0022] 或几何异构体或互变异构体;或前述任何的溶剂化物。
[0023] 本发明也提供晶体形式的化合物。例如，本发明的一个方面提供结晶化合物3-氯-N-(((3_氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺。在某 些实施方式中，结晶化合物3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1H-吡唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺是多晶型I，其显示出包含以下衍射角度(2Θ)的峰的X-射线粉末 衍射图 ：6·2±0·2,7·1±0·2,9·4±0·2，10·7±0·2，15·6±0·2，19·0±0·2,20·0±0·2,和 25.2 ±0.2。在某些其他实施方式中，结晶化合物3-氯-Ν-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三 氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基）亚甲基)苯甲酰胺是多晶型II，其显示出包含以下衍射角度 (2Θ)的峰的X-射线粉末衍射图 ：6·3±0·2,7·3±0·2，11·0±0·2，12·8±0·2，16·9±0·2， 19.2±0.2,20.6±0.2,22.2±0.2,25.7±0.2,26.0±0.2，和35.7±0.2。
[0024] 本发明另一个方面提供结晶化合物3_氯-Ν_( ((3_氯_5_氣苯基)氨基）（（5_(二氣 甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺丙酮溶剂化物。在某些实施方式中，结晶化合 物3-氯-Ν-(((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲酰 胺丙酮溶剂化物，显示出包含在以下衍射角度（2Θ)的峰的X-射线粉末衍射图：6.2±0.2， 8.3±0.2，14.7±0.2，17.5±0.2，17.9±0.2，18.5±0.2,20.2±0.2,20.9±0.2,23.5土 0.2,和 25.9±0.2。
[0025] 前述化合物可以出现在包含本文所述化合物和药学上可接受的载体的药物组合 物中。
[0026] 本发明的另一个方面提供治疗遭受医学障碍的受试者的方法。该方法包括向受试 者给药治疗有效量的一种或多种本文所述三氟甲基吡唑基胍化合物，例如，式I的化合物或 一种本文所述晶型，为了改善障碍的症状。大量障碍可以用本文所述三氟甲基吡唑基胍化 合物治疗。例如，本文所述化合物可以用于治疗免疫性障碍或炎性障碍，比如类风湿性关节 炎，银肩病，慢性移植物抗宿主疾病，急性移植物抗宿主病，克罗恩病，炎性肠病，多发性硬 化症，全身性红斑狼疮，乳糜泻，特发性血小板减少性血栓形成紫癜，重症肌无力，斯耶格伦 氏综合症，硬皮病，溃疡性结肠炎，哮喘，表皮增生，以及本文所述其他医学障碍。本文所述 化合物也可用于治疗心血管疾病，骨髓瘤，淋巴瘤，癌症或细菌感染。
[0027]本发明的另一个方面提供抑酶，例如，线粒酶的方法。该方 法包括酶暴露于本文所述的化合物，例如，式I的化合物或本文所述的晶型之一， 以抑制所述FiFo-ATP酶。
[0028]附图简要说明
[0029]图1是3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚 甲基)苯甲酰胺丙酮溶剂化物的X-射线粉末衍射图，进一步描述于实施例2中。
[0030] 图2是3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚 甲基)苯甲酰胺丙酮溶剂化物的示差扫描量热法(DSC)曲线，以及3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯 基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基）亚甲基)苯甲酰胺丙酮溶剂化物的热重分 析(TGA)曲线，各自进一步描述于实施例2中。
[0031] 图3是3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚 甲基)苯甲酰胺晶型I的X-射线粉末衍射图，进一步描述于实施例3中。
[0032]图4是3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚 甲基)苯甲酰胺晶型I的不差扫描量热法(DSC)曲线，以及3-氯-N_( ((3-氯-5-氟苯基)氨基） ((5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺晶型I的热重分析(TGA)曲线，各自 进一步描述于实施例3中。
[0033]图5是3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚 甲基)苯甲酰胺晶型II的X-射线粉末衍射图，进一步描述于实施例4中。
[0034]图6是3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚 甲基)苯甲酰胺晶型II的示差扫描量热法(DSC)曲线，进一步描述于实施例4中。
[0035]图7是3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚 甲基)苯甲酰胺晶型II的X-射线粉末衍射图，进一步描述于实施例5中。
[0036]图8是3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚 甲基)苯甲酰胺晶型II的示差扫描量热法曲线，进一步描述于实施例5中。
[0037]发明详述
[0038] 本发明提供抑酶（例如，线粒酶）的三氟甲基吡唑基胍化合 物，包含三氟甲基吡唑基胍化合物的药物组合物，以及在疗法中使用三氟甲基吡唑基胍化 合物和药物组合物的方法。如上所述，本发明的一个方面涉及发现具有令人惊奇的优异的 药物性质的组合物。例如，惊奇地发现化合物3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟 甲基）-1Η-吡唑-3-基）氨基）亚甲基）苯甲酰胺（化合物1)与3-氯-N-(((3-氯苯基）氨基） ((5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺(化合物2)相比具有减少的脱靶效 应。例如，惊奇地发现化合物1比化合物2针对细胞色素 P450 2D6酶的效力低约三倍。
[0039]化合物1针对细胞色素 P450 2D6酶减少的效力，改善了化合物在服用额外药物的 患者中的安全特性，或作为与化合物1的结合疗法的一部分以治疗本文所述医学障碍，或用 于治疗不同的疾病。细胞色素 P450 2D6涉及许多治疗剂的代谢。抑制细胞色素 P450 2D6的 作用是不希望的，因为这样的抑制可以改变治疗剂的代谢速率，造成另外的安全剂量或频 率而对患者变得不安全。本发明提供具有在细胞色素 P450 2D6上降低的效果的组合物，从 而提供在向服用其他药物的患者给药时具有改进的安全性质的治疗。
[0040]本发明的示例性组合物和方法更加详细描述于以下部分：
[0041 ] I .FiFo-ATP酶活性调节剂；II.三氟甲基吡唑基胍化合物；III.三氟甲基吡唑基胍 化合物的治疗应用，和IV.药物组合物，制剂，以及示例性给药途径和剂型考虑。在一个特定 部分中描述的本发明的方面不限于任何特定部分中。
[0042] 除非另有指明，本发明的实施运用有机化学，药理学，分子生物学（包括重组技 术），细胞生物学，生物化学，和免疫学的常规技术，这些在本领域技术范围内。这些技术在 文献中充分解释，比如 "Comprehensive Organic Synthesis"（Β ·Μ· Trost&I ·Fleming， eds ·，1991-1992) ; "Molecular cloning : a laboratory manual'，Second Edition (Sambrook et al·，1989);"Oligonucleotide synthesis"（M.J.Gait，ed.，1984);"Animal cell culture"（R. I .Freshney，ed.，1987); "Methods in enzymology" 系列（Academic Press，Inc·);"Handbook of experimental immunology"（D·Μ.Weir&C.C·Blackwell， eds.)；uGene transfer vectors for mammalian cells"（J.M.Miller&M.P.Calos，eds·， 1987);"Current protocols in molecular biology"（F.M.Ausubel et al·，eds·，1987， and periodic updates); "PCR: the polymerase chain reaction'，（Mullis et al.，eds·， 1994);和"Current protocols in immunology"（J.E.Coligan et al ·，eds·，1991)，各自 通过援引全部并入本文。
[0043] 为了帮助对本发明的理解，以下对一些术语和词组进行了定义。
[0044] 如在本文中使用的术语"胍"，指具有以下核心结构的化合物 包
， 括药学上可接受的盐形式^ 表示连接点。
[0045] 公开的化合物可以包含一个或多个双键，因此，存在几何异构体。除非另有指明， 一般化学结构和图形表示的具体化合物包括了所有几何异构体。本发明包括了由在双键 (例如，碳碳双键，或碳氮双键)周围的取代基排列产生的各种几何异构体和其混合物。在双 键周围的取代基被指定为"Z"或"E"构型，其中术语"Z"和?"是按照IUPAC标准使用的。除非 另有说明，结构描绘的双键包括"E"和"Z"同分异构体。在双键周围的取代基可选的可以指 示作为"顺式"或"反式"，其中"顺式"表示取代基在双键同侧，和"反式"表示取代基在双键 对侧。
[0046]本文中描述的某些化合物可以作为单个互变异构体或作为互变异构体的混合物 存在。例如，具有连接到至少一个胍氮原子上的氢原子的某些胍化合物可以作为单个互变 异构体或互变异构体的混合物存在。为了说明，取决于连接在R 1，!?2和R3位置上的取代基，胍 化合物可以作为以A，B，或C表示的单个互变异构体存在，或作为两个或以上A，B，和C的混合 物存在。
[0048] 本文公开的化合物可以与药学上可接受的溶剂，比如水，乙醇，丙酮等以溶剂化和 非溶剂化形式存在，其旨在本发明包含溶剂化和非溶剂化形式。
[0049] 本发明还包含与本文记载的那些相同的本发明的同位素标记物，除了一个或多个 原子被具有原子量或质量数与通常在自然界中发现的原子量或质量数不同的原子取代。可 以被掺入本发明化合物的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，比如分 别是 2H，3H，13C，14C，15N， 180，170，31P，32P，35S， 18F，和 36C1。
[0050] 某些同位素标记的公开的化合物(例如，那些用3H和14C标记的）在化合物和/或底 物组织分布含量测定中有用。氚（即， 3H)和碳_14(即，14C)同位素是特别优选的易于制备和 检测的。进一步，用较重的同位素比如氘（即， 2H)可以提供某些来自更高的代谢稳定性的治 疗优点（例如，增加体内半衰期或降低剂量要求)并因此在某些环境下可以是优选的。本发 明同位素标记的化合物通常可以通过以下与例如本文实施例公开的类似的步骤，通过用同 位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂制备。
[0051 ] 化学名称"3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨 基)亚甲基)苯甲酰胺"指以下化合物：
[0053]术语邻位，间位和对位是本领域所公认的概念并分别指1，2-，1，3-和1，4_二取代 的苯。例如，名称1，2_二甲苯和邻-二甲苯是同义词。
[0054]术语〃IC5Q〃是本领域所公认的概念并指对其目标50 %抑制所要求的化合物的浓 度。
[0055]术语〃EC5Q〃是本领域所公认的概念并指在观察到50%最大效果的化合物的浓度。
[0056] 术语"受试者"和"患者"指通过本发明的方法待治疗的生物体。这样的生物体优选 地包括，但不限于，哺乳动物(例如，鼠，猿，马，牛，猪，犬，猫等），且最优选地包括人类。在本 发明的上下文中，术语"受试者"和"患者"通常指个体，其将接受或已经接受治疗(例如，给 药本发明的化合物和任选地一种或多种其他试剂)特征在于细胞凋亡过程失调的病症。
[0057] 如本文所使用的，术语"有效量"指化合物的数量足以产生有益或所希望的结果。 有效量可以以一种或多种给药、应用或剂量施用，并不意在限制特定制剂或给药途径。如本 文所使用的，术语"治疗"包括任何效果，例如，减轻、减少、调节、改善或消除其症状，其导致 病症、疾病、障碍的改进等等;或改善其症状。
[0058] 词组"病理性增殖或生长的细胞"指动物中局部的增殖细胞群体，其不被正常生长 的通常限制管控。
[0059] 如本文所使用的，术语"未激活的靶向细胞"指或在G。期或还没有应用刺激物的细 胞。
[0060] 如本文所使用的，术语"激活的靶淋巴细胞"指已经接触合适的刺激物以导致信号 传导级联的淋巴细胞，或可选地，未处在G。期的淋巴细胞。激活的淋巴细胞可以增殖，经历 激活诱导细胞死亡，或产生一种或多种细胞毒素，细胞因子，或其他相关的膜相关蛋白质特 性的细胞类型(例如，CD8+或CD4+)。它们还能识别并结合在其表面显示特定抗原的任何靶细 胞，并随后释放它的效应分子。
[0061] 如本文所使用的，术语"激活的癌细胞"指已经接触合适的刺激物以导致信号传导 的癌细胞。激活的癌细胞可能在或可能不在Go期。
[0062] 激活剂是在靶细胞上相互作用的刺激物，导致信号传导级联。激活的刺激物的例 子包括，但不限于，小分子，辐射能量，和结合到细胞激活细胞表面受体的分子。由激活刺激 物诱导的响应可以通过改变在细胞内Ca 2+，超氧化物，或羟自由基水平等;酶，像激酶或磷酸 酶的酶活性;或细胞能级来表征。对于癌细胞，激活剂还包括转化的癌基因。
[0063] 如本文所使用的，术语"细胞死亡过程失调"指细胞经由坏死或细胞凋亡经历细胞 死亡的能力(例如，倾向）的任何异常。细胞死亡的失调与多种病症相关或由多种病症诱导， 所述病症包括例如，免疫障碍(例如，系统性红斑狼疮，自体免疫障碍，类风湿性关节炎，移 植物抗宿主疾病，重症肌无力，斯耶格伦氏综合症等），慢性炎症病症(例如牛皮癣，哮喘和 克罗恩病），过度增殖性病症(例如肿瘤，B细胞淋巴瘤，T细胞淋巴瘤等），病毒感染(例如疱 疹，乳头状瘤，HIV)和其它病症比如骨关节炎和动脉粥样硬化。
[0064] 应当注意，当失调是由病毒感染诱导或与其相关时，在失调发生或观察到的同时 可能或可能没检测到病毒感染。即，即使在病毒感染的症状消失之后也可以发生病毒诱导 的失调。
[0065] 如本文所使用的"过度增殖性障碍"指任何病症，其中动物中局部的增殖细胞群体 不由正常生长的通常限制所管控。过度增殖性障碍的例子包括瘤，肿瘤，淋巴瘤等。如果它 不经历侵袭或转移则肿瘤被认为是良性的，如果经历这些任何一个则是恶性的。转移的细 胞或组织意味着细胞可以侵袭并破坏相邻身体结构。增生是细胞增殖的形式，包括在组织 或器官中细胞数量的增长，而没有结构或功能上的显著改变。化生是受控细胞增长的形式， 其中一种类型的完全分化的细胞代替另一种类型的分化的细胞。化生可以发生在上皮或结 缔组织细胞中。典型的化生包括有点无序地化生的上皮。
[0066]激活的淋巴细胞的病理性生长通常导致免疫障碍或慢性炎症病症。如本文所使用 的，术语"免疫障碍"指任何病症，其中生物体产生识别生物体本身分子、细胞或组织的抗体 或免疫细胞。免疫障碍的非限制性例子包括自身免疫障碍，免疫溶血性贫血，免疫肝炎，巴 尔热（Berger)病或IgA肾病，乳糜泻，慢性疲劳综合征，克罗恩（Crohn)病，皮肌炎，纤维肌 痛，移植物抗宿主疾病，格雷夫(Grave)病，桥本(Hashimoto)甲状腺炎，特发性血小板减少 性紫癜，扁平苔癣，多发性硬化，重症肌无力，牛皮癣，风湿热，风湿性关节炎，硬皮病，斯耶 格伦综合征，系统性红斑狼疮，1型糖尿病，溃疡性结肠炎，白癜风。
[0067]如本文所使用的，术语"慢性炎症病症"指病症，其中生物体的免疫细胞是激活的。 这样的病症其特征在于对病理性后遗症的持续炎症反应。该状态其特征在于单核细胞的浸 润，成纤维细胞和小血管的增殖，增加的结缔组织，和组织破坏。慢性炎症疾病的例子包括， 但不限于，克罗恩病，银肩病，慢性阻塞性肺部疾病，炎性肠疾病，多发性硬化症，和哮喘。免 疫性疾病比如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮也可以导致慢性炎性状态。
[0068] 如本文所使用的，术语"联合给药"指向受试者给药至少两种试剂(例如，本发明的 化合物)或疗法。在一些实施方式中，两种或更多种试剂/疗法的联合给药同时发生。在其他 实施方式中，第一种试剂/疗法的施用在第二种试剂/疗法之前。本领域技术人员理解各种 试剂/疗法的制剂和/或给药途径的使用可以改变。对于联合给药合适的剂量可以由本领域 技术人员容易地确定。在一些实施方式中，当试剂/疗法是联合给药时，试剂/疗法各自以比 它们单独给药的合适剂量更低的剂量给药。因此，联合给药在其中试剂/疗法的联合给药降 低已知潜在有害的(例如，毒性)试剂的必需剂量的实施方式中是特别希望的。
[0069] 如本文所使用的，术语"药物组合物"指活性剂与惰性或活性载体的组合物，使得 组合物特别适合体内或体外诊断或治疗用途。
[0070] 如本文所使用的，术语"药学上可接受的载体"指任何标准药物载体，比如磷酸盐 缓冲盐溶液、水、乳剂(例如，比如油/水或水/油乳剂），和各种类型的湿润剂。组合物还可以 包括稳定剂和防腐剂。载体、稳定剂和助剂的例子，参见例如，Mart in，Remington ' S Pharmaceutical Sciences，15th Ed.，Mack Publ·Co·，Easton，PA[1975]〇
[0071] 如本文所使用的，术语"药学上可接受的盐"指本发明的化合物的任何药学上可接 受的盐(例如，酸或碱），其向受试者给药，能够提供本发明的化合物或其活性代谢物或残余 物。如本领域技术人员已知的，本发明的化合物的"盐"可以衍生自无机或有机酸或碱。酸的 例子包括，但不限于，盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，高氯酸，富马酸，马来酸，磷酸，乙醇酸，乳 酸，水杨酸，琥珀酸，对甲苯磺酸，酒石酸，乙酸，柠檬酸，甲磺酸，乙磺酸，甲酸，苯甲酸，丙二 酸，萘-2-磺酸，苯磺酸等。其它的酸，比如草酸，虽然其本身并非药学上可接受的，可以用于 制备用作中间体的盐，以获得本发明化合物及其药学上可接受的酸加成盐。
[0072] 碱的例子包括，但不限于，碱金属(例如，钠)氢氧化物，碱土金属(例如镁），氢氧化 物，氨和式NW4+的化合物，其中1是&-4烷基，等等。
[0073] 盐的例子包括，但不限于，乙酸盐，己二酸盐，藻酸盐，天冬氨酸盐，苯甲酸盐，苯磺 酸盐，硫酸氢盐，丁酸盐，柠檬酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊烷丙酸盐，二葡糖酸盐，十 二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，富马酸盐，Flucoheptanoate，甘油磷酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己 酸盐，盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，2-羟基乙磺酸盐，乳酸盐，马来酸盐，甲磺酸盐，2-萘磺 酸盐，烟酸盐，草酸盐，棕榈酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，苯丙酸盐，苦味酸盐，新戊酸盐，丙酸 盐，琥珀酸盐，酒石酸盐，硫氰酸盐，甲苯磺酸盐，十一酸盐等。盐的其它例子包括本发明的 化合物阴离子与合适的阳离子，比如Na+，NH4+，和NW4+ (其中1是&-4烷基)混合，等等。
[0074] 对于治疗用途，本发明的化合物的盐考虑为是药学上可接受的。但是，非药学上可 接受的酸和碱的盐也可以发现在例如药学上可接受的化合物的制备或纯化中使用。
[0075] 如本文所使用的，术语"调节"指化合物的活性（例如，本发明的化合物)影响（例 如，促进或阻滞)细胞功能的方面，包括但不限于，细胞生长、增殖、细胞凋亡等。
[0076] 在整个说明书中，组合物被描述为具有、包括、或包含特定组分，或过程和方法被 描述具有、包括、或包含特定步骤，另外，也意图有:本发明的组合物基本上由或由所记载的 组分组成，以及根据本发明的过程和方法基本上由或由所记载的处理步骤组成。
[0077] -般情况下，除非另有说明，组合物指定百分比是按重量计。进一步，如果变量没 有伴随定义，则先前的变量定义控制。
[0078] I.FiFo-ATP酶活性调节剂
[0079] 在一些实施方式中，本发明通过将细胞暴露于本发明的化合物调节FiFo-ATP酶活 性(例如，线粒酶活性）。在一些实施方式中，化合物抑制ATP合成和ATP水解。可以 通过检测细胞变化的任何数字测量化合物的效果。例如，线粒酶活性和/或细胞 死亡可以如本文所述和现有技术测定。在一些实施方式中，细胞系维持在适当的细胞培养 条件下（例如，气体(C0 2)、温度和培养基)一段适当的时期，以获得不依赖于密度限制的指 数式增殖。利用标准技术，比如锥虫蓝排除/血细胞计数法，或阿拉玛蓝或MTT染料转换测 定，测量细胞数量和或活力。可选地，可以分析细胞用于与细胞凋亡或坏死反常有关的基因 或基因产物表达。
[0080]在一些实施方式中，向细胞暴露本发明的化合物诱导细胞凋亡。在某些其他的实 施方式中，本发明的化合物通过与线粒体FiFo-ATP酶相互作用诱导细胞凋亡或抑制细胞增 殖。在又其他的实施方式中，当向受试者给药时，本发明的化合物引起细胞R0S水平(例如， 0〇最初的增加。
[0081 ] II.三氟甲基吡唑基胍化合物
[0082]本发明的一个方面提供了由式I表示的化合物族：
[0084] 或几何异构体或互变异构体;或前述任何的药学上可接受的盐或溶剂化物;其中 R1是位于它所连接的苯基的间位或对位上的氯基团。可以理解，术语"邻"和"对"分别指1-位是羰基连接点的苯基的3-位和4-位。
[0085] 在某些实施方式中，化合物是式I的化合物或几何异构体或互变异构体，或前述任 何的药学上可接受的盐。在某些其他的实施方式中，化合物是式I的化合物或几何异构体或 互变异构体，或前述任何的药学上可接受的溶剂化物。在某些实施方式中，化合物是丙酮溶 剂化物的形式。
[0086] 在某些实施方式中，化合物由下式表示：
[0088]或几何异构体或互变异构体;或前述任何的药学上可接受的盐。在某些其他的实 施方式中，化合物由下式表示：
[0090] 或几何异构体或互变异构体;或前述任何的溶剂化物。在某些实施方式中，化合物 是丙酮溶剂化物形式。
[0091] 在又其他的实施方式中，化合物由下式表示：
[0092]
或几何异构体或互变异构体。在又其他的实施方式 中，化合物由下式表示：
[0094]本发明的另一个方面提供由下式表示的化合物：
[0096]或几何异构体或互变异构体;或前述任何的药学上可接受的盐或溶剂化物。在某 些实施方式中，化合物是
[0097]几何异构体或互变异构体;或前述任何的药学上可接受的盐。在某些其他的实施
[ 方式中，化合物是 或几何异构体或互变异构体;或前述任何的
溶剂化物。在又其他的实施方式中，化合物是 或几何异构体或 互变异构体。在又其他的实施方式中，化合物是
[0098] 化合物的结晶形式
[0099] 本发明的另一个方面提供晶型的化合物。例如，本发明的另一个方面提供结晶化 合物3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲 酰胺。该结晶化合物可以是不同的聚合形式。例如，已经发现多晶型I和多晶型II。
[0100] A. 3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基）亚甲 基)苯甲酰胺的晶型I
[0101] 3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚甲基） 苯甲酰胺晶型I的制备过程描述在例如本文的实施例3中。型I的X-射线粉末衍射图在图3中 提供。型I的示差扫描量热法曲线与型I的热重量分析曲线在图4中提供。3-氯4-(((3-氯_ 5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺的型I可以根据它 的X-射线粉末衍射图和由它的示差扫描量热法确定的熔点开始来表征。
[0102] 因此，本发明的一个方面提供结晶3-氯-N_(((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲 基)-1H-吡唑-3-基)氨基）亚甲基）苯甲酰胺，其显示出包含在以下衍射角度(2Θ)的峰的X-射线粉末衍射图 ：6·2±0·2,7·1±0·2,9·4±0·2，10·7±0·2，15·6±0·2，19·0±0·2,20·0 ±0.2,和25.2±0.2。在某些实施方式中，在所述衍射角度（2Θ)的峰的相对强度是至少 20%。在某些实施方式中，在所述衍射角度(2Θ)的峰的相对强度是至少30%。
[0103] 结晶化合物可以进一步通过以衍射角度2Θ，平面间距离d，和相对强度(表示为对 于最强峰的百分比)表示的以下X-射线粉末衍射图表征：
[0106] 在又进一步的实施方式中，晶型I可以进一步表征为具有X-射线粉末衍射图，基本 上如图3中显示。
[0107] 可以使用CuKa辐射获得X-射线粉末衍射图。获得X-射线粉末衍射图的温度可以是 在例如25 ±2摄氏度。
[0108] 晶型I可以通过由示差扫描量热法确定的熔点开始的温度进一步表征。在某些实 施方式中，结晶化合物具有由示差扫描量热法确定的范围从约149摄氏度至约164摄氏度的 熔点开始。在某些其他的实施方式中，结晶化合物具有由示差扫描量热法确定的范围从约 157摄氏度至约161摄氏度的熔点开始。在又其他的实施方式中，结晶化合物具有由示差扫 描量热法确定的在约159摄氏度的熔点开始。又进一步，晶型I可以进一步通过具有基本上 与图4显示相同的示差扫描量热法曲线来表征。
[0109] B. 3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基）亚甲 基)苯甲酰胺的晶型II
[0110] 3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚甲基） 苯甲酰胺的晶型Π 的制备过程描述在例如本文实施例4和实施例5中。晶型II的示例性X-射 线粉末衍射图提供在图5和7中。晶型II的不差扫描量热法曲线提供在图6和8中。3-氯-Να (3_ 氯 _5_ 氟苯基) 氨基 ）（（5-( 三氟甲基 )-1Η_ 吡唑 _3_ 基) 氨基) 亚甲基) 苯甲酰胺的晶型 II可以根据它的X-射线粉末衍射图和由示差扫描量热法确定的它的熔点开始来表征。
[0111] 因此，本发明的一个方面提供结晶3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲 基)-m-吡唑-3-基)氨基）亚甲基）苯甲酰胺，其显示出包含在以下衍射角度(2Θ)的峰的X-射线粉末衍射图：6·3±0·2,7·3±0·2，11·0±0·2，12·8±0·2，16·9±0·2，19·2±0·2,20·6 ±0.2，22.2±0.2,25.7±0.2,26.0±0.2,和35.7±0.2。在某些实施方式中，在所述衍射角 度(2Θ)的峰的相对强度是至少15%。在某些其他的实施方式中，在所述衍射角度(2Θ)的峰 的相对强度是至少18 %。
[0112] 在某些实施方式中，晶型II可以进一步表征为在X-射线粉末衍射图中包含以下 (以衍射角度2Θ，平面间距离d，和相对强度(表示为对于最强峰的百分比）表示））特征：
[0115]晶型II可以进一步通过以衍射角度2Θ，平面间距离d，和相对强度(表示为对于最 强峰的百分比)表示的以下X-射线粉末衍射图表征：
[0119]在又进一步的实施方式中，晶型11可以进一步表征为具有基本上如图5中显不的 X-射线粉末衍射图。在其他实施方式中，晶型II可以进一步表征为具有基本上如图7中显示 的X-射线粉末衍射图。
[0120] 可以使用CuKa辐射获得X-射线粉末衍射图。获得X-射线粉末衍射图的温度可以是 在例如25 ±2摄氏度.
[0121] 晶型II可以进一步通过由示差扫描量热法确定的它的熔点开始的温度表征。在某 些实施方式中，结晶化合物具有由示差扫描量热法确定的熔点开始，所述熔点范围从约158 摄氏度至约165摄氏度。在某些其他的实施方式中，结晶化合物具有由示差扫描量热法确定 的如下范围的熔点开始，所述范围从约159摄氏度至约164摄氏度。在又其他的实施方式中， 结晶化合物具有由示差扫描量热法确定的如下的熔点开始:在约158摄氏度，约159摄氏度， 约160摄氏度，约163摄氏度，约164摄氏度，或约165摄氏度。在又其他的实施方式中，结晶化 合物具有由示差扫描量热法确定的在约159摄氏度的熔点开始。又进一步，晶型II可以进一 步通过具有基本上与图6显示相同的示差扫描量热法曲线来表征。在又其他的实施方式中， 晶型II可以进一步通过具有基本上与图8显示相同的示差扫描量热法曲线来表征。
[0122] C.结晶3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1H-吡唑- 3-基)氨基） 亚甲基)苯甲酰胺丙酮溶剂化物
[0123] 结晶3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1H-吡唑- 3-基)氨基）亚 甲基）苯甲酰胺丙酮溶剂化物的制备过程描述在例如本文实施例2中。结晶3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺丙酮溶剂化物 的x-射线粉末衍射图在图1中提供。它的示差扫描量热法曲线与热重量分析曲线一起在图2 中提供。3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基）亚甲基） 苯甲酰胺丙酮溶剂化物可以根据它的X-射线粉末衍射图和由示差扫描量热法确定的它的 熔点开始表征。
[0124] 因此，本发明的一个方面提供结晶3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲 基)-m-吡唑-3-基)氨基)亚甲基）苯甲酰胺丙酮溶剂化物，其显示出包含在以下衍射角度 (2Θ)的峰的X-射线粉末衍射图 ：6·2±0·2,8·3±0·2，14·7±0·2，17·5±0·2，17·9±0·2， 18.5±0.2,20.2±0.2,20.9±0.2,23.5±0.2，和25.9±0.2。在某些实施方式中，其中在所 述衍射角度(2Θ)的相对强度是至少10%。在某些其他的实施方式中，其中在所述衍射角度 (2Θ)的相对强度是至少15%。
[0125] 结晶化合物可以进一步通过以衍射角度2Θ，平面间距离d，和相对强度(表示为对 于最强峰的百分比)表示的以下X-射线粉末衍射图表征：
[0128] 在又进一步的实施方式中，结晶3-氯-N_( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲 基)-1H-吡唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺丙酮溶剂化物可以进一步表征为具有基本上如 图1显示的X-射线粉末衍射图。
[0129] 可以使用CuKa辐射获得X-射线粉末衍射图。获得X-射线粉末衍射图的温度可以是 在，例如，25 ±2摄氏度。
[0130] 结晶3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基）亚 甲基)苯甲酰胺丙酮溶剂化物可以进一步通过具有熔点开始在约159摄氏度来表征。又进一 步，结晶化合物可以进一步通过基本上与图2显示相同的示差扫描量热法曲线来表征。
[0131] 在某些其他的实施方式中，化合物是在实施例1-7中所列的化合物之一，或所述化 合物药学上可接受的盐。在某些其他的实施方式中，化合物是在实施例1-8中所列的化合物 之一，或所述化合物药学上可接受的盐。可以理解前述化合物可以与药学上可接受的载体 结合以产生药物组合物。
[0132] 制备本文所述化合物的示例性方法在实施例中提供。
[0133] III.三氟甲基吡唑基胍化合物的治疗应用
[0134] 可以预期，本文所述的胍化合物，比如式I的胍化合物和本文所述特定的结晶化合 物，对遭受任何一种或多种许多病症的患者提供治疗的益处，例如，特征在于Ffo-ΑΤΡ酶活 性失调的疾病，特征在于细胞或组织中坏死和/或细胞凋亡过程失调的疾病，和特征在于异 常细胞生长和/或过度增殖的疾病。本文所述化合物还可以用于治疗各种与如本文其他地 方所述的细胞死亡相关的失调障碍。另外地，本文所述化合物可以用于抑制ATP合成。
[0135] 因此，本发明的一个方面提供了治疗遭受医学障碍的受试者的方法。所述方法包 括向受试者给药治疗有效量的一种或多种本文所述胍化合物，例如，式I的化合物或特定的 结晶化合物，如在上面部分II中所述，目的是改善障碍的症状。
[0136] 可以使用本文所述的胍化合物治疗许多医学障碍。例如，可以使用如本文所述化 合物治疗特征在于在细胞或组织中坏死和/或细胞凋亡过程失调的医学病症，特征在于异 常细胞生长和/或过度增殖的疾病等，或狼疮，类风湿性关节炎，银肩病，移植物抗宿主疾 病，克罗恩病，炎性肠病，多发性硬化症，心血管疾病，骨髓瘤，淋巴瘤，癌症和细菌感染。在 某些实施方式中，癌症是实体肿瘤，白血病，结肠癌，胰腺癌，乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌，鳞 状上皮细胞癌，基底细胞癌，腺癌，汗腺癌，皮脂腺癌，肺癌，小细胞肺癌，非小细胞肺癌，膀 胱癌，胃癌，宫颈癌，睾丸肿瘤，皮肤癌，直肠癌，甲状腺癌，肾癌，子宫癌，食道(espophagus) 癌，肝癌，听神经瘤，胶质细胞瘤，脑膜瘤，黑素瘤，成神经细胞瘤，或视网膜母细胞瘤。
[0137] 虽然不希望受到特定理论的限制，但是可以相信化合物通过在受影响的细胞或组 织中调节(例如，抑制或促进^iFo-ATP酶复合物(例如，线粒酶复合物)的活性给 予治疗益处。在一些实施方式中，本发明的组合物用于治疗免疫/慢性炎性病症(例如牛皮 癣，自体免疫障碍，器官移植排斥，和表皮增生）。在进一步的实施方式中，本发明的组合物 与狭窄疗法联合用于治疗受损(例如闭塞的)血管。
[0138] 在某些实施方式中，包含胍化合物的组合物在最大化指向FiFo-ATP酶的期望的效 果的条件下(例如，定时，剂量，与其他试剂联合给药，给药模式，受试者选择，靶向试剂的使 用等)给药。
[0139] 在某些实施方式中，医学障碍是免疫障碍。在某些其他的实施方式中，医学障碍是 炎性障碍。在某些其他的实施方式中，医学障碍是自身免疫障碍。在某些其他的实施方式 中，医学障碍类风湿性关节炎，银肩病，慢性移植物抗宿主疾病，急性移植物抗宿主病，克罗 恩病，炎性肠疾病，多发性硬化，系统性红斑狼疮，乳糜泻，特发性血小板减少性血栓形成紫 癜，重症肌无力，斯耶格伦氏综合症，硬皮病，溃疡性结肠炎，哮喘，葡萄膜炎，或表皮增生。
[0140] 在某些实施方式中，医学障碍是克罗恩病或溃疡性结肠炎。
[0141 ]在某些其他的实施方式中，医学障碍是软骨炎症，骨退化，关节炎，少年关节炎，幼 年型类风湿性关节炎，少关节幼年型类风湿性关节炎，多关节幼年型类风湿性关节炎，全身 发作幼年型类风湿性关节炎，青少年型强直性脊椎炎，青少年肠病性关节炎，青少年反应性 关节炎，青少年Reter氏综合征，SEA综合症，青少年型皮肌炎，青少年银肩病性关节炎，青少 年硬皮病，青少年全身性红斑狼疮，青少年脉管炎，少关节类风湿性关节炎，多关节炎类风 湿性关节炎，全身性发作类风湿性关节炎，强直性脊柱炎，肠病性关节炎，反应性关节炎， Reter氏综合症，皮肌炎，牛皮癣性关节炎，脉管炎，脊髓炎（myol itis )，多发性肌炎 (口〇171117〇1；[1^8)，皮肌炎（(161'1]^1：01117〇1；[1^8)，骨关节炎，结节性多动脉炎，韦格纳肉芽肿 病，动脉炎，风湿性多肌痛，结节病，硬化症，原发性胆管纤维硬化，硬化性胆管炎，皮炎，特 应性皮炎，动脉粥样硬化，斯蒂尔（Still)疾病，慢性阻塞性肺病，吉兰-巴尔（Guillain-Barre)疾病，I型糖尿病，格雷夫斯疾病，艾迪生氏(Addison)疾病，雷诺氏（Raynaud)现象， 或自身免疫性肝炎。在某些实施例中，银肩病是斑块型银肩病，点滴状银肩病，皮褶牛皮鲜， 脓疱性银肩病，或红皮病型银肩病。
[0142] 在某些其他的实施方式中，医学障碍是克罗恩病，炎性肠病，多发性硬化症，移植 物抗宿主病，狼疮，类风湿性关节炎或牛皮癣。在某些其他的实施方式中，医学障碍是心血 管疾病，骨髓瘤，淋巴瘤或癌症。在某些其他的实施方式中，医学障碍是狼疮，类风湿性关节 炎，牛皮癣，移植物抗宿主病，骨髓瘤或淋巴瘤。在某些其他的实施方式中，医学障碍是心血 管疾病或癌症。在某些其他的实施方式中，医学障碍是克罗恩病，炎性肠病，多发性硬化症。 在某些其他的实施方式中，医学障碍是移植物抗宿主病。在进一步的实施方式中，医学障碍 时细菌感染。在某些实施方式中，患者(或受试者)是人类。
[0143] 如上所示，本文所述胍化合物可以用于治疗细菌感染。多种细菌被认为对胍化合 物敏感。代表性细菌包括葡萄球菌属（Staphylococci)种，例如，金黄色葡萄球菌 (S . aureus);肠球菌属（Enterococci )种，例如，奠肠球菌（E . faecal is )和屎肠球菌 (E· faecium);链球菌属（Streptococci)种，例如，肺炎链球菌（S·pyogenes)和酿脓链球菌 (S.pneumoniae);大肠杆菌属(Escherichia)种，例如，大肠杆菌(E.coli)，包括肠毒性的， 肠病源的，肠侵袭性的，肠出血性的和肠凝集性大肠杆菌（E.coli)菌株；嗜血杆菌属 (Haemophilus)种，例如，流感嗜血杆菌(H. inf luenza);和黏膜炎莫拉氏菌属(Moraxe 11a) 种，例如，卡他摩拉克菌(M. catarrhal is)。其他例子包括分歧杆菌属(Mycobacteria)种，例 如，结核分歧杆菌(M. tuberculosis)，鸟胞内分歧杆菌(M.avian-intracellulare)，堪萨斯 分歧杆菌（M.kansasii)，牛分歧杆菌（M.bovis)，非洲分歧杆菌（M.africanum)， M.genavense，麻风分歧杆菌（Μ· leprae)，蟾蜍分歧杆菌（M.xenopi)，猿分歧杆菌 (M. simiae)，瘰疬分歧杆菌(M. scrofulaceum)，海鱼分歧杆菌(M.malmoense)，M. celatum， 脓肿分歧杆菌(M.abscessus)，龟分歧杆菌(M. chelonae)，苏尔加分歧杆菌(M. szulgai)，戈 登分歧杆菌(Μ· gordonae)，M.haemophilum，M. fortuni和海氏分歧杆菌(M.marinum);棒状 杆菌(Corynebacteria)种，例如，白喉杆菌(C.diphtheriae);弧菌属(Vibrio)种，例如，霍 乱弧菌(V. cho 1 erae);弯曲杆菌属(Campy 1 obacter)种，例如，空肠弯曲菌(C. je juni);螺杆 菌属(Helicobacter)种，例如，幽门螺杆菌(H.pylori);假单胞菌属(Pseudomonas)种，例 如，铜绿假单胞菌（P.aeruginosa);军团病杆菌属（Legionella)种，例如，嗜肺军团菌 (L · pneumophi la);梅毒种（Treponema)，例如，苍白球梅毒（T · pal 1 idum);疏螺旋体 (Borrelia)种，例如，布氏疏螺旋体(B.burgdorferi);李斯特式菌属(Listeria)种，例如， 单增李斯特菌（L monocytogenes);芽孢杆菌属（Bacillus)种，例如，錯状芽孢杆菌 (B. cereus);败血波氏杆菌属(Bordatella)种，例如，百日咳杆菌(B.pertussis);梭菌属 (Clostridium)种，例如，产气荚膜梭菌（C.perfringens)，破伤风梭菌(C. tetani)，艰难梭 菌(C.difficile)和肉毒梭菌(C.botulinum);奈瑟式菌属(Neisseria)种，例如，脑膜炎奈 瑟式球菌(N.meningitidis)和淋病奈瑟式菌(N.gonorrhoeae);衣原体菌属(Chlamydia) 种，例如，鹤鹉热衣原体（C . psi ttaci )，肺炎衣原体（C . pneumoniae )和沙眼衣原体 (C. trachomatis);立克次氏体菌属(Rickettsia)种，例如，立氏立克次体(R. rickettsii) 和普氏立克次体(R.prowazekii);志贺菌属（Shigella)种，例如，宋氏志贺菌（S. sonnei); 沙门氏菌属（Salmonella)种，例如，鼠伤寒沙门氏菌（S . typhimurium);耶尔森氏菌属 (Yersinia)种，例如，小肠结肠炎耶尔森氏菌(Y. enterocolitica)和假结核耶尔森氏菌 (Y.pseu dot uberculosis);克雷伯氏菌属（Klebsiella)种，例如，肺炎克雷伯氏菌 (K. pneumoniae);支原体菌属(Mycoplasma)种，例如，肺炎支原体(M. pneumoniae);和布氏 锥虫(Trypanosoma brucei)。在某些实施方式中，本文所述的胍化合物是用于治疗遭受选 自以下细菌感染的受试者，所述细菌是金黄色葡萄球菌（S.aureus)，奠肠球菌 (E.faecalis)，屎肠球菌（E.faecium)，酿脓葡萄球菌（S.pyogenes)，肺炎葡萄球菌 (S.pneumonia)，和铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)。在某些实施方式中，本文所述胍化合物 用于治疗遭受布氏锥虫感染的受试者。
[0144] 本文所述化合物的抗菌活性可以使用本领域已知的标准测定法评价，比如微量肉 汤稀释最小抑制浓度(MIC)测定，如进一步描述在国家临床实验室标准委员会(National Committee for Clinical Laboratory Standards)，抗菌药物药物敏感性试验执行标准 (Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing);第十四次信息 补充（Fourteenth Informational Supplement)中的NCCLS文件M100_S14{ISBN 1-56238-516-X}。该测定可以用于确定防止溶液中可见细菌生长的化合物必需的最小浓度。通常，待 试验药物在孔板中连续稀释，并加入液体细菌培养物的等分部分。该混合物在适当的条件 下培养，然后检验细菌生长。具有低或无抗菌活性(高MIC)的化合物将允许细菌在高化合物 浓度生长，而具有高抗菌活性的化合物将允许细菌仅在更低的浓度(低MIC)生长。
[0145] 测定使用储备用细菌培养物条件适合于所选菌株。从永久储备用培养物采集的储 备用培养物可以在_70°C作为冷冻混悬液储存。培养物在于干冰/乙醇中快速冷冻前可以悬 浮在10 %脱脂乳(BD)中，然后放置于-70°C冰箱中。培养物可以于室温(20 °C)维持在含5 % 绵羊血的胰蛋白酶大豆琼脂中，在MIC试验之前的另外时间，每份培养物可以从冷冻形式复 原并转移。试验前一天进行新鲜平板接种，培养过夜，并检查确认纯度和鉴定。
[0146] 可以确认从储备用培养物复原的培养物的鉴定和纯度，以排除污染的可能性。可 以通过标准微生物学方法（参见，例如，Murray et al.，Manual of Clinical Microbiology，Eighth Edition.ASM Press{ISBN 1-55581-255-4})确认菌株的鉴定。通 常，将培养物划线到适当的琼脂板上进行纯度、期望菌落形态和溶血性图案的可视化。也可 以利用革兰氏染色。使用MicroScan WalkAway 40SI Instrument(Dade Behring，West Sacramento，California)确认鉴定。该设备利用用于识别目的的自动培养器，读取器和计 算机评价由各自生物体进行的生化反应。MicroScan WalkAway也可以用于确定初步MIC，其 可以使用以下描述的方法验证。
[0147] 冷冻的储备用培养物可以用作进行微量肉汤稀释的最小抑制浓度(MIC)试验的生 物体起始源。储备用培养物在使用之前递送到它们的标准生长培养基至少1个生长周期 (18-24小时）。大多数细菌可以直接从琼脂板于10mL等分量的适当的肉汤培养基中制备。调 节细菌培养物至0.5马克法兰式标准（在Perkin-Elmer Lambda EZ150分光光度计0.28-0.33光密度值，Wellesley，Massachusetts，设定在波长600nm处）的不透明度。然后将调整 后的培养物在生长的培养基中稀释400倍(0.25mL接种+100mL肉汤）以产生起始悬浮液约5x 105个菌落形成单位(CFU)/mL。大多数菌株可以在阳离子调节的Mueller Hinton Broth (CAMHB)中检测。
[0148] 受试化合物（"药物"）可溶于适用于测定的溶剂，比如DMS0。药物储备用溶液可以 在试验当天制备。微量肉汤稀释储备用板可以在两种稀释系列中制备，64至0.06yg药物/mL 和0.25至0.00025yg药物/mL。对于高浓度系列，向96孔微量滴定板的二重行中加入200yL储 备用溶液(2mg/mL)。这用作稀释系列中的第一孔。使用BioMek FX机器人(Beckman Coulter Inc.，Fullerton，CA)用剩余11个孔中的10个，其中每个将包含100yL适当的溶剂/稀释剂， 制备连续两倍递减的稀释液。第12行仅包含溶剂/稀释剂并充当对照组。对于低浓度系列的 第一孔，向96孔板的二重行加入200yL的8yg/mL的储备液。如上述制备连续两倍稀释液。
[0149] 子96-孔板使用BioMek FX机器人可以从以上所列储备用板点注（3.2yL/well)并 马上使用或在使用之前于_70°C冷冻。需氧生物体使用BioMek FX机器人接种到（100yL体 积)解冻板上。将接种板放置于架子上并用空板覆盖。然后在根据CLSI指南（国家委员会临 床实验室标准，稀释方法，对于需氧生长的细菌的抗微生物试验；批准的标准-第六版。 NCCLS文件M7_A6{ISBN 1-56238-486-4} (National Committee for Clinical Laboratory Standards ,Methods for Dilution，Antimicrobial Tests for Bacteria that Grow Aerobically；Approved Standard-Sixth Edition.NCCLS document M7-A6{ISBN 1-56238-486-4}))的环境大气中培养这些板16至24小时。
[0150] 在接种和培养之后，可以在黑暗的房间用单一光直接照射通过微量肉汤托盘的顶 部，借助试验读数镜(Dynex Technologies 220 16)视觉估计细菌生长程度。MIC是在试验 条件下防止肉眼可见的生长的最低药物浓度。
[0151] 另外地，本文所述任何一种或多种吡唑基胍化合物可以用于治疗受试者中与FiFo-ATP水解酶有关的障碍(例如，心肌梗死，心室的肥大，冠状动脉疾病，非Q波MI，充血性心力 衰竭，心律失常，不稳定型心绞痛，慢性稳定型心绞痛，变异型的心绞痛，高血压，间歇性跛 行，末梢闭塞性动脉疾病，血栓或血栓栓塞性病症的血栓栓塞中风，静脉血栓形成，动脉血 栓形成，脑血栓，肺栓塞，脑栓塞，血栓形成倾向，弥散性血管内凝血，再狭窄，心房颤动，心 室扩大，动脉粥样硬化的血管疾病，动脉粥样硬化斑破裂，动脉粥样硬化斑块形成，移植动 脉粥样硬化，血管重塑动脉粥样硬化，癌症，外科手术，炎症，全身感染，人工表面，介入性心 脏学，牛的慢性脑积水病，药疗法，妊娠和流产，和包括视网膜病，肾病和神经病的糖尿病并 发症）。
[0152] 组合疗法
[0153] 另外地，本文所述胍化合物可以与至少一种其他的治疗剂组合使用，比如Bz-423 (如描述在U· S ·专利Nos · 7，144，880和7，125，866U· S ·专利申请序列号Nos · 111/586，097， 11/585,492,11/445,010,11/324,419,11/176,719,11/110,228,10/935,333,10/886,450， 10/795,535,10/634,114,10/427,211，10/217,878,和09/767,283,和U.S.临时专利 Nos·60/878，519，60/812，270，60/802，394，60/732，045，60/730，711，60/704，102，60/686， 348，60/641，040，60/607，599，和60/565，788中的苯二氮杂革.化合物），钾通道开放剂，钙 通道阻滞剂，钠一氢离子交换器抑制剂，抗心律失常剂，抗动脉粥样硬化剂，抗凝血药，抗血 栓形成剂，凝血酶原剂，纤维蛋白原拮抗剂，利尿剂，抗高血压剂，ATP酶抑制剂，盐皮质激素 受体诘抗剂，磷酸二酯酶(Phospodiesterase)抑制剂，抗糖尿病剂，抗炎剂，抗氧化剂，血管 生成调节剂，抗骨质疏松剂，激素替代疗法，激素受体调节剂，口服避孕药，减肥药，抗抑郁 药，抗焦虑剂，抗精神病剂，抗增殖剂，抗肿瘤剂，抗溃疡和胃食管反流疾病剂，生长激素剂 和/或生长激素促分泌素，甲状腺模拟物，抗感染剂，抗病毒剂，抗菌剂，抗真菌剂，胆固醇/ 脂质降低剂和脂质分布疗法，模拟缺血预治疗和/或心肌晕眩剂，抗动脉粥样硬化剂，抗凝 血药，抗血栓剂，抗高血压剂，抗糖尿病剂和选自以下的抗高血压剂，所述抗高血压剂包括： ACE抑制剂，AT-1受体拮抗剂，ET受体拮抗剂，双重ET/AII受体拮抗剂，血管肽 (vasopeps idase)抑制剂，选自以下的抗血小板剂，所述抗血小板剂包括:GPIIb/II la受体 阻断剂，P2YdPP2Y12拮抗剂，血栓烷受体拮抗剂，或阿司匹林，以及在药物组合物中与药学 上可接受的载体或稀释剂一起使用。
[0154] IV.药物组合物，制剂，和示例性给药途径和剂量考量
[0155] 各种意图的药物和药物组合物的示例性实施方式在以下提供。
[0156] A.制备药物
[0157] 本发明的化合物在制备治疗各种病症，比如与细胞死亡失调、异常细胞生长和增 殖有关的病症的药物中有用。本领域技术人员会理解本文所述的任何一种或多种化合物， 包括许多【具体实施方式】，是通过应用标准药物生产过程制备的。这样的药物可以通过使用 药物领域已知的递送方法递送入受试者体内。
[0158] B.示例性药物组合物和制剂
[0159] 在本发明的一些实施方式中，组合物单独给药，但在一些其他的实施方式中，组合 物优选地存在于包含如上所述至少一种活性成分/试剂的药物制剂中，与固体载体一起或 可选地，与一种或多种药学上可接受的载体和任选地其他治疗剂(例如，那些描述在上述部 分III中的那些)一起。每种载体应当是与制剂的其他成分相容的意义上"可接受的，且不对 受试者有害。
[0160]意图的制剂包括那些适合于口服，直肠，鼻，局部(包括透皮，口腔含化和舌下），阴 道，非肠道(包括皮下，肌内，静脉内和皮内）和肺部给药。在一些实施方式中，制剂可方便地 以单位计量形式出现并通过药学领域已知的任何方法制备。这样的方法包括以下步骤:使 活性成分与构成一种或多种附加成分的载体联合。通常，通过使活性成分和液体载体或精 细分割的固体载体或二者均匀地和紧密地联合(例如，混合），且然后如果需要使产品成形 而制备制剂。
[0161]适合于口服给药的本发明的制剂可以作为离散的单位存在比如胶囊，扁囊剂或片 剂，其中每种优选地包含预定量的活性成分;作为粉末或颗粒;在水溶液或非水溶液液体中 作为溶液或混悬液;或作为水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。在其他实施方式中，活性成 分是作为大丸剂，药糖剂，或糊剂等出现。
[0162] 在一些实施方式中，片剂包含至少一种活性成分和任选地一种或多种附加试剂/ 载体，是通过压制或模制制备各自试剂。在一些实施方式中，通过在合适的机器中以自由流 动的形式比如粉末或颗粒任选地与粘合剂(例如，聚乙烯吡咯烷酮，明胶，羟丙基甲基纤维 素），润滑剂，惰性稀释剂，防腐剂，崩解剂(例如，羟基乙酸淀粉钠，交联聚维酮，交联羧甲基 纤维素钠)表面活性剂或分散剂混合，压制活性成分制备压制片剂。通过在合适的机器中压 膜用惰性液体稀释剂润湿的粉末的化合物(例如，活性成分）的混合物制备模压片剂。片剂 可以任选地包衣或刻痕并可以被配制以提供在缓释或控制释放的其中的活性成分，使用例 如不同比例的羟丙基甲基纤维素以提供所希望的释放曲线。片剂和胶囊剂可以任选地有肠 溶衣，以提供在肠部分而非胃中的释放。
[0163] 适合在口中局部给药的制剂包括锭剂，其包含活性成分在调味基质中，通常是蔗 糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶;软锭剂，其包含活性成分在惰性基质上，比如明胶和甘油，或蔗 糖和阿拉伯树胶;和漱口剂，其包含活性成分在合适的液体载体中。
[0164] 根据本发明用于局部给药的药物组合物是任选地配制成软膏，乳膏，混悬液，洗 液，粉剂，溶液，糊剂，凝胶剂，喷雾剂，气雾剂或油。在可选的实施方式中，局部制剂包含贴 剂或敷料，比如绷带或用活性成分浸渍的胶布，和任选的一种或多种赋形剂或稀释剂。在一 些实施方式中，局部制剂包括增强活性成分通过皮肤或其他受影响的区域的吸收或渗透的 化合物。这样的皮肤渗透增强剂的实施例包括二甲基亚砜(DMS0)和相关的类似物。
[0165] 如果需要，膏基质的水相包括，例如，至少约30%w/w的多羟基醇，即，具有两个或 多个羟基基团的醇，比如丙二醇，丁烷-1，3_二醇，甘露糖醇，山梨糖醇，甘油和聚乙二醇和 其混合物。
[0166] 在一些实施方式中，本发明的油相乳剂是由已知方式已知的成分组成。该相一般 包含单独的乳化剂(或者称为乳化剂(emulgent))，在一些实施方式中也是期望该相进一步 包括至少一种乳化剂与脂肪或油、或与脂肪和油两者的混合物。
[0167] 优选地，亲水性乳化剂与亲脂性乳化剂包括在一起，以便作为稳定剂。在一些实施 方式中，还优选包括油和脂肪。同时，有或没有稳定剂的乳剂组成所谓的乳化蜡，且该蜡与 油和/或脂肪一起组成所谓的乳化软膏基质，其形成乳膏制剂的油性分散相。
[0168] 适合于眼部局部给药的制剂还包括滴眼剂，其中活性成分溶解或混悬于适合的载 体，尤其是对于试剂的水性溶剂。
[0169] 用于直肠给药的制剂可以作为有包含例如，可可脂或水杨酸盐的合适的基质的栓 剂出现。
[0170]适用于阴道给药的制剂可以作为包含除试剂之外的阴道栓剂，乳膏，凝胶，糊剂， 泡沫或喷雾制剂出现，本领域已知这样的载体是适当的。
[0171]适用于鼻给药的制剂，其中载体是固体，包括具有颗粒尺寸的粗颗粒，例如，在约 20至约500微米，其中采用鼻烟的方式给药，即，从保持在靠近鼻子处的粉末的容器快速吸 入(例如，用力的）通过鼻通道。其中载体是液体给药的其他适合的制剂，包括但不限于，鼻 喷雾剂，滴剂或气雾剂喷雾器，并包括试剂的水性溶液或油性溶液。
[0172]适用于肠胃外给药的制剂包括水性和非水性的等渗无菌注射液，其可以包含抗氧 化剂，缓冲剂，抗菌剂和使制剂与意图接受者的血液等渗的溶质;且可以包括混悬剂和增稠 剂的水性的和非水性的无菌混悬液，和脂质体或其他微粒体系，其被设计成使化合物靶向 至血液组分或一种或多种器官。在一些实施方式中，制剂在单位剂量或多剂量密闭容器中 出现/配制，例如，安瓿和小瓶，并可以储存在冷冻-干燥(冻干)条件，仅需要在使用之前立 即加入无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和悬浮液可以从前述种类的无菌粉末， 颗粒和片剂制备。
[0173] 优选的单位剂量制剂是那些包含药剂的日剂量或单位，日亚剂量，如本文以上记 载的，或其合适的分数试剂。
[0174] 应当理解除了上述特别提到的成分之外，本发明的制剂可以包括与讨论中的制剂 类型有关的本领域常规的其他试剂，例如，适用于口服给药的那些可以包括这样的作为甜 味剂，增稠剂和调味剂的进一步的试剂。还认为本发明的试剂，组合物和方法是与其他合适 的组合物和疗法结合的。另外其他的制剂任选地包括食品添加剂(合适的甜味剂，调味剂， 着色剂等），植物营养素(例如，亚麻籽油），矿物质(例如，Ca，Fe，K等），维生素和其它可接受 的组合物(例如，共辄亚油酸），增量剂，和稳定剂等。
[0175] C.示例性给药途径和剂量考量
[0176] 已知各种递送系统并可用于给药本发明的治疗剂(例如，如上所述的示例性化合 物），例如，脂质体胶囊，微粒，微胶囊，受体介导的胞吞作用等。递送的方法包括，但不限于， 动脉，肌肉内，静脉内，鼻内，和口服途径。在【具体实施方式】中，可能需要局部给药本发明的 药物组合物到需要治疗的区域;这可以通过，例如，并不以限制的方式在手术期间局部灌 输，注射，或借助导管实现。
[0177] 所鉴定的试剂可以向易于或处于发展中的靶细胞病理性生长危险和相关病症的 受试者或个体给药。当试剂给药至受试者，比如小鼠，大鼠或人类患者，可以向药学上可接 受的载体中加入试剂并全身或局部给药至受试者。为了鉴别可以有益地治疗的患者，从患 者中除去组织样本并测定细胞对于试剂的灵敏度。
[0178] 治疗量是经验确定的并随被治疗的病理，被治疗的受试者和试剂的有效性和毒性 改变。当递送至动物时，该方法可用于进一步确认试剂的有效性。动物模型的一个例子是 MLR/MpJ-lpr/lpr( "MLR-lpr"）（从Jackson Laboratories，Bar Harbor，Maine可得）qMLR-lpr小鼠建立系统性自身免疫性疾病。可选地，通过诱导肿瘤生长可以建立其他动物模型， 例如，通过对裸小鼠皮下接种约1〇 5至约1〇9过度增殖的，肿瘤或如本文所述的靶细胞。当肿 瘤被建立，给药本文所述化合物，例如，通过在肿瘤周围进行皮下注射。测量肿瘤以确定肿 瘤尺寸的减少是在两个维度上利用游标卡尺(venier caliper)每周两次进行。其他动物模 型也可以适当使用。对于上述疾病和病症的这样的动物模型是本领域熟知的。
[0179] 在一些实施方式中，体内给药是以一次剂量，连续地或间歇地在整个治疗过程中 实现的。确定最有效的方式和给药剂量的方法是本领域技术人员熟知的并随疗法使用的组 合物，疗法的目的，被治疗的靶细胞，和被治疗的受试者而改变。单次或多次给药随治疗医 生选择的剂量水平和模式进行，
[0180]合适的剂量制剂和给药试剂的方法是本领域技术人员容易确定的。优选地，化合 物在在约0.01mg/kg至约200mg/kg给药，更优选地在约0. lmg/kg至约100mg/kg，甚至优选地 在约0.5mg/kg至约50mg/kg。当本文所述化合物是与另一种试剂(例如，作为敏化剂)联合给 药时，有效量可以小于当试剂单独使用时的量。
[0181]药物组合物可以口服，鼻内，非肠道或通过吸入疗法给药，并可以采用片剂，锭剂， 颗粒剂，胶囊剂，丸剂，安瓿，栓剂或气溶胶形式。它们还可以采用活性成分在水性或非水性 稀释剂，糖浆，颗粒或粉末中的混悬液，溶液和乳剂。除了本发明的试剂之外，药物组合物还 可以包含其他药学上的活性化合物或多种本发明的化合物。
[0182] 更特别地，本发明的试剂也指这里的活性成分，可以通过任何合适的途径用于疗 法给药，但不限于，口服，直肠，鼻，局部(包括但不限于，透皮，气雾，口腔和舌下），阴道，胃 肠外(包括但不限于皮下，肌内，静脉内和皮内）和肺。也可以理解优选地途径随接受者病症 和年龄以及被治疗的疾病改变。
[0183] 理想地，试剂应被给药以实现在疾病部位活性化合物的浓度峰值。这可以通过如 下方式实现，例如，通过试剂的静脉内注射，任选地在盐水中，或通过口服给药，例如，作为 包含活性成分的片剂，胶囊剂或糖浆。
[0184] 可以通过持续的灌注维持试剂所希望的血液水平，以提供在疾病组织中治疗量的 活性成分。有效组合的使用是意图提供治疗组合，其需要比当单独使用每一单个治疗化合 物或药物时所需要的更低的每个组分总剂量，其由此降低不利影响。
[0185] D.示例性联合给药途径和剂量考量
[0186] 本发明还包括涉及本文所述的化合物与一种或多种额外的活性试剂联合给药的 方法。确实，本发明进一步的方面提供通过联合给药本发明的化合物用于增强现有技术疗 法和/或药物组合物的方法。在联合给药过程中，可以同时或顺序给药药剂。在一个实施方 式中，本文所述化合物是在其他活性试剂之前给药。给药的药物制剂和模型可以是上述那 些的任何一种。此外，两种或多种联合给药的化学药剂，生物药剂或辐射可以使用不同模型 或不同制剂分别给药。
[0187] 待联合给药的一种或多种药剂取决于待治疗病症的类型。例如，当被治疗的病症 是癌症，额外的药剂可以是化疗剂或辐射。当被治疗的病症是免疫障碍，额外的药剂可以是 免疫抑制剂或抗炎剂。当被治疗的病症是慢性炎症，额外的药剂可以是抗炎剂。待联合给药 的额外的药剂，比如抗癌，免疫抑制，抗炎，可以是本领域已知的任何一种药剂，包括但不限 于目前在临床使用的那些。确定辐射治疗合适的类型和剂量也在本领域技术范围之内或可 以相对容易地确定。
[0188] 各种与异常细胞凋亡相关的病症的治疗通常受限于以下两个主要因素：（1)耐药 性的发展(2)已知治疗剂的毒性。在某些癌症中，例如，已经显示出抵抗化学和辐射治疗与 抑制细胞凋亡相关。一些治疗剂具有有害的副作用，包括非特异性淋巴毒性，肾脏和骨髓毒 性。
[0189] 本文所述方法解决了这两个问题。需要增加剂量以达到治疗效果的耐药性，通过 联合给药本文所述化合物与已知试剂得以克服。本文所述化合物使靶细胞对已知药剂(反 之亦然)敏感，并因此达到治疗效果需要更少的这些药剂。
[0190] 要求保护的化合物的致敏功能还解决了与已知治疗剂的毒性作用相关的问题。在 已知药剂有毒性的例子中，希望在所有情况下限制给药剂量，并特别是在那些耐药性已经 增加了必需剂量的情况中。当要求保护的化合物是与已知药剂联合给药时，它们降低了所 需剂量，这又减小了有害作用。 实施例
[0191] 现在一般性地描述本发明，通过参考以下实施例会更容易理解，其仅包括本发明 实施方式某些方面的解释的用途，并不意图限制本发明。除非另有指明，所使用的HPLC方法 如下：Waters Symmetry C-18柱，4.6x 150mm，3.5微米，25°C，1.0mL/min，25分钟梯度5% MeCN于H20 (0 · 1 % TFA)中至95 %MeCN于H20 (0 · 1 % TFA)中，然后95 % MeCN于H20 (0 · 1 % TFA)中 10分钟，并然后平衡至5 %MeCN于H20(0.1 % TFA)中超过5.0分钟。词组"H20(0.1 %TFA)"是本 领域所公认的概念并指包含0.1 % v/v三氟乙酸的水。
[0192] 实施例1-3-氯-N-((3-氯-5-氟苯基）硫代氨甲酰基（carbamothioy 1))苯甲酰胺的 制备
[0194]在乙腈(4.5L)中溶解3-氯苯甲酰氯(200g，1.14mol)并将含有该混合物的反应器 于冰/水浴中冷却。向反应混合物中加入硫氰酸钾（122g，1.26mo 1，1.10当量）。15分钟后，将 反应器从冷却浴中取出并将得到的浆液在室温搅拌约1小时。然后，在5分钟内于乙腈 (138mL)中加入作为溶液的3-氯-5-氟苯胺（138mL，1.37mol，1.2当量）。然后反应混合物于 室温搅拌过夜并接着用水(4.30L)淬灭，然后在室温搅拌1小时。通过过滤收集得到的固体 并用乙腈/水（1/1体积混合物，780mL)漂洗。在60 °C真空下干燥固体以提供390g (99 %产率） 标题化合物，作为固体。4 Mffi(DMS0-d6)12.5(s，lH)，11.9(s，lH)，8.01(t，lH，J = 1.8)， 7.89((1，1!1，了 = 7.8)，7.69(111，3!〇,7.56(七，1!1，了 = 7.8)，7.34(扣，1!1，了 = 8.7，1.8)。册1^：:在 23.73分钟纯度>99 %。
[0195] 实施例2-结晶3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1H-吡唑-3-基） 氨基)亚甲基)苯甲酰胺丙酮溶剂化物的制备
[0197] 于叔丁基甲基醚（TBME) (1. 1L)中的3-氯-N-((3-氯-5-氟苯基）硫代氨甲酰基 (〇&1^3111〇1:11；[071))苯甲酰胺（758,2191]11]1〇1)混悬液加热至50<€。然后，加入5-(三氟甲基）-1H-吡唑-3-胺（39.6 8,262111111〇1，1.20当量）和1(3-二甲基氨基丙基）-^-乙基碳二亚胺 (EDC)(64·2g，328mmol，l·50当量）。得到的反应混合物在50°C搅拌l小时并用Et0Ac(l·0L) 和水(1.0L)稀释。有机提取物用饱和的氯化钠水溶液(0.5L)洗涤，干燥(Na2S〇4)，过滤，并浓 缩。得到的残渣用Et0Ac(300mL)稀释并将该混合物升温至50°C，然后通过硅藻土过滤。然 后，滤液浓缩至约75mL并用己烷(750mL)缓慢稀释。得到的混合物在室温搅拌1小时并过滤。 得到的固体在丙酮（l〇〇mL)中加入，过滤，用己烷(lOOmL)稀释，且加热得到的混合物直到产 生澄清的溶液。然后，进一步用己烷(300mL)稀释混合物并于室温搅拌过夜。通过过滤收集 得到的固体，用己烷（lOOmL)漂洗并于室温在真空下干燥以得到（25. lg，25%产率)结晶3-氯-N_( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺丙 酮溶剂化物。4 NMR分析表明3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1H-吡唑-3_基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺对丙酮的摩尔比为3比2。标题化合物的咕NMR(DMS0-d 6):13.3 (s，lH)，10.7(s，lH)，10.0(s，lH)，7.90(s，lH)，7.82(d，lH，J = 7.6)，7.69(d，lH，J = 8.4)， 7.58(111，2!〇,7.07((1，1!1，了 = 8.4)，6.03(8，1!〇,2.05(8,4!1，丙酮）。冊1^：:在26.08分钟纯度 97.6%〇
[0198] 标题组合物的X-射线粉末衍射图提供于图1。标题组合物的示差扫描量热法曲线 与热重量分析曲线提供于图2。图1中的X-射线粉末衍射图的表格化特征提供于下表1，其列 出衍射角度2Θ，平面间距离d，和相对强度(表示为对于最强峰的百分比）。
[0199] 表1-X-射线粉末衍射图数据。
[0202] 实施例3-3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基）氨基）（（5-(三氟甲基）-1H-吡唑-3-基）氨 基)亚甲基)苯甲酰胺的晶型I的制备
[0203] 干燥(60°C/10托)3_氯- N-(((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1H-吡唑-3-基）氨基）亚甲基）苯甲酰胺，丙酮溶剂化物（16g)得到3-氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基)氨基） ((5-(二氟甲基)-1H-P比唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺，为结晶固体，在本文中被指定为 型I。分析性分析没有鉴定结晶固体中溶剂化物分子。标题化合物的 1H NMR(DMS〇-d6): δ13.3 (s，lH)，10.7(s，lH)，10.0(s，lH)，7.90(s，lH)，7.82(d，lH，J = 7.6)，7.69(d，lH，J = 8.4)， 7.58(111，2!〇,7.07((1，1!1，了 = 8.4)，6.03(8，1!〇。册1^：:在26.08分钟纯度97.6%。
[0204] 标题组合物的X-射线粉末衍射图提供在图3中。标题组合物的示差扫描量热法曲 线与热重量分析曲线提供在图4中。图3中的X-射线粉末衍射图的表格化特征在下表2中提 供，其列出衍射角度2Θ，平面间距离d，和相对强度(表示为对于最强峰的百分比）。
[0205]表2-X-射线粉末衍射图数据
[0208] 实施例4-3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基）氨基）（（5-(三氟甲基）-1H-吡唑-3-基）氨 基)亚甲基)苯甲酰胺的晶型II的制备
[0209] 在Et0H(5mL)中溶解3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3_基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺，丙酮溶剂化物(0.500g)并升温至40°C。混合物通过硅藻土过 滤澄清并然后用EtOH/水（1 /1体积，1.25mL)在40 °C稀释。混悬液进一步用EtOH/水（1/1体 积，5mL)在40°C稀释，并然后允许混合物冷却至室温并连续搅拌4天。过滤得到的混悬液，用 EtOH/水（1/1体积，5mL)漂洗，并干燥(60°C/10托）以得到3-氯-N_( ((3-氯_5_氣苯基)氨基） ((5-(二氟甲基)-1H-P比唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺，为结晶固体，在本文中被指定为 型II。分析性的分析没有鉴定结晶固体中溶剂化物分子。
[0210]标题组合物的X-射线粉末衍射图提供在图5中。标题组合物的示差扫描量热法曲 线提供在图6中。图5的X-射线粉末衍射图的表格化特征在以下表3中提供，其列出衍射角度 2Θ，平面间距离d，和相对强度(表示为对于最强峰的百分比）。
[0211]表3-X-射线粉末衍射图数据
[0215] 实施例5-制备3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1H-吡唑-3-基） 氨基)亚甲基)苯甲酰胺的晶型II可选的步骤
[0216] 在Et0H(875mL)中溶解3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基）氨基）（（5-(三氟甲基）-1Η-吡 唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺丙酮溶剂化物（176g)并升温至40°C。将混合物通过硅藻土 过滤澄清并然后用EtOH/水（1/1体积混合物，175mL)在40 °C稀释。向混合物中加入3-氯-Να (3-氯-5-氟苯基) 氨基 ）（（5-( 三氟甲基 )-1Η-吡唑-3-基) 氨基） 亚甲基) 苯甲酰胺的型 II 结晶(437mg)。然后，混悬液进一步用EtOH/水（1/1体积混合物，700mL)在40°C于40分钟内稀 释，并然后允许混合物冷却至室温并连续搅拌过夜。最后，过滤得到的混悬液，分离的残渣 用EtOH/水（1 /1体积混合物，500mL)漂洗并干燥(60 °C /10托）以得到130g (74 %回收率）3-氯-N_( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺为 结晶固体型II。分析性的分析没有鉴定结晶固体中溶剂化物分子。
[0217]标题组合物的X-射线粉末衍射图提供在图7中。标题组合物的示差扫描量热法曲 线提供在图8中。图7的X-射线粉末衍射图的表格化特征在以下表4中提供，其列出衍射角度 2Θ，平面间距离d，和相对强度(表示为对于最强峰的百分比）。
[0218]表4-X-射线粉末衍射图数据
[0221 ] 实施例6-3-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基）氨基）（（5-(三氟甲基)-1H-吡唑-3-基)氨 基)亚甲基-13C)苯甲酰胺-1，2,3,4,5,6-13C6的制备。
[0222] 根据以下步骤制备标题化合物。
[0223] 部分1:3-氯苯甲-1，2，3，4，5，6-13C6酸的制备
[0225] 在-78°C在氮气氛下，向于无水四氢呋喃（12mL)中的1-氯-3-碘苯-1，2,3,4,5,6_ 13C6(1 g，4. lmmo 1)溶液中在5分钟内滴加2.0M于四氢呋喃中的氯化异丙基镁溶液（2.3mL， 4.5mmol)。得到的混合物在-78°C搅拌10分钟，然后将二氧化碳气体鼓泡通入溶液中，在整 个反应中保持二氧化碳气泡稳定的气流。然后，反应混合物在-78°C搅拌15分钟，然后从冷 却浴除去反应器。一旦反应混合物升温至室温，用二乙基醚(40mL)稀释反应溶液且产物萃 取到2M氢氧化钠(3x 20mL)中。合并水性提取物并通过将容器放置于冰浴中冷却，然后将在 冷却器中的水性提取物用6M盐酸酸化。用二乙基醚(3x 20mL)从水性提取物中萃取产物。合 并有机提取物并用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩以提供标题化合物（600mg， 90%)』51 m/z 161·07，163·04(Μ-Η) -。
[0226] 部分II:制备3-氯-Ν_((3-氯-5-氟苯基)硫代氨甲酰基(carbam〇thi 〇yl)-13C)苯甲 酰胺-1，2,3,4,5,6-13C 6
[0228] 于0<€在氮气氛下，向3-氯苯甲-1，2,3,4,5,6_13〇6酸(0.448,2.71111]1〇1)于无水二氯 甲烧（1 OmL)的混悬液中加入草酰氯(0.34mL，4. lmmo 1)，随后加入无水N，N-二甲基甲酰胺 (30yL)。注意到一些气体逸出。从冷却浴除去反应器，且允许反应混合物升温至室温。在反 应混合物中悬浮的固体缓慢溶解。然后，将反应混合物在室温搅拌2小时。然后，在真空中除 去挥发物。得到的残渣用甲苯(3x)共沸，然后用氯仿(3x)共沸。在乙腈(8mL)中溶解得到的 油状物以提供用冰水浴冷却的混合物。向冷却的溶液中一次性加入硫氰酸钾_ 13C(0.28g， 2.SmmolhlS分钟后，从冷却浴中除去反应器且反应混合物在室温搅拌1小时。向得到的混 悬液中加入3-氯-5-氟苯胺(0.39g，2.7mmol)。在加入苯胺之后，反应混合物变得非常粘稠 并用乙腈(5mL)稀释。反应混合物于室温搅拌1小时。然后，加入水（10mL)，其导致固体形成。 过滤固体，并然后用水洗涤固体并在真空的烘箱中于50°C干燥过夜以提供标题化合物 (820mg，86% 产率）。
[0229] 部分m :3_氯-N-(( (3-氯-5-氟苯基）氨基）（（5-(三氟甲基）-1H-吡唑- 3-基）氨 基)亚甲基-13C)苯甲酰胺-1，2，3，4，5，6-13C 6的制备
[0231] 于35°C，向3-氯-N_((3-氯-5-氟苯基)硫代氨甲酰基carbam〇thi 〇yl-13C)苯甲酰 胺-1，2,3,4,5,6」3〇5(0.77 8,2.2!11111〇1)于甲基叔丁基醚(51^)的混悬液中加入5-(三氟甲 基)_1H_吡唑_3_胺(0·4g，2·6mmol)，随后加入N_(3_二甲基氛基丙基)-乙基碳二亚胺盐 酸盐(0.65g，3.3mmol)。得到的混悬液在35 °C搅拌3小时，在此期间固体从反应器侧面周期 性地被刮落。然后，将反应混合物在甲基叔丁基醚和盐水中分配，分离有机层并用硫酸钠干 燥，通过硅藻土过滤，然后在粗二氧化硅上浓缩。混合物通过柱色谱法纯化，用0 %至10 % v/ v梯度的在己烷中的乙酸乙酯洗脱以提供标题化合物(320mg，30%产率）。
[0232] 实施例7-4-氯-N-((3-氯-5-氟苯基)硫代氨甲酰基(CARBAM0THI0YL))苯甲酰胺的 制备
[0234] 在乙腈(230mL)中溶解4-氯苯甲酰氯（10.2g，58.5mmol)并将含有该混合物的反应 器在冰/水浴中冷却。向该混合物中加入硫氰酸钾(6.25g，64.4mo 1，1.10当量）。15分钟后， 将反应器从冷却浴中取出并将得到的反应浆液在室温搅拌约1小时。将3-氯-5-氟苯胺 (7.0511^，70.2111 〇1，1.2当量）于乙腈（71^)中作为溶液在5分钟内加入至反应混合物中。然 后，反应混合物于室温搅拌过夜，并然后用水(230mL)淬灭，且得到的混合物在室温搅拌1小 时。过滤混合物以收集固体，分离的固体用乙腈/水（1/1体积混合物，50mL)漂洗，且得到的 固体于60°C在真空中干燥以提供20.5g标题化合物，为固体。标题化合物的 1H ^R(DMS〇-d6):Sl2.5(s，lH)，11.8(s，lH)，8.01(t，lH，J=1.8)，7.96(d，2H，J = 8.6)，7.67(m，2H)， 7.59((1，2!1，了 = 8.6)，7.33((1，1!1，了 = 8.4)。册1^：:在23.52分钟纯度>99%。
[0235] 实施例8-4-氯-N-(((3-氯-5-氟苯基）氨基）（（5-(三氟甲基）-1H-吡唑-3-基）氨 基)亚甲基)苯甲酰胺的制备
[0237] 加热于TBME( 500mL)中4-氯-N-( (3-氯-5-氟苯基）硫代氨甲酰基 (〇&1^111〇1:11；[071))苯甲酰胺(20.5区，59.7_31)的混悬液至50°0。加入5-(三氟甲基)-1!1-[1比 唑-3-胺（10.8 8,71.711111101，1.20当量）和^(3-二甲基氨基丙基）4/-乙基碳二亚胺化00 (17.6g，89.6mmol，1.50当量）。得到的反应混合物于40°C搅拌3小时，然后用饱和氯化钠水 溶液(0.5L)稀释。分离得到的混合物的有机层，干燥(Na 2S04)，过滤，并浓缩。得到的残渣用 Et0Ac(20mL)稀释，并将该混合物升温至50°C，然后用己烷(20mL)稀释。然后，去除热源并允 许混合物冷却至室温，然后向反应器应用冰/水浴以产生沉淀。通过过滤收集得到的固体， 用E tOAc/己烷（1 /1体积混合物，20mL)漂洗并于室温在空气中干燥。然后，固体溶解在EtOH (80mL)中，且得到的混合物升温至40 °C。在40分钟内向混合物中缓慢加入EtOH/水（1 /1体积 混合物，80mL)。然后，从反应器除去热源且反应混合物于室温搅拌2天。然后，过滤反应混合 物，收集到的固体用EtOH/水（1/1体积混合物，15mL)漂洗，并干燥(60°C/10托）以得到标题 化合物（15.2.g，57%产率）。标题化合物的咕 Mffi(DMS0-d6)Jl3.3(s，lH)，10.7(s，lH)， 10.0(s，lH)，7.90(s，lH)，7.90(d，2H，J = 8.4)，7.72(d，lH，J=11.5)，7.63(m，3H)，7.07(d， 1!1，了 = 8.5)，6.00(8，1!0。册1^：:在26.02分钟纯度98.6%。
[0238] 实施例9-对于ATP酶和RAMOS细胞的生物活性
[0239] 测试示例性化合物对于抗Ffo-ΑΤΡ酶和Ramos细胞的活性。实验步骤和结果如下所 述。
[0240] 部分 I
[0241] 通过测量化合物抑制ATP合成的能力，测试在下表5中的化合物对于抗FiFo-ATP酶 的活性。此外，评价化合物在Ramos细胞中的细胞毒性。生物活性的试验结果显示在下表5 中。根据描述在K.M. Johnson et al.Chemistry&Biology 2005,12,485_496的步骤测量在 合成ATPmFiFo-ATP酶活性的抑制和在Ramos细胞中的细胞毒性。
[0242] 表 5
[0243]
[0244]
[0245] 部分 II
[0246] 通过多次进行描述于部分I中的测定步骤，评价化合物3-氯-N_( ((3-氯-5-氟苯 基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺对于FiFo-ATP酶和Ramos 细胞的活性。特别地，通过在12个独立的实验中测量化合物抑制ATP合成的能力评价抗FiFo-ATP酶活性。在13个独立的实验中测量对于Ramos细胞的细胞毒性。与部分I中的步骤一致， 在二甲基亚砜中溶解化合物以形成应用于FiFo-ATP酶或Ramos细胞的溶液，并根据描述于 K.M.Johnson et al.Chemistry&Biology 2005，12,485_496中的步骤进行测定。
[0247] 从多次重复的实验步骤平均IC5Q值(在合成ATP中抑制Ffo-ΑΤΡ酶活性）。用于在合 成ATP中抑制FiFo-ATP酶活性的3-氯-N-( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(三氟甲基)-1Η-吡 唑-3-基)氨基)亚甲基)苯甲酰胺的平均IC5Q值确定为27 ± 1.7nM。
[0248] 类似地，从多次重复的实验步骤平均EC5Q值(对于Ramos细胞的细胞毒性）。3_氯-Να (3-氯-5-氟苯基 ） 氨基 ）（（5-( 三氟甲基 ）-1Η-吡唑-3-基） 氨基） 亚甲基 ） 苯甲酰胺对于 Ramos细胞的细胞毒性的平均EC5Q值确定为59±6nM。
[0249] 实施例10-细胞色素 P450 2D6的抑制
[0250]测试以下表6中的化合物对于抗细胞色素 P450 2D6(以下"CYP2D6"）的活性。步骤 和结果如下所述。
[0251] 部分I-试验步骤：
[0252] 于磷酸钾缓冲液（10mM)中制备含有人肝微粒体(Gibco,0.2mg/mL)和MgCl2(5mM) 的主溶液。向微粒体溶液的等分部分（169yL)中加入于乙腈（lyL)和DMS0 (lyL)中的试验化 合物以提供〇，〇. 005，0.05，0.25，1，5，10，和25μΜ的最终试验化合物浓度。
[0253] 加入于超纯水(20yL)中的NADPH(lOmM)，且于37°C培养该混合物30分钟。然后通过 加入溶解在lyL乙腈和9yL超纯水中的酶底物(右美沙芬)开始酶反应。最终底物浓度为10μ Μ〇
[0254] 20分钟后，用3体积含有丙咪嗪(200nM)，拉贝洛尔（200nM)，和酮洛芬(2μΜ)的冷甲 醇作为内标物稀释培养混合物。样品在16,000g离心10分钟，然后除去等分部分的上清液 (200μυ并通过LC/MS/MS分析。
[0255] 使用Shimadzu HPLC和API 4000质谱仪进行LC/MS/MS分析两次。液相色谱利用装 有保护柱的Phenomenex C18，5μηι，50x 2mm柱。试剂A是含有0· 1 %v/v甲酸的乙腈。溶剂B是 含有0.1 % v/v甲酸的水。以每分钟0.5mL进行洗脱:0-2分钟，梯度5 %溶剂A/95 %溶剂B至 100 %溶剂A; 2.0-2.2分钟，100 %溶剂A; 2.2-2.4分钟，梯度100 %溶剂A至5 %溶剂A/95 %溶 剂B; 2 · 4-3 · 0分钟，溶剂5 % A/溶剂B 95 %。
[0256] 通过峰面积评价代谢产物的形成，并使用Pri sm 5.0软件(GraphPad)分析数据。将 形成的代谢产物的量对比不含试验化合物的对照组样品绘图作为试验化合物浓度的函数。
[0257] 试验化合物的IC5Q值从绘图中确定，作为在试验化合物赋予50 %抑制代谢产物形 成的浓度。
[0258] 部分II-结果：
[0259] 化合物1和化合物2的IC5Q抑制值在表6中提供。在实验中，化合物1抑制CYP2D6的效 力低于化合物2约3倍。
[0260]表6-在试验化合物给药后三十分钟CYP2D6的抑制
[0262] 援引加入
[0263] 本文提到的每个专利文献和科技文章的全部公开的内容援引加入本文用于所有 目的。
[0264] 等价物
[0265] 本发明可以以其他特定形式体现而不脱离其中的精神和基本特征。因此，前述实 施方式在各方面认为是示例性的，而非限制本文所述的发明。因此，本发明的范围通过附属 的权利要求而非前述说明书指示，且来自在权利要求等价的含义和范围之内的所有变化均 意图包含在其中之内。
【主权项】
1. 由式I表示的化合物：或几何异构体或互变异构体;或前述任何的药学上可接受的盐或溶剂化物;其中R1是位 于它所连接的苯基的间位或对位上的氯基团。2. 权利要求1的化合物，其中所述化合物是式I的化合物或几何异构体或互变异构体， 或前述任何的药学上可接受的盐。3. 权利要求1的化合物，其中所述化合物是溶剂化物形式。4. 权利要求1的化合物，其中所述化合物由下式表示：或几何异构体或互变异构体;前述任何的药学上可接受的盐。5. 权利要求1的化合物，其中所述化合物由下式表示：或几何异构体或互变异构体;或前述任何的溶剂化物。6. 权利要求5的化合物，其中所述化合物是丙酮溶剂化物形式。7. 权利要求1的化合物，其中所述化合物由下式表示： 或几何异构体或互变异构体。8. 权利要求1的化合物，其中所述化合物由下式表示：9. 结晶化合物3-氯-N_( ((3-氯-5-氟苯基）氨基）（（5_(二氟甲基比唑-3-基)氨 基)亚甲基)苯甲酰胺。10. 权利要求9的结晶化合物，其中所述结晶化合物显示出包含在以下衍射角度(2Θ)的 峰的X-射线粉末衍射图：6·2±0·2,7·1±0·2,9·4±0·2，10·7±0·2，15·6±0·2，19·0土 0.2,20.0±0.2,和 25.2±0.2。11. 权利要求10的结晶化合物，其中在所述衍射角度(2Θ)的所述峰的相对强度是至少 30% 〇12. 权利要求10的结晶化合物，其特征在于根据衍射角度2Θ，平面间距离d，和相对强度 (表示为对于最强峰的百分比)表示的以下的X-射线粉末衍射图：13. 权利要求10的结晶化合物，其中所述X-射线粉末衍射图是基本上如图3显示。14. 权利要求9-13中任一项的结晶化合物，其中所述结晶化合物具有由示差扫描量热 法确定的范围从约157摄氏度至约161摄氏度的熔点开始。15. 权利要求9-13中任一项的结晶化合物，其中所述结晶化合物具有由示差扫描量热 法确定的在约159摄氏度的熔点开始。16. 权利要求9-13中任一项的结晶化合物，其中所述结晶化合物具有基本上与图4显示 相同的示差扫描量热法曲线。17. 权利要求9的结晶化合物，其中所述结晶化合物显示出包含在以下衍射角度(2Θ)的 峰的X-射线粉末衍射图：6·3±0·2,7·3±0·2，11·0±0·2，12·8±0·2，16·9±0·2，19·2± 0·2,20·6±0·2,22·2±0·2,25·7±0·2,26·0±0·2,和 35.7±0.2。18. 权利要求17的结晶化合物，其中在所述衍射角度(2Θ)的所述峰的相对强度是至少 15%〇19. 权利要求17的结晶化合物，其特征在于根据衍射角度2Θ，平面间距离d，和相对强度 (表示为对于最强峰的百分比)表示的以下X-射线粉末衍射图：20. 权利要求17的结晶化合物，其中所述X-射线粉末衍射图是基本上如图5显示的。21. 权利要求17-20中任一项的结晶化合物，其中所述结晶化合物具有由示差扫描量热 法确定的范围从约158摄氏度至约165摄氏度的熔点开始。22. 权利要求17-20中任一项的结晶化合物，其中所述结晶化合物具有基本上与图6显 示相同的示差扫描量热法曲线。23. 结晶化合物3-氯-N_( ((3-氯-5-氟苯基)氨基）（（5-(二氟甲基)-IH-R比唑-3-基)氨 基)亚甲基)苯甲酰胺丙酮溶剂化物，显示出包含在以下衍射角度(2Θ)的峰的X-射线粉末衍 射图：6·2±0·2,8·3±0·2，14·7±0·2，17·5±0·2，17·9±0·2，18·5±0·2,20·2±0·2,20·9 ±0.2,23.5±0.2，和25.9±0.2。24. 权利要求23的结晶化合物，其中在所述衍射角度(2Θ)的所述峰的相对强度是至少 15%〇25. 权利要求23的结晶化合物，其特征在于根据衍射角度2Θ，平面间距离d，和相对强度 (表示为相对最强峰的百分比)表示的以下X-射线粉末衍射图：26. 权利要求23的结晶化合物，其中所述X-射线粉末衍射图是基本上如图1显示的。27. 权利要求23-26中的任一项结晶化合物，其中所述结晶化合物具有由示差扫描量热 法确定的在约159摄氏度的熔点开始。28. 权利要求23-26中的任一项结晶化合物，其中所述结晶化合物具有与图2显示基本 相同的示差扫描量热法曲线。29. 药物组合物，包含权利要求1-3中任一项的化合物和药学上可接受的载体。30. 药物组合物，包含权利要求4的化合物和药学上可接受的载体。31. 药物组合物，包含权利要求5或6的化合物和药学上可接受的载体。32. 药物组合物，包含权利要求7或8的化合物和药学上可接受的载体。33. 药物组合物，包含权利要求9的结晶化合物和药学上可接受的载体。34. 药物组合物，包含权利要求10-16中任一项的结晶化合物和药学上可接受的载体。35. 药物组合物，包含权利要求17的结晶化合物和药学上可接受的载体。36. 药物组合物，包含权利要求18-22中任一项的结晶化合物和药学上可接受的载体。37. 治疗障碍的方法，所述障碍选自：免疫障碍，炎性障碍，心血管疾病，骨髓瘤，淋巴 瘤，癌症，和细菌感染，包括向有需要其的患者给药治疗有效量的权利要求1-28中任一项的 化合物，以改善障碍的症状。38. 权利要求37的方法，其中所述障碍是类风湿性关节炎，银肩病，慢性移植物抗宿主 疾病，急性移植物抗宿主病，克罗恩病，炎性肠病，多发性硬化症，全身性红斑狼疮，乳糜泻， 特发性血小板减少性血栓形成紫癜，重症肌无力，斯耶格伦氏综合症，硬皮病，溃疡性结肠 炎，哮喘，葡萄膜炎或表皮增生。39. 权利要求37的方法，其中所述障碍是克罗恩病或溃疡性结肠炎。40. 权利要求37的方法，其中所述障碍是软骨炎症，骨退化，关节炎，少年关节炎，幼年 型类风湿性关节炎，少关节幼年型类风湿性关节炎，多关节幼年型类风湿性关节炎，全身发 作幼年型类风湿性关节炎，青少年型强直性脊椎炎，青少年肠病性关节炎，青少年反应性关 节炎，青少年Reter氏综合征，SEA综合症，青少年型皮肌炎，青少年银肩病性关节炎，青少年 硬皮病，青少年全身性红斑狼疮，青少年脉管炎，少关节类风湿性关节炎，多关节炎类风湿 性关节炎，全身性发作类风湿性关节炎，强直性脊柱炎，肠病性关节炎，反应性关节炎， Reter氏综合症，皮肌炎，牛皮癣性关节炎，脉管炎，脊髓炎（myol itis )，多发性肌炎 (口〇171117〇1；[1^8)，皮肌炎（(161'1]^1：01117〇1；[1^8)，骨关节炎，结节性多动脉炎，韦格纳肉芽肿 病，动脉炎，风湿性多肌痛，结节病，硬化症，原发性胆管纤维硬化，硬化性胆管炎，皮炎，特 应性皮炎，动脉粥样硬化，斯蒂尔（Still)疾病，慢性阻塞性肺病，吉兰-巴尔（Guillain-Barre)疾病，I型糖尿病，格雷夫斯疾病，艾迪生氏(Addison)疾病，雷诺氏（Raynaud)现象， 或自身免疫性肝炎。41. 权利要求37-40中任一项的方法，其中所述患者是人类。42. 抑制F1Fo-ATP酶的方法，包含暴露所酶于权利要求1-28中任一项的化合 物以抑制所述F1Fo-ATP酶。43. 权利要求42的方法，其中所述F1Fo-ATP酶是线粒体F1Fo-ATP酶。44. 权利要求37-42中任一项的方法，其中所述化合物是权利要求4的化合物。45. 权利要求37-42中任一项的方法，其中所述化合物是权利要求7的化合物。46. 权利要求37-42中任一项的方法，其中所述化合物是权利要求9的化合物。47. 权利要求37-42中任一项的方法，其中所述化合物是权利要求10的化合物。48. 权利要求37-42中任一项的方法，其中所述化合物是权利要求17的化合物。
【文档编号】C07D231/38GK105899489SQ201480072404
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2014年12月10日
【发明人】A·R·赫德, C·B·泰勒, J·王, P·周
【申请人】莱斯拉公司