一种从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Rc的方法
【专利摘要】一种从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Rc的方法，包括以下步骤：（1）硅胶拌样：将甜菊糖苷精制母液进行预热处理，趁热加入硅胶，搅拌均匀，烘干，得干燥拌样硅胶；（2）装柱：将干燥拌样硅胶装入层析柱中，压紧；（3）预洗：用乙酸乙酯进行预脱，收集预洗流出液，浓缩，将乙酸乙酯回收干净；（4）洗脱：用乙酸乙酯和乙醇的混合物进行洗脱，收集洗脱流出液，浓缩，将乙酸乙酯和乙醇回收干净，得RC粗品；（5）精制：将RC粗品用有机溶剂加热溶解，冷却，析晶，过滤，干燥，得RC纯品。本发明在获得高纯度的RC同时，还可以获得大量甜菊糖苷的主要成分ST和RA，资源利用率高，且具有低成本、高收率，适宜于工业化生产等优点。
【专利说明】
一种从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Re的方法
技术领域
[0001 ]本发明涉及一种甜菊糖苷的分离方法，特别是涉及一种从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Re的方法。
【背景技术】
[0002]甜菊糖苷天然零热量，并且对血糖没有影响，因此可以取代超重、肥胖人群和糖尿病患者日常饮食中的甜食和碳水化合物摄入的热量。目前，甜菊糖苷的安全性已得到全球监督机构的认可，包括JECFA、EFSA、H)A和FSANZ，甜菊糖苷作为一种健康、安全的天然甜味剂，未来将广泛应用于食品饮料行业中。根据我国最新的《食品安全国家标准》，甜菊糖苷中的主要糖苷为甜菊苷(ST)和瑞鲍迪苷A(RA)，其他已知糖苷包括瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C(Re)、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷。其中关于主要糖苷ST和RA的研究和应用目前已经比较成熟，其他已知糖苷的研究和应用比较少。
[0003]瑞鲍迪苷C(Rc)的甜度大约是蔗糖的50倍，并且具有明显的后苦味，其本身虽不作为甜味剂使用，但是可以用作其他甜味剂的风味增强剂。例如，在含糖饮料中添加200-300ppm的Re时，可减少30-50%的白糖使用量，使饮料保持同样的甜度的同时还增加了饮料的清香口感。最近国外有研究表明，瑞鲍迪苷C(Rc)具有降压、降血脂、抗过敏和预防心血管疾病等保健功能。
[0004]CN102321132A公开了一种甜菊糖苷RC粗提物的提纯方法，通过大孔吸附树脂吸附糖液，用乙醇洗脱并分段收集，确定目标产品收集段浓缩干燥，得到含量30%的RC粗提物。该方法虽简单，但是由于大孔吸附树脂吸附选择性的局限，难以制备高纯度的RC。
[0005]此外，针对目前甜菊糖生产厂家难以反复结晶的甜菊糖苷精制母液，还没有一种有效的处理方法，不利于工业化生产。
【发明内容】
[0006]本发明所要解决的技术问题是，提供一种从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Re的方法。
[0007]进一步，本发明所要解决的技术问题是，提供一种低成本、高收率，适宜于工业化生产的从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Re的方法。
[0008]本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:一种从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Re的方法，包括以下步骤:
(I)硅胶拌样:将甜菊糖苷精制母液进行预热处理，趁热加入硅胶，搅拌均匀，烘干，得干燥拌样硅胶；
(2 )装柱:将干燥拌样硅胶装入层析柱中，压紧；
(3)预洗:用乙酸乙酯进行预洗，收集预洗流出液，浓缩，将乙酸乙酯回收干净，得ST和RA的混合物；
(4 )洗脱:用乙酸乙酯和乙醇的混合物进行洗脱，收集洗脱流出液，浓缩，将乙酸乙酯和乙醇回收干净，得RC粗品；
(5)精制:将RC粗品用有机溶剂加热溶解，冷却，析晶，过滤，干燥，得RC纯品。
[0009]进一步，步骤(I)中，预热的温度30?50 °C，预热的时间为0.5?2.0小时。
[0010]进一步，步骤(I)中，所述硅胶的用量为母液重量的I?2倍。
[0011 ]进一步，步骤(I)中，烘干的温度为70?80°C，烘干的时间为9?10小时。
[0012]进一步，步骤(2)中，所述层析柱的高径比为I?20:1，优选8?10:1。
[0013]进一步，步骤(3)中，所述乙酸乙酯的用量为2?1BV，IBV=I个柱床体积，预洗的流速为0.5?2BV/小时，浓缩的温度为60?80°C。
[0014]进一步，步骤(4)中，所述乙酸乙酯和乙醇的混合物中，乙酸乙酯与乙醇的体积比=50?99:50?I ο
[0015]进一步，步骤(4)中，所述乙酸乙酯和乙醇混合物的用量为2?10BV，IBV=I个柱床体积，洗脱的流速为0.5?2BV/小时，浓缩的温度为60?90°C。
[0016]进一步，步骤(5)中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、丙酮、乙酸乙酯、水中的一种或多种。
[0017]进一步，步骤(3)中，所得ST和RA的混合物可通过结晶方法进一步分离ST和RA。
[0018]研究实践表明，利用本发明，可获得高纯度的RC纯品，纯度达98wt%以上；同时，还可以获得大量甜菊糖苷的主要成分ST和RA，极大的提高了资源的利用率。
[0019]本发明打破了现有技术的局限，且具有低成本、高收率，适宜于工业化生产等优点。
【具体实施方式】
[0020]以下结合实施例对本发明作进一步说明。
[0021]实施例1
本实施例包括以下步骤:
(I )硅胶拌样:取甜菊糖苷精制母液5Kg(ST纯度16.0wt%，RA纯度13.5wt%，RC纯度20.5wt%)进行预热处理(温度为50 °C，时间为I小时)，趁热加入8Kg硅胶，搅拌均匀，烘干(温度为75°C，时间为9小时)，得干燥拌样硅胶；
(2 )装柱:将干燥拌样硅胶装入层析柱(高径比1:1)中，压紧；
(3)预洗:用40L乙酸乙酯进行预洗，预洗的流速为IBV/小时，收集预洗流出液，70°C浓缩，将乙酸乙酯回收干净，得ST和RA的混合物1.85Kg(该混合物可通过结晶方法进一步分离ST和RA)；
(4)洗脱:用60L乙酸乙酯和乙醇的混合物进行洗脱，乙酸乙酯与乙醇的体积比=90:10，洗脱的流速为IBV/小时，收集洗脱流出液，80 0C浓缩，将乙酸乙酯和乙醇回收干净，得RC粗品1.3Kg;
(5 )精制:将1.3Kg RC粗品用13L乙醇加热溶解，冷却，析晶，过滤，干燥，得RC纯品0.95Kg，纯度98.5￥七％，此的收率91.2%。
[0022]实施例2
本实施例包括以下步骤:
(I )硅胶拌样:取甜菊糖苷精制母液5Kg(ST纯度16.0wt%，RA纯度13.5wt%，RC纯度20.5wt%)进行预热处理(温度为40°C，时间为1.5小时)，趁热加入1Kg硅胶，搅拌均匀，烘干(温度为70°C，时间为10小时)，得干燥拌样硅胶；
(2)装柱:将干燥拌样硅胶装入层析柱(高径比9:1)中，压紧；
(3)预洗:用60L乙酸乙酯进行预洗，预洗的流速为1.5BV/小时，收集预洗流出液，72 °C浓缩，将乙酸乙酯回收干净，得ST和RA的混合物2.lKg(该混合物可通过结晶方法进一步分离ST和RA)；
(4)洗脱:用75L乙酸乙酯和乙醇的混合物进行洗脱，乙酸乙酯与乙醇的体积比=92:8，洗脱的流速为1.5BV/小时，收集洗脱流出液，85°C浓缩，将乙酸乙酯和乙醇回收干净，得RC粗品 1.25Kg;
(5)精制:将1.25KgRC粗品用125L乙醇(含5%异丙醇)加热溶解，冷却，析晶，过滤，干燥，得 RC 纯品 0.9 IKg，纯度 98.9wt%，RC 的收率 87.8%。
【主权项】
1.一种从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Re的方法，其特征在于，包括以下步骤: (I)硅胶拌样:将甜菊糖苷精制母液进行预热处理，趁热加入硅胶，搅拌均匀，烘干，得干燥拌样硅胶； (2 )装柱:将干燥拌样硅胶装入层析柱中，压紧； (3)预洗:用乙酸乙酯进行预洗，收集预洗流出液，浓缩，将乙酸乙酯回收干净，得ST和RA的混合物； (4)洗脱:用乙酸乙酯和乙醇的混合物进行洗脱，收集洗脱流出液，浓缩，将乙酸乙酯和乙醇回收干净，得RC粗品； (5 )精制:将RC粗品用有机溶剂加热溶解，冷却，析晶，过滤，干燥，得RC纯品。2.根据权利要求1所述的从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Re的方法，其特征在于，步骤(I)中，预热的温度30?500C，预热的时间为0.5?2.0小时。3.根据权利要求1或2所述的从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Re的方法，其特征在于，步骤(I)中，所述硅胶的用量为母液重量的I?2倍。4.根据权利要求1或2所述的从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Re的方法，其特征在于，步骤(I)中，烘干的温度为70?80°C，烘干的时间为9?10小时。5.根据权利要求1或2所述的从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Re的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述层析柱的高径比为I?20:1。6.根据权利要求1或2所述的从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Re的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述乙酸乙酯的用量为2?1BV，IBV=I个柱床体积，预洗的流速为0.5?2BV/小时，浓缩的温度为60?80°C。7.根据权利要求1或2所述的从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Re的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述乙酸乙酯和乙醇的混合物中，乙酸乙酯与乙醇的体积比=50?99:50?18.根据权利要求1或2所述的从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Re的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述乙酸乙酯和乙醇混合物的用量为2?10BV，IBV=I个柱床体积，洗脱的流速为0.5?2BV/小时，浓缩的温度为60?90°C。9.根据权利要求1或2所述的从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Re的方法，其特征在于，步骤(5)中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、丙酮、乙酸乙酯、水中的一种或多种。10.根据权利要求1或2所述的从甜菊糖苷精制母液中分离高纯度Re的方法，其特征在于，步骤(3)中，所得ST和RA的混合物通过结晶方法进一步分离ST和RA。
【文档编号】C07H1/06GK105906674SQ201610396298
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年6月7日
【发明人】李伟, 龙伟岸, 黄华学
【申请人】湖南华诚生物资源股份有限公司