一种具有抗癌活性的化学物质及其制备方法与应用
【专利摘要】本发明公开了一种具有抗癌活性的化学物质及其制备方法与应用，属于化学合成药物技术领域。解决了如何提供一种细胞毒性低、耐药性低、抗肿瘤活性高的化学物质的问题。本发明的具有抗癌活性的化学物质为结构式如式(I)所示的化合物，或者为结构式如式(II)所示的化合物，或者为结构式如式(I)所示的化合物和结构式如式(II)所示的化合物的混合物。该化学物质通过青蒿琥酯与铂(IV)化合物进行配合作用获得，既通过引入青蒿琥酯配体，降低了铂(IV)化合物的细胞毒性，又提高了铂(IV)化合物的抗肿瘤活性，且耐药性低，在制备抗癌药物中具有广泛应用。
【专利说明】
一种具有抗癌活性的化学物质及其制备方法与应用
技术领域
[0001] 本发明涉及化学合成药物技术领域，尤其涉及一种具有抗癌活性的化学物质及其 制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 自从1967年人们发现顺铂有抗癌活性以来，铂类金属抗癌药物的研究和应用得到 长久的发展，目前已经对几千个铂系列化合物进行了筛选，其中有几十个化合物进入临床 研究，有几个已获批准进入市场。
[0003] 其中，铂（11)(表示二价铂)在化疗中已经得到了广泛的运用，比如顺式二氯二氨 合铂（II)，也称顺铂(cisplatin)，为一种周期性非特异性药物，是临床用量最大的二价铂 类药物，其能与DNA结合形成交叉键，从而破坏DNA的复制功能。临床实践证明顺铂具有抗癌 谱广，作用强，与多种抗肿瘤药具有协同作用，且无交叉耐药等特点，广泛用于卵巢癌，前列 腺癌，睾丸癌，肺癌，鼻咽癌，食道癌，恶性淋巴瘤，乳腺癌等实体肿瘤的治疗。然而顺铂具有 重度消化道反应，骨髓抑制，听神经毒性以及容易对肾脏造成不可逆损伤等毒副作用限制 了其治疗指数的提高。同时，低水溶性与高毒副反应也是其它二价铂类药物普遍存在的问 题。除此以外，在生理条件下，铂(II)有较高的反应活性，因此具有较低的稳定性，往往在铂 (II)到达目标癌细胞之前，大部分已经与GSH、金属硫蛋白等生物活性分子结合而失活了， 而且癌细胞对铂（II)往往具有先天或者后天可获得耐药性。上述种种原因限制了铂（II)化 合物的应用。
[0004] 经研究发现，铂（IV)(表示四价铂)化合物与铂（II)化合物相比，在竖直轴上多了 两个配体，空间上形成八面体结构，因而具有动力学惰性，具有较低的反应活性，较小的毒 副作用。此外通过修饰竖直轴的结构，可以改变铂(IV)化合物的还原电势，以便在细胞内条 件下迅速还原为铂（II )，发挥抗癌疗效。亲脂修饰还能增强亲脂性，提高细胞摄取的效率， 提尚疗效。
[0005] 到目前为止，最具有代表性的四价钼药为Satraplat in，其可以口服给药。该药由 美国Bristol-Squibb公司、英国Johnson Matthey公司和癌症研究所共同开发，于1992年进 入临床试验，现已进入临床ΠI期。但在疗效方面，与顺铂、卡铂比较，Satrap lat i η除具有口 服活性外优势并不突出，抗肿瘤活性有待进一步提高。
[0006] 青蒿素(artemisinin)是我国首次从菊科蒿属(艾属)黄花蒿中分离、鉴定出的抗 疟药物，经大量的研究及观察发现青蒿素对抢救和治疗脑型疟疾和恶性疟疾等疗效显著。 此后一系列有活性并可溶于油或水的衍生物被开发出来，青蒿琥酯(Art eSUnate，Art)即是 青蒿素的衍生物之一。除了良好的抗疟疾作用外，近年来，研究发现青蒿素及其衍生物在抗 肿瘤方面也有着良好的应用前景，可选择性杀伤肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤生 长，且毒副作用小，并且和某些药物还有协同作用，可增强抗癌药物的疗效，提升肿瘤细胞 对化疗药物的敏感性，减少抗癌药物的副作用，延缓耐药性的发生。
【发明内容】
[0007] 有鉴于此，本发明的目的是如何提供一种具有抗癌活性的化学物质及其制备方法 与应用，该化学物质的细胞毒性低、耐药性低、抗肿瘤活性高。
[0008] 本发明提供一种具有抗癌活性的化学物质，该化学物质为结构式如式（I)所示的 化合物，或者为结构式如式(II)所示的化合物，或者为结构式如式(I)所示的化合物和结构 式如式(II)所示的化合物的混合物：
[0011] 式(I)和式(II)中
：)以下结构中的一种：
[0012]
[0013] 本发明还提供一种具有抗癌活性的化学物质的制备方法，包括以下步骤：
[0014] A)将铂（II)化合物与双氧水反应，得到铂（IV)化合物；
[0015] 所述钼（II)化合物》
顿钼Cisplatin)
(奥 沙利钼Oxaliplatin)
(pyAA_Pt_Cl2)或
CHAA_Pt_Cl2);
[0016] B)无水无氧条件下，将步骤A)得到的铂（IV)化合物与青蒿琥酯在缩合剂存在的条 件下进行反应，得到具有抗癌活性的化学物质。
[0017]优选的，所述步骤B)中，钼(IV)化合物和青蒿琥酯的摩尔比为1:(0.8~1.2)，青蒿 琥酯和缩合剂的摩尔比为1: (1~1.2)，得到结构式如式(I)所示的化合物。
[0018]优选的，所述步骤B)中，铂（IV)化合物和青蒿琥酯的摩尔比为1: (1.5~3)，青蒿琥 酯和缩合剂的摩尔比为1: (1~1.2)，得到结构式如式(II)所示的化合物。
[0019]优选的，所述步骤A)中，双氧水的体积与钼（II)化合物的摩尔比为（5mL~15mL): (lmmol~3mmol)〇
[0020]优选的，所述步骤A)中，铂（II)化合物与双氧水的反应在避光条件下进行。
[0021 ]优选的，所述步骤A)中，铂（II)化合物与双氧水的反应温度为室温，反应时间为5 ~10h〇
[0022]优选的，所述步骤B)中，缩合剂为N，N'_二环己基碳二亚胺(DCC)、1_羟基苯并三唑 (Η0ΒΤ)或N-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC.HC1)。
[0023]优选的，所述步骤B)中，反应的溶剂为N，N'_二甲基甲酰胺(DMF)。
[0024] 优选的，所述步骤B)中，反应的温度为0°C~20°C，时间为16h~24h。
[0025] 本发明还提供上述具有抗癌活性的化学物质在制备抗癌药物中的应用。
[0026] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：
[0027] 1、本发明的具有抗癌活性的化学物质，核心为结构式为式（I)和式（II)所示的化 合物，该化合物是以青蒿琥酯为轴向配体的铂（IV)配合物，通过青蒿琥酯与铂（IV)化合物 进行配合作用获得，既通过引入青蒿琥酯配体，降低了铂(IV)化合物的细胞毒性，又提高了 铂(IV)化合物的抗肿瘤活性，且耐药性低。经细胞毒性实验结果表明，本发明提供的铂（IV) 配合物对癌细胞（如人乳腺癌MCF-7细胞，人宫颈癌HeLa细胞，人肝癌HepG2细胞人肺腺癌 A549细胞)有很好的杀伤效果，对顺铂耐药的人肺腺癌A549/DDP细胞也有很好的杀伤效果， 且细胞毒性低，能够作为抗肿瘤药物应用。
[0028] 2、本发明的具有抗癌活性的化学物质的制备方法简单易行，无需采用特殊设备和 工艺，成本低、适用于工业化生产。
【附图说明】
[0029] 图1是本发明实施例1制备的化合物1的红外吸收谱图；
[0030]图2是本发明实施例1制备的化合物1的核磁共振Η谱图；
[0031] 图3是本发明实施例1制备的化合物1的质谱图；
[0032] 图4是本发明实施例5制备的化合物2的红外吸收谱图；
[0033] 图5是本发明实施例5制备的化合物2的核磁共振Η谱图；
[0034]图6是本发明实施例5制备的化合物2的质谱图。
【具体实施方式】
[0035]为了进一步了解本发明，下面结合【具体实施方式】对本发明的优选实施方案进行描 述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本发明的特征和优点而不是对本发明专利 要求的限制。
[0036]本发明的具有抗癌活性的化学物质，为式(I)结构的化合物，或者式(II)结构的化 合物，或者式(I)结构的化合物和式(Π )结构的化合物的混合物，其中，式(I)结构的化合物 和式（II)结构的化合物是以青蒿琥酯为轴向配体的铂（IV)配合物(式（I)和式（II)结构在 上文中已经给出，此处不再赘述)该化学物质的细胞毒性低、耐药性低、抗肿瘤活性高。
[0037] 上述具有抗癌活性的化学物质的制备方法，步骤如下：
[0038] A)将铂（II)化合物与双氧水在避光条件下搅拌反应，反应温度为室温，反应时间 为5~10h，反应结束后，提纯(提纯过程一般为过滤），得到黄色粉末，即为铂(IV)化合物；
[0039] 其中，钼（II)化合物为顺钼Cisplatin、奥沙利钼0xaliplatin、pyAA-Pt_Cl2或 CHAA-Pt-Cl2，本发明对其来源并无特殊要求，可以为一般市售;双氧水无特殊要求，优选为 30%的双氧水；双氧水的体积与铂（11)化合物的摩尔比优选为（511^~1511^):(11]1111〇1~ 3mmο1);
[0040] 步骤A)的反应式如下(式中，Mi、M2、M3、M4均代表取代基，具体根据铂（II)化合物的 结构确定，铂(II)化合物上文中已给出，此处不再赘述）：
[0041]
[0042] B)无水无氧条件下，将步骤A)得到的铂（IV)化合物与青蒿琥酯在缩合剂存在的条 件下进行酯化反应，得到具有抗癌活性的化学物质，具体根据反应物配比不同，所得产物不 同，优选可以分为B1)、B2)、B3)三种情况：
[0043] B1)制备式（I)结构所示的化合物:无水无氧条件下，将步骤A)得到的铂（IV)化合 物与青蒿琥酯在缩合剂存在的条件下进行反应，铂（IV)化合物和青蒿琥酯的摩尔比为1: (0.8~1.2)，优选1:(1~1.2)，青蒿琥酯和缩合剂的摩尔比为1:(1~1.2)，反应结束后，提 纯，得到白色固体粉末，即为式(I)结构所示的化合物；
[0044] B2)制备式(II)结构所示的化合物:无水无氧条件下，将步骤A)得到的铂（IV)化合 物与青蒿琥酯在缩合剂存在的条件下进行反应，铂（IV)化合物和青蒿琥酯的摩尔比为1: (1.5~3)，优选1:(1.5-2.5)，青蒿琥酯和缩合剂的摩尔比为1:(1~1.2)，反应结束后，提 纯，得到白色固体粉末，即式(II)结构所示的化合物；
[0045] B3)制备式(I)结构所示的化合物和式(II)结构所示的化合物的混合物，无水无氧 条件下，将步骤A)得到的铂（IV)化合物与青蒿琥酯在缩合剂存在的条件下进行反应，铂 (IV)化合物与青蒿琥酯的摩尔比小于1:1.2大于1:1.5，青蒿琥酯和缩合剂的摩尔比为1: (1 ~1.2)，反应结束后，提纯，得到白色固体粉末，即式(I)结构所示的化合物和式(II)结构所 示的化合物的混合物；
[0046]其中，青蒿琥酯结构如式（III)所示，
[0047]
[0048]缩合剂优选为DCC、H0BT或EDC. HC1，来源并无特殊要求，可以为一般市售；反应的 溶剂优选为DMF，铂（IV)化合物、青蒿琥酯和缩合剂溶解在溶剂中的顺序没有限制；反应的 温度优选为〇°C~20°C ;反应的时间优选为16h~24h;提纯过程优选先抽干体系中的溶剂， 然后将剩余物质用丙酮溶解，并过滤掉不溶物，再将滤液浓缩后乙醚沉降，过滤得到固体并 真空抽干，即可得到产品。
[0049] 本发明的具有抗癌活性的化学物质在降低细胞毒性的同时依然能取得与顺铂相 当的抗癌活性，且耐药性低，能够在制备抗癌药物中应用。
[0050] 为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的具有抗癌活性的化学物 质及其制备方法进行详细描述。实施例1-14中的换气采用惰性气体即可，没有特殊限制，如 氩气。
[0051 ] 实施例1
[0052] 将顺钼（600mg, 2mmol)置于烧瓶中，再加入30%双氧水1〇1111^，室温避光搅拌811后， 过滤除去双氧水得到Cisplatin(IV)-(OH)2的黄色粉末。
[0053] 将得到的Ci splat in (I V)-(OH) 2 ( 334mg，lmmol)，N，N'_二环己基碳二亚胺 (185.6mg，0.9mmol)置于干燥过的聚合瓶中，换气三次，然后向其中加入5ml干燥过的DMF， 20°C下搅拌0.5h，加入青蒿琥酯(307.5mg 0.8mmol)，并在10°C下充分搅拌反应16h。然后抽 干体系中的DMF，将剩余物质用丙酮溶解，并过滤掉不溶物，将滤液浓缩后乙醚沉降，过滤所 得到固体并真空抽干得到化合物1，为白色固体粉末317.3mg。
[0054] 反应式如下：
[0055；
[0056]采用红外吸收光谱、核磁共振、以及电喷雾质谱对制备的化合物1进行表征，表征 结果见图1、图2和图3。图1是本发明实施例1制备的化合物1的红外吸收谱图，其中，1643CHT1 和1746CHT1处的吸收峰为青蒿琥酯对应的羰基C = 0的伸缩振动峰，SSlcnf^SSlcnfiP 1115cnf1处的吸收峰为其-0-0-伸缩振动峰，3250cnf1处的吸收峰为顺铂氨基配体的伸缩振 动峰，SSOOcnf 1处为其-OH伸缩振动峰，图1说明青蒿琥酯与顺铂成功进行了配位，得到了化 合物1;图2是本发明实施例1制备的化合物1的核磁共振Η谱图，其中，5.54-5.60ppm处的吸 收峰为青蒿琥酯上与桥氧相连的次甲基的质子氢峰，5.64-5.71ppm处的吸收峰为青蒿琥酯 上连接酯基的次甲基的质子氢峰;5.73-6.17ppm处的吸收峰为顺铂氨配体质子氢峰，可见 各质子氢的峰归属明确，且比例吻合，从而再次证明了化合物1的成功合成；图3是本发明实 施例1制备的化合物1的质谱图，其中最大的吸收峰m/z = 699为化合物1的分子离子峰，与其 分子量吻合。
[0057]图1、图2和图3证明了本发明中，化合物1的成功制备。
[0058] 实施例2
[0059] 将顺钼（600mg, 2mmol)置于烧瓶中，再加入30%双氧水1〇1111^，室温避光搅拌811后， 过滤除去双氧水得到Cisplatin(IV)-(OH)2的黄色粉末。
[0060] 将得到的<^8口13衍11(1￥)-(0!〇2(33411^，1111111〇1)4少'-二环己基碳二亚胺（226.8， 1. lmmol)置于干燥过的聚合瓶中，换气三次，然后向其中加入5ml干燥过的DMF，20°C下搅拌 lh，加入青蒿琥酯(384.4mg, lmmol)，并在10°C下充分搅拌反应18h。然后抽干体系中的DMF， 将剩余物质用丙酮溶解，并过滤掉不溶物，将滤液浓缩后乙醚沉降，过滤所得到固体并真空 抽干得到化合物1，为白色固体粉末335mg。
[0061] 反应式如实施例1。
[0062] 实施例3
[0063] 将顺钼（600mg, 2mmol)置于烧瓶中，再加入30%双氧水1〇1111^，室温避光搅拌811后， 过滤除去双氧水得到Cisplatin(IV)-(OH)2的黄色粉末。
[0064] 将得到的Ci splat in (I V)-(OH) 2 ( 334mg，lmmol)，N，N'_二环己基碳二亚胺 (237. lmg，l. 15mmol)置于干燥过的聚合瓶中，换气三次，然后向其中加入7ml干燥过的DMF， l〇°C下搅拌lh，加入青蒿琥酯(422.9mg，l. llmmol)，并在10°C下充分搅拌反应18h。然后抽 干体系中的DMF，将剩余物质用丙酮溶解，并过滤掉不溶物，将滤液浓缩后乙醚沉降，过滤所 得到固体并真空抽干得到化合物1，为白色固体粉末330mg。
[0065] 反应式如实施例1。
[0066] 实施例4
[0067] 将顺钼（600mg, 2mmol)置于烧瓶中，再加入30%双氧水1〇1111^，室温避光搅拌811后， 过滤除去双氧水得到Cisplatin(IV)-(0H)2的黄色粉末。
[0068] 将得到的Ci splat in (I V)-(0H) 2 ( 334mg，lmmol)，N，N'_二环己基碳二亚胺 (247.4mg，1.2mmol)以及青蒿琥酯(422.9mg, 1 · lmmol)置于干燥过的聚合瓶中，换气三次， 然后向其中加入5ml干燥过的DMF，并在10°C下充分搅拌反应16h。然后抽干体系中的DMF，将 剩余物质用丙酮溶解，并过滤掉不溶物，将滤液浓缩后乙醚沉降，过滤所得到固体并真空抽 干得到化合物1，为白色固体粉末330mg。
[0069] 反应式如实施例1。
[0070] 实施例5
[0071 ] 将顺钼（60〇11^，21]11]1〇1)置于烧瓶中，再加入30%双氧水1〇1111^，室温避光搅拌811后， 过滤除去双氧水得到Cisplatin(IV)-(OH)2的黄色粉末。
[0072] 将得到的Ci splat in (I V)-(OH) 2 ( 334mg，lmmol)，N，N'_二环己基碳二亚胺 (434.5mg，2. lmmol)，1-羟基苯并三唑（283.8mg，2. lmmol)，以及青蒿琥酯（768.8mg，2mmol) 置于干燥过的聚合瓶中，换气三次，然后向其中加入l〇ml干燥过的DMF，并在10°C下充分搅 拌反应16h。然后抽干体系中的DMF，将剩余物质用丙酮溶解，并过滤掉不溶物，将滤液浓缩 后乙醚沉降，过滤所得到固体并真空抽干，得到化合物2,为白色固体粉末650mg。
[0073] 反应式如下：
[0074]
[0075] 采用红外吸收光谱、核磁共振、以及电喷雾质谱对制备的化合物2进行表征，表征 结果见图4、图5和图6。图4是本发明实施例5制备的化合物2的红外吸收谱图，其中，1651 cnf1 和17450^1处的吸收峰为青蒿琥酯对应的羰基C = 0的伸缩振动峰，SSlcnr^SSlcnr1和 1115cnf1处的吸收峰为其-0-0-伸缩振动峰，3250cnf 1处的吸收峰为顺铂氨基配体的伸缩振 动峰，且其3500(3!!^处-OH伸缩振动峰消失，图4说明青蒿琥酯与顺铂成功进行了配位，得到 了化合物2;图5是本发明实施例5制备的化合物2的核磁共振Η谱图，其中，5.54-5.60ppm处 的吸收峰为青蒿琥酯上与桥氧相连的次甲基的质子氢峰，5.64-5.71ppm处的吸收峰为青蒿 琥酯上连接酯基的次甲基的质子氢峰;6.25-6.67ppm处的吸收峰为顺钼氨配体质子氢峰， 可见各质子氢的峰归属明确，且比例吻合，从而再次证明了化合物2的成功合成；图6是本发 明实施例5制备的化合物2的质谱图，其中最大的吸收峰m/z = 1066为化合物2的分子离子 峰，与其分子量吻合。
[0076] 图4、图5和图6证明了本发明中，化合物2的成功制备。
[0077] 实施例6
[0078] 将顺铂（600mg，2mmo 1)置于烧瓶中，再加入30 %双氧水10mL，室温避光搅拌8h后， 过滤除去双氧水得到Cisplatin(IV)-(0H)2的黄色粉末。
[0079] 将得到的Ci splat in (I V)-(0H) 2 ( 334mg，lmmol)，N，N'_二环己基碳二亚胺 (639.2mg，3 · lmmol)，1-羟基苯并三唑（419mg，3 · lmmol)，以及青蒿琥酯（1153 · 2mg，3mmol) 置于干燥过的聚合瓶中，换气三次，然后向其中加入15ml干燥过的DMF，并在5°C下充分搅拌 反应16h。然后抽干体系中的DMF，将剩余物质用丙酮溶解，并过滤掉不溶物，将滤液浓缩后 乙醚沉降，过滤所得到固体并真空抽干，得到化合物2,为白色固体粉末700mg。
[0080] 反应式如实施例5。
[0081 ] 实施例7
[0082] 将顺铂（600mg，2mmo 1)置于烧瓶中，再加入30 %双氧水10mL，室温避光搅拌8h后， 过滤除去双氧水得到Cisplatin(IV)-(OH)2的黄色粉末。
[0083] 将得到的Ci splat in (I V)-(OH) 2 ( 334mg，lmmol)，N，N'_二环己基碳二亚胺 (536 · lmg，2·6mmol)，1-羟基苯并三挫（351 · 3mg，2·6mmol)，以及青蒿琥酯（961mg，2· 5mmol) 置于干燥过的聚合瓶中，换气三次，然后向其中加入15ml干燥过的DMF，并在10°C下充分搅 拌反应18h。然后抽干体系中的DMF，将剩余物质用丙酮溶解，并过滤掉不溶物，将滤液浓缩 后乙醚沉降，过滤所得到固体并真空抽干，得到化合物2,为白色固体粉末720mg。
[0084] 反应式如实施例5。
[0085] 实施例8
[0086] 将顺钼（600mg, 2mmol)置于烧瓶中，再加入30%双氧水1〇1111^，室温避光搅拌811后， 过滤除去双氧水得到Cisplatin(IV)-(OH)2的黄色粉末。
[0087] 将得到的(^8口]^1:;[11(1\0-(0!02(33411^，11111]1〇1)，1^，1^'-二环己基碳二亚胺（26811^， 2.6mmol)，1-羟基苯并三唑（175 · 7mg，2.6mmol)，以及青蒿琥酯（576 · 3mg，2 · 5mmol)置于干 燥过的聚合瓶中，换气三次，然后向其中加入l〇ml干燥过的DMF，并在5°C下充分搅拌反应 24h。然后抽干体系中的DMF，将剩余物质用丙酮溶解，并过滤掉不溶物，将滤液浓缩后乙醚 沉降，过滤所得到固体并真空抽干，得到化合物2,为白色固体粉末750mg。
[0088] 反应式如实施例5。
[0089] 实施例9
[0090] 将CHAA-Pt-Cl2(764mg，2mmol)置于烧瓶中，再加入30%双氧水10mL，室温避光搅 拌8h后，过滤除去双氧水得到CHAA-Pt(IV)-(0H)2的黄色粉末。
[0091]将得到的CHAA-Pt(IV)-(0H)2(410mg，lmmol)，N，N'_二环己基碳二亚胺（226.8， 1. lmmol)置于干燥过的聚合瓶中，换气三次，然后向其中加入5ml干燥过的DMF，20°C下搅拌 lh，加入青蒿琥酯（384.4mg, lmmol)并在10°C下充分搅拌反应16h。然后抽干体系中的DMF， 将剩余物质用丙酮溶解，并过滤掉不溶物，将滤液浓缩后乙醚沉降，过滤得到固体并真空抽 干，得到白色固体粉末330mg。
[0092]反应式如下：
[0093]
[0094] 实施例10
[0095] 将CHAA-Pt-Cl2(764mg，2mmol)置于烧瓶中，再加入30%双氧水10mL，室温避光搅 拌8h后，过滤除去双氧水得到CHAA-Pt(IV)-(0H) 2的黄色粉末。
[0096] 将得到的 CHAA-Pt(IV)-(0H)2(410mg，lmmol)，N，N'-二环己基碳二亚胺（639.2mg， 3. lmmol)，1-羟基苯并三唑(419mg，3. lmmol)以及青蒿琥酯（1153.2mg，3mmol)溶解于5ml干 燥的DMF中，并在5°C下充分搅拌反应24h。然后抽干体系中的DMF，将剩余物质用丙酮溶解， 并过滤掉不溶物，将滤液浓缩后乙醚沉降，过滤得到固体并真空抽干，得到白色固体粉末 700mg〇
[0097] 反应式如下：
[0098]
[0099] 实施例11
[0100] 将奥沙利铂(795mg，2mmol)置于烧瓶中，再加入30%双氧水10mL，室温避光搅拌8h 后，过滤除去双氧水得到〇xaliplatin(IV)-(OH)2的黄色粉末。
[0101 ]将得到的Oxal iplatin(IV)-(0H)2(431mg, lmmol)，N，N'_二环己基碳二亚胺 (226.8，1. lmmol)置于干燥过的聚合瓶中，换气三次，然后向其中加入5ml干燥过的DMF，20 °C下搅拌lh，加入青蒿琥酯（384.4mg，lmmol)并在10°C下充分搅拌反应16h。然后抽干体系 中的DMF，将剩余物质用丙酮溶解，并过滤掉不溶物，将滤液浓缩后乙醚沉降，过滤得到固体 并真空抽干，得到白色固体粉末320mg。
[0102] 反应式如下：
[0103]
[0104] 实施例12
[0105] 将奥沙利铂(795mg，2mmol)置于烧瓶中，再加入30%双氧水10mL，室温避光搅拌8h 后，过滤除去双氧水得到0xaliplatin(IV)_(0H)2的黄色粉末。
[0106] 将得到的 Oxal iplatin (IV)-(0H)2(431 mg, lmmol)，Ν, Ν'-二环己基碳二亚胺 (639.2mg，3. lmmol), 1-羟基苯并三唑（419mg，3. lmmol)以及青蒿琥酯（1153.2mg，3mmol)溶 解于5ml干燥的DMF中，并在5°C下充分搅拌反应24h。然后抽干体系中的DMF，将剩余物质用 丙酮溶解，并过滤掉不溶物，将滤液浓缩后乙醚沉降，过滤得到固体并真空抽干，得到白色 固体粉末750mg。
[0107] 反应式如下：
[0108]
[0109] 实施例13
[0110] 将PyAA-Pt-Cl2(752mg，2mmol)置于烧瓶中，再加入30%双氧水10mL，室温避光搅 拌8h后，过滤除去双氧水得到PyAA-Pt(IV)-(OH) 2的黄色粉末。
[0111] 将得到的 PyAA-Pt(IV)-(0H)2(410mg，lmmol)，N，N'-二环己基碳二亚胺（226.8， 1. lmmol)置于干燥过的聚合瓶中，换气三次，然后向其中加入5ml干燥过的DMF，20°C下搅拌 lh，加入青蒿琥酯（384.4mg, lmmol)并在10°C下充分搅拌反应16h。然后抽干体系中的DMF， 将剩余物质用丙酮溶解，并过滤掉不溶物，将滤液浓缩后乙醚沉降，过滤得到固体并真空抽 干，得到白色固体粉末300mg。
[0112] 反应式如下：
[0113]
[0114] 实施例14
[0115] 将PyAA-Pt-Cl2(752mg，2mmol)置于烧瓶中，再加入30%双氧水10mL，室温避光搅 拌8h后，过滤除去双氧水得到PyAA-Pt(IV)-(0H) 2的黄色粉末。
[0116] 将得到的？7厶厶-?七（1￥)-(0!1)2(41〇11^，1111111〇1)，^-二环己基碳二亚胺（639.211^， 3. lmmol)，1-羟基苯并三唑(419mg，3. lmmol)以及青蒿琥酯（1153.2mg，3mmol)溶解于5ml干 燥的DMF中，并在5°C下充分搅拌反应24h。然后抽干体系中的DMF，将剩余物质用丙酮溶解， 并过滤掉不溶物，将滤液浓缩后乙醚沉降，过滤得到固体并真空抽干，得到白色固体粉末 650mg〇
[0117] 反应式如下：
[0118；
[0119] 实施例15
[0120] 对本发明实施例1制备的化合物1和实施例5制备的化合物2进行细胞毒性测试，分 别以1〇^-7、他1^^549、!1叩62^549/1)0?细胞为模型，以实施例1所提供的化合物1及实施例 5所提供的化合物2作为待检测物，将所述待检测物作用于细胞后，观察细胞的存活率情况， 以噻唑蓝(MTT)方法考察本发明所述的铂配合物的细胞毒性，具体操作步骤如下：
[0121 ] 1)收集上述对数期细胞，调整细胞悬液的浓度，加入96孔板中，每孔加入100μΙ，每 孔细胞数约5千个；
[0122] 2)将上述试验样品置于⑶2浓度为5%的细胞培养箱中，在37°C，饱和湿度条件下 培养12h，使细胞充分贴壁；
[0123] 3)将化合物1按照一定梯度倍数稀释，浓度分别为108μΜ、54μΜ、27μΜ、13.5μΜ、6.75 μΜ、3.375μΜ、1.6875μΜ，然后加入有细胞的96孔板中，每个浓度设三个复孔，培养时间设置 为24h，48h，72h;
[0124] 4)每孔加入20μ1的MTT溶液(5mg/ml，即0.5 %MTT)，继续培养4h，吸去培养基，每孔 加150μ1的DMS0，摇床低速震荡1 Omin，使结晶充分溶解；
[0125] 5)酶标仪490nm处检测每个孔的吸光值；
[0126] 6)同时设置调零孔(培养基、MTT、DMS0)和对照组(细胞、培养基、MTT、DMS0)按照下 面公式计算细胞活力：
[0127]
[0128] 其中，Abs( sample)为样品组细胞的吸光值;Abs (blank)为空白对照组培养孔中液 体的吸光值;Abs(control)为未经过处理实验组细胞的吸光值。
[0129] 实验结果见表1。
[0130] 比较例1
[0131] 对顺铂进行细胞毒性测试，分别以MCF-7、HeLa、A549、HepG2、A549/DDP细胞为模 型，以顺铂作为待检测物，将所述待检测物作用于细胞后，观察细胞的存活率情况。以噻唑 蓝(MTT)方法，考察顺铂的细胞毒性，具体操作步骤如下：
[0132] 1)收集上述对数期细胞，调整细胞悬液的浓度，加入96孔板中，每孔加入100μΙ，每 孔细胞数约5千个；
[0133] 2)将上述试验样品置于⑶2浓度为5%的细胞培养箱中，在37°C，饱和湿度条件下 培养12h，使细胞充分贴壁；
[0134] 3)将顺铂按照一定梯度倍数稀释，浓度分别为108μΜ、54μΜ、27μΜ、13.5μΜ、6.75μΜ、 3.375μΜ、1.6875μΜ，然后加入有细胞的96孔板中，每个浓度设三个复孔，培养时间设置为 24h,48h,72h；
[0135] 4)每孔加入20μ1的MTT溶液(5mg/ml，即0.5 %MTT)，继续培养4h，吸去培养基，每孔 加 150μ1的DMS0，摇床低速震荡1 Omin，使结晶充分溶解；
[0136] 5)酶标仪490nm处检测每个孔的吸光值；
[0137] 6)同时设置调零孔(培养基、MTT、DMS0)和对照组(细胞、培养基、MTT、DMS0)按照下 面公式计算细胞活力：
[0138]
[0139] 其中，Abs( sample)为样品组细胞的吸光值;Abs (blank)为空白对照组培养孔中液 体的吸光值;Abs(control)为未经过处理实验组细胞的吸光值。
[0140] 实验结果见表1。
[0141] 表1顺铂和化合物1对不同细胞处理不同时间的IC5Q值(μΜ)
[0142]
[0143] 表1是本发明实施例15和比较例1中，化合物1、化合物2、顺铂分别对MCF-7、HeLa、 A549、HepG2、A549/DDP细胞处理24h、48h、72h的IC5Q值数据汇总。由表1可知，本发明提供的 铂（IV)配合物对癌细胞如人乳腺癌MCF-7细胞，人宫颈癌Hela细胞，人肺腺癌A549细胞，以 及人肝癌HepG2细胞都有很好的杀伤效果，在降低系统毒性的同时依然能取得与顺铂相当 的抗癌活性，对顺铂耐药的人肺腺癌A549/DDP细胞也有很好的杀伤效果，具备很低的耐药 性。
[0144] 由上述实施例及比较例可知，本发明提供的铂配合物具有较高的抗肿瘤活性和较 低的细胞毒性。
[0145] 以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对 于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行 若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
【主权项】
1. 一种具有抗癌活性的化学物质，其特征在于，该化学物质为结构式如式(I)所示的化 合物，或者为结构式如式(II)所示的化合物，或者为结构式如式（I)所示的化合物和结构式 如式(II)所示的化合物的混合物：《（!1 ) 式(I)和式(II)中 W下结构中的一种：2. -种具有抗癌活性的化学物质的制备方法，其特征在于，包括W下步骤：A)将销（II)化合物与双窗水后而-俱蔚1曲化会物I.所述销（II)化合物B)无水无氧条件下，将步骤A)得到的销（IV)化合物与青葛班醋在缩合剂存在的条件下 进行反应，得到具有抗癌活性的化学物质。3. 根据权利要求2所述的具有抗癌活性的化学物质的制备方法，其特征在于，所述步骤 B)中，销（IV)化合物和青葛班醋的摩尔比为1:(0.8~1.2)，青葛班醋和缩合剂的摩尔比为 1: (1~1.2)，得到结构式如式(I)所示的化合物。4. 根据权利要求2所述的具有抗癌活性的化学物质的制备方法，其特征在于，所述步骤 B)中，销（IV)化合物和青葛班醋的摩尔比为1: (1.5~3)，青葛班醋和缩合剂的摩尔比为1: (1~1.2 )，得到结构式如式(II)所示的化合物。5. 根据权利要求2-4任何一项所述的具有抗癌活性的化学物质的制备方法，其特征在 于，所述步骤A)中，双氧水的体积与销（II)化合物的摩尔比为（5mL~15mL) : (Immo 1~ 3mmO1)。6. 根据权利要求2-4任何一项所述的具有抗癌活性的化学物质的制备方法，其特征在 于，所述步骤A)中，销(II)化合物与双氧水的反应在避光条件下进行。7. 根据权利要求2-4任何一项所述的具有抗癌活性的化学物质的制备方法，其特征在 于，所述步骤A)中，销(II)化合物与双氧水的反应溫度为室溫，反应时间为5~lOh。8. 根据权利要求2-4任何一项所述的具有抗癌活性的化学物质的制备方法，其特征在 于，所述步骤B)中，缩合剂为N，N'-二环己基碳二亚胺、1-径基苯并S挫或N-(3-二甲氨基丙 基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，反应的溶剂为N，N'-二甲基甲酯胺。9. 根据权利要求2-4任何一项所述的具有抗癌活性的化学物质的制备方法，其特征在 于，所述步骤B)中，反应的溫度为(TC~20°C，时间为16h~2地。10. 权利要求1所述的具有抗癌活性的化学物质在制备抗癌药物中的应用。
【文档编号】A61P35/00GK105906667SQ201610265097
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月26日
【发明人】黄宇彬, 周东方, 景遐斌, 谢志刚
【申请人】中国科学院长春应用化学研究所