盐酸布替萘芬的药物组合物及其在生物医药中的应用

盐酸布替萘芬的药物组合物及其在生物医药中的应用
【专利摘要】本发明公开了盐酸布替萘芬的药物组合物及其在生物医药中的应用，本发明提供的盐酸布替萘芬的药物组合物中含有盐酸布替萘芬和一种从百部的干燥块茎中分离得到的结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)。盐酸布替萘芬、化合物(Ⅰ)可抑制去势大鼠骨吸收，促进骨形成，从而阻止骨量丢失。盐酸布替萘芬、化合物(Ⅰ)单独作用时，对骨量流失的具有治疗作用；盐酸布替萘芬和化合物(Ⅰ)联合作用时，对骨量流失的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗骨质疏松的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
盐酸布替萘芬的药物组合物及其在生物医药中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及盐酸布替萘芬的新用途，具体涉及盐酸布替萘芬 的药物组合物及其在生物医药中的应用。
【背景技术】
[0002] 盐酸布替萘芬为苯甲胺衍生物，其作用机制为选择性地抑制真菌角鲨烯环氧化 酶，干扰真菌细胞壁的麦角固醇的生物合成，影响真菌的脂质代谢，使真菌细胞损伤或死亡 而起到杀菌和抑菌作用。
[0003] 骨质疏松即骨质疏松症，是多种原因引起的一组骨病，骨组织有正常的钙化，钙盐 与基质呈正常比例，以单位体积内骨组织量减少为特点的代谢性骨病变。在多数骨质疏松 中，骨组织的减少主要由于骨质吸收增多所致。以骨骼疼痛、易于骨折为特征。
[0004]迄今为止，尚未见盐酸布替萘芬及其药物组合物与骨质疏松的相关性报道。

【发明内容】

[0005] 本发明的目的在于提供一种盐酸布替萘芬的药物组合物，该药物组合物中含有盐 酸布替萘芬和一种结构新颖的天然产物，盐酸布替萘芬和该天然产物可以协同治疗骨质疏 松。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0008]
123 -种盐酸布替萘芬的药物组合物，包括盐酸布替萘芬、如权利要求1所述的化合物 (I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。 2 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。 3 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0012] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将百部的干燥块茎粉碎，用65 ~75%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的 正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁 醇取物用大孔树脂除杂，先用20%乙醇洗脱9个柱体积，再用65%乙醇洗脱10个柱体积，收 集65%洗脱液，减压浓缩得65%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中65%乙醇洗脱浓缩物用正 相硅胶分离，依次用体积比为65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组 分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1、7:1和1:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离， 用体积百分浓度为58 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集11~15个柱体积洗脱液，洗脱液减压 浓缩得到化合物(I)。
[0013] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用70%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0014] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0015]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制备治疗骨质疏松的药物中的应用。
[0017] 上述盐酸布替萘芬的药物组合物在制备治疗骨质疏松的药物中的应用。
[0018] 本发明的优点：
[0019] 本发明提供的盐酸布替萘芬的药物组合物中含有盐酸布替萘芬和一种从百部的 干燥块茎中分离得到的结构新颖的天然产物，盐酸布替萘芬和该天然产物单独作用时，对 骨质疏松具有治疗作用;二者联合作用时，对骨质疏松的治疗效果进一步提高，可以开发成 治疗骨质疏松的药物。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。
[0021 ]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0022]分离方法：（a)将百部的干燥块茎(2kg)粉碎，用70%乙醇热回流提取（15L X 3次）， 合并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水饱和的 正丁醇(3LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤 (a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用20%乙醇洗脱9个柱体积，再用65%乙 醇洗脱10个柱体积，收集65%洗脱液，减压浓缩得65%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中65% 乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1 (9个柱体积）、35:1 (10个柱体积）、 15:1(8个柱体积)和7:1(8个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c) 中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1(6个柱体积）、7:1(7个柱体积)和1:1 (6个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷 键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为58 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集11~15个柱体 积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (235mg，HPLC归一化纯度大于98% )。
[0023] 结构确证：白色粉末，册431-]\^显示[]\?1]+为111/2 561.3892，结合核磁特征可得 分子式为C37H52〇4,不饱和度为12。核磁共振氢谱数据δΗ(卯m，CDCl 3,500MHZ):H-la(2.13， qd，J=12.6,4.1Hz)，H-lb(2.24，m)，H-2a(2.27，m)，H-2b(2.40，dd，J=12.6,3.4Hz)，H-4 (2.28，q，J = 6.6Hz)，H-6a(1.41，m)，H-6b(1.92，dt，J=13.1，3.0Hz)，H-7a(1.57，m)，H-7b (1.66，m)，H-8(1.59，m)，H-10(1.75，m)，H-lla(1.31，td，J=13.8,3.3Hz)，H-llb(2.06，d，J =13.8Hz)，H-12a(1.39，m)，H-12b(1.52，m)，H-15a(1.38，m)，H-15b(1.64，m)，H-16a(1.41， m)，H-16b(1.71，m)，H-18(1.83，m)，H-19a(1.63，m)，H-19b(1.86，m)，H-21a(1.78，d，J= 13.1Hz)，H-21b(2.62，d，J=13.1Hz)，H-23(0.92，d，J = 6.8Hz)，H-24(0.83，s)，H-25a (4.51，d，J=12.4Hz)，H-25b(4.95，d，J= 12.4Hz)，H-26( 1.07, s)，H-27(1.17, s)，H-28 (1.14，s)，H-29(1.09，s)，H-30(1.16，s)，H-3,，7'（7.98，br，d，J = 7.6Hz)，H-4'，6'（7.46， t，J = 7 · 6Hz)，H-5 '（7 · 57，t，J = 7 · 6Hz);核磁共振碳谱数据δ。（ppm CDC13，125MHz): 24 · 8 (CH2d-C)，42.6(CH2,2-C)，212.5(C，3-C)，58.4(CH，4-C)，42.3(C，5-C)，41.4(CH2,6-C)， 18.3(CH2,7-C)，53.4(CH，8-C)，41.9(C，9-C)，60.8(CH，10-C)，30.4(CH2，n-C)，31.7(CH2， 12-C)，39.7(C，13-C)，37.6(C，14-C)，33.2(CH2，15-C)，35.2(CH 2，16-C)，33.4(C，17-C)， 41.9(CH，18-C)，37.0(CH2，19-C)，36.1(C，20-C)，53.1(CH 2,21-C)，216.4(C，22-C)，7.3 (CH3,23-C)，14.6(CH 3,24-C)，62.7(CH3,25-C)，20.8(CH3,26-C)，18.1(CH 3,27-C)，33.5 (CH3,28-C)，28.8(CH3,29-C)，25.3(CH 3,30-C)，166.7(C，r-C)，130.4(C，2'-C)，129.3(CH， 3'，7'-C)，128.5(CH，4'，6'-〇，133.6(01，5'-〇。红外波谱中的1735〇11- 1吸收带表明结构中 存在羰基，而1448cm-1与1523cm-1吸收带表明结构中存在苯环结构。 13C-NMR、DEPT和HSQC谱 中显示有37个碳信号，包括七个甲基，十一个亚甲基(一个连氧碳），四个次甲基，九个季碳 (三个羰基碳）以及一组单取代苯环结构，以上功能结构再结合不饱和数表明该化合物为六 环结构。 1H-NMR谱结合HSQC谱显示一组单取代苯环质子信号δΗ 7.98(2H，br，d，J = 7.6Hz)、 7.46(2H，t，J = 7.6Hz)、7.57(lH，t，J = 7.6Hz)，七个甲基质子信号δΗ 〇.92(3H，d，J = 6.8Hz)、0.83(3H，s)、1.07(3H，s)、1.17(3H，s)、1.14(3H，s)、1.09(3H，s)、1.16(3H，s)，一个 含氧亚甲基质子信号δ Η 4.51(1!1，(1，1=12.4泡）与4.95(1!1，(1，1 = 12.4抱），四个次甲基质 子信号δΗ 2.28(lH，q，J = 6.6Hz)、l .59(lH，m)、l .75(lH，m)、l .83(lH，m)。由以上NMR数据可 知该化合物为木栓烷型三萜类，并且结构中存在两个酮基以及一个羟甲基片段。根据HMBC 谱中显示的H-3'，7'与C-Γ相关信号，以及C-Γ、C-2'、C-3'、C-4'、C-5'、C-6'与C-7'的碳化 学位移和 1H-NMR数据可知该化合物含有苯甲酰基结构单元。通过分析HMBC谱中H2-25与C-Γ 相关信号以及C-25的化学位移可知苯甲酸是通过与C-25的羟甲基成酯形成苯甲酰基结构 单元。另在HMBC谱中，H3-23与C-3以及H 2-21与C-22相关信号以及它们的碳化学位移数据可 以确定在C-2和C-22为酮基碳。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，以及文献关于相关类型 核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实 验值基本一致。该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0024]
[0025] 实施例2:药理作用
[0026] 1、材料与方法
[0027] 1.1动物
[0028] 6月龄雌性SD大鼠，清洁级，体质量220~270g，购自西普尔-必凯实验动物有限公 司。
[0029] 1.2试剂与样品
[0030] 盐酸布替萘芬购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例 1。阳性药骨松宝由贵州富华公司提供。
[0031] 1.3仪器
[0032]①双能X线骨密度测量仪及LU-NAR-DPX0型小动物软件。由美国GE公司提供。②全 自动生化分析仪（7600-010型）。由日立仪器（苏州）有限公司提供。③骨钙素 （bonegla protein，BGP)、白细胞介素 6(interleukin-6，IL_6)和喊性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP)试剂盒由上海森雄科技公司提供。
[0033] 1.4大鼠分组及模型制备
[0034] 将大鼠随机分为6组，每组12只，分别为假手术组、模型对照组、阳性对照组(骨松 宝280mg · kg-1盐酸布替萘芬组(60mg · kg-1化合物（I)组(60mg · kg-1盐酸布替萘芬 与化合物（I)组合物组【30mg · kg^1盐酸布替萘芬+30mg · kg^1化合物（I)】。采用绝经骨质疏 松动物模型造模方法造模。采用45mg · kg-Ι戊巴比妥钠腹腔麻醉，固定，在最末肋骨下腋中 线与距脊柱外侧lcm交叉处消毒后切开腹膜。模型对照组及药物组将脂肪团拉出分离，结扎 双侧输卵管并切除卵巢，切除卵巢做HE染色以验证造模成功;假手术组不切除卵巢，仅开腹 缝合。术后每只大鼠肌肉注射青霉素 O.lmL。饲养4周后，假手术组和模型对照组以10mL· kg"1生理盐水灌胃，药物组灌胃给药，每天1次，连续给药12周。
[0035] 1.5大鼠骨密度(BMD)、骨矿含量(BMC)测定
[0036]最后一次给药后禁食24h，将大鼠处死。腹主动脉取血，离心取血清，再取出双侧股 骨，并剔除骨上附着软组织，生理盐水纱布包裹，分装后置-20°C冰箱保存备测。采用双能X 线吸收法测定大鼠骨密度（bone mineral density，BMD)、骨矿含量（bone mineral content，BMC)。
[0037] 1.6统计学方法
[0038] 实验数据用均数土标准差(x土s)表示，应用SPSS19.0版统计软件进行单因素方差 分析和t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
[0039] 2、实验结果
[0040] 2.1对去势大鼠模型骨密度(BMD)、骨矿含量(BMC)的影响
[0041] 与假手术组比较，模型对照组大鼠的BMD、BMC明显降低(P<0.01);与模型对照组 比较，盐酸布替萘芬与化合物（I)组合物组和阳性对照组大鼠的B M D、B M C显著升高（P < 0.01)，盐酸布替萘芬组与化合物（I)组大鼠的BMD、BMC显著升高(Ρ<0.05)，去势大鼠的骨 密度(BMD)、骨矿含量(BMC)得到改善。结果见表1。
[0042] 表1对去势大鼠骨密度、骨吸收与骨形成指标的影响
[0043]
[0044] 上述结果表明，盐酸布替萘芬和本发明提供的化合物（I)可抑制去势大鼠骨吸收， 促进骨形成，从而阻止骨量丢失。盐酸布替萘芬、化合物（I)单独作用时，对骨量流失的具有 治疗作用；盐酸布替萘芬和化合物（I)联合作用时，对骨量流失的治疗效果进一步提高，可 以开发成治疗骨质疏松的药物。
[0045] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种盐酸布替糞芬的药物组合物，其特征在于:包括盐酸布替糞芬、如权利要求1所 述的化合物(I)和药学上可W接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的盐酸布替糞芬的药物组合物，其特征在于:药学上可W接受的 载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附 载体或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的盐酸布替糞芬的药物组合物，其特征在于：所述剂型包括片 剂、胶囊剂、日服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注 射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含W下操作步骤：（a)将百 部的干燥块茎粉碎，用65~75%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油 酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃 取物；（b)步骤(a)中正下醇取物用大孔树脂除杂，先用20%乙醇洗脱9个柱体积，再用65% 乙醇洗脱10个柱体积，收集65%洗脱液，减压浓缩得65%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中 65%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:l、35:l、15:l和7:l的二氯甲烧- 甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为 12:1、7:1和1:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基娃 烧键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为58 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集11~15个柱 体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用70%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为DlOl型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烧代 替乙酸乙醋进行萃取，得到二氯甲烧萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗骨质疏松的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的盐酸布替糞芬的药物组合物在制备治疗骨质疏松的药物 中的应用。
【文档编号】A61K31/137GK105906682SQ201610257553
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月23日
【发明人】陈斌
【申请人】陈斌