一种金福菇菌种低温保藏及解冻方法
【专利摘要】本发明公开了一种金福菇菌种低温保藏及解冻方法，其特征在于其包括如下步骤：（1）菌种低温保藏：取金福菇液体菌种1.5ml，加入0.5ml的1%浓度的黄原胶保护液，?20℃液体管冷冻保藏；（2）解冻：取冻存种，立即放入35?40℃的水中，摇晃快速解冻，然后转入GPY固体培养基，28℃恒温培养。本发明保持金福菇菌种活力高、不退化、操作简便、价格低廉、设备要求低、占据空间小、易于推广。
【专利说明】
一种金福菇菌种低温保藏及解冻方法
[0001 ] 技术领域:
本发明涉及一种金福菇菌种低温保藏及解冻方法，涉及微生物菌种保藏技术领域。
[0002]【背景技术】:
金福燕CTrIcho1ma Lobayensc )，又名巨大口蘑、大白口蘑，属担子菌门，伞菌纲，伞菌目，口菇科，香菇属;是近年来驯化成功栽培的食用菌新秀，其子实体内含有丰富的蛋白质和粗纤维，子实体肥嫩，口感鲜美，且耐贮性好，深受广大消费者喜爱；因其为高温菇，所以可与其他低温菇按季节混合栽培;适合栽培基质较广，生物转化率较高，经济效益显著；国内外专家认为，金福菇栽培有光明的前景。良好的菇种更加需要优良、简便的菌种保藏方式，从而推动产业的发展。
[0003]目前常用的菌种保藏方式为液氮超低温保存、冷冻干燥保存、石蜡油保存、试管斜面传代保存等。
[0004]液氮超低温保存、冷冻干燥保存方法虽然效果良好，但其需要良好的设备及技术，投入过高，不适合在企业推广;石蜡油保存、试管斜面传代保存方法虽然简单、廉价，但保存时间短，每隔一段时间就得重新转管、传代，这对于遗传稳定性较高的菌株影响不大，但对于遗传稳定性较差的菌株则影响很大，会由于保藏时间长及转接次数过多导致培养基缩水、染菌、菌种退化，而且这两种方法占用空间体积大，需要配备较多的冷藏设备空间。
[0005]液体管冻存方法操作简单、占用空间面积小、保藏时间长，但却并不适用于所有食用菌菌种保藏。许多食用菌菌种冷冻会致死。液体管冻存分为-20°C冻存(普通家用冰箱)和-70°C冻存(超低温冰箱)两种。超低温冰箱冻存效果更好，但设备价格价格昂贵，在企业极少配备;而家用冰箱价格低廉，企业单位普遍配备。所以研究菌种的_20°C液体管冷冻保藏方法，更有推广价值。
[0006]
【发明内容】
:
本发明的目的在于克服上述已有技术的不足而提供一种保持金福菇菌种活力高、不退化、操作简便、价格低廉、设备要求低、占据空间小、易于推广的金福菇菌种低温保藏及解冻方法。
[0007]本发明的目的可以通过如下措施来达到:一种金福菇菌种低温保藏及解冻方法，其特征在于其包括如下步骤:
(1)菌种低温保藏:取金福菇液体菌种1.5ml，加入0.5ml的1%浓度的黄原胶保护液，-20°C液体管冷冻保藏；
(2)解冻:取冻存种，立即放入35-400C的水中，摇晃快速解冻，然后转入GPY固体培养基，28 °C恒温培养。
[0008]为了进一步实现本发明的目的，其特征在于其包括如下步骤:
(I)菌种低温保藏:
①金福菇液体菌种的培养:
无菌条件下，挑取黄豆粒大小金福菇试管种，接种于GPY液体培养基中，GPY液体培养基的配方组分以g/L计为:酵母膏10，蛋白胨6，葡萄糖20，余量水;280C、160rpm恒温培养8天； ②保护液的制备:
制备1%浓度的黄原胶作为保护液:准确称取Ig黄原胶固体，溶于10ml水中，121°C，灭菌30min;
③超净工作台内，采用无菌操作，用移液枪分别在不同的2ml冻存管中加入0.5ml-1.5ml的1%浓度的黄原胶保护液，然后加入准备好的金福菇液体菌种0.5ml-l.5ml;
④将准备好的冻存管菌种放入冻存盒，置于-20°C冷冻保藏；
(2)解冻:
①取出冻存的金福菇菌种，立即放入35-40°C的恒温水浴锅中，摇晃快速解冻，直到全部解冻为止；
②取0.5ml保藏菌种，无菌操作移至GPY固体培养基上28°C恒温培养，观察测定菌丝生长状况。
[0009]本发明同已有技术相比可产生如下积极效果:
1.采用-20°C低温冷冻保藏法，通过加入保护剂低温进行冷藏。其所需设备条件及操作程序远远低于液氮冷藏，只需一台普通冰箱就可完成。
[0010]2.通过筛选保护液及其浓度后，将保护液与菌种混合，放置于-20°c保存即可，不需要补充液氮，也不用像传代培养一样定期活化，保藏方法简便易行，价格低廉，非常适合应用于普通科研单位及广大生产单位。
[0011]3.保藏于2ml冻存管中，占用保藏体积小，一个一百平方厘米的冻存盒能装一百个冻存管。
[0012]4.可以按盒分类，用时取出一管，管理方便。
[0013]5.保存时间2年以上，不需要定期传代，减少染菌及菌种退化的几率。
[0014]6.采用1%浓度的黄原胶作为保护液，黄原胶为微生物产生的生物大分子，无毒，易于降解，来源广泛。具有快速吸水能力，吸收细胞外的水分，增加粘度，使菌液悬浮，减少冰晶的形成，同时使形成的刺状冰晶尖端变钝，从而降低细胞外水分低温形成的冰晶刺破细胞的几率;降低溶液中电解质浓度，减少溶质损伤;黄原胶是由微生物荚膜产生，对于微生物本身具有保护作用，且其受PH、盐等条件影响较小。研究表明，黄原胶在温度升高到120°C时，其粘度仅下降3%，非常适合保藏过程中的高温灭菌环节。黄原胶来源广泛，价格便宜，保存效果好。
[0015]7.所用培养基及温度等培养条件，均为试验后得出的结果，适合金福菇菌丝生长。
[0016]【具体实施方式】:下面对本发明的【具体实施方式】作详细说明:
实施例1:
(I)菌种低温保藏:
①金福菇液体菌种的培养:
无菌条件下，挑取黄豆粒大小金福菇试管种，接种于GPY液体培养基中，GPY液体培养基的配方组分以g/L计为:酵母膏10，蛋白胨6，葡萄糖20，余量水;28 0C、160rpm恒温培养8天。
[0017]②保护液的制备:
制备1%浓度的黄原胶作为保护液:准确称取Ig黄原胶固体，溶于10ml水中，121°C，灭菌30min。
[0018]③超净工作台内，采用无菌操作，用移液枪分别在不同的2ml冻存管中加入0.5ml的1%浓度的黄原胶保护液，然后加入准备好的金福菇液体菌种1.5ml。
[0019]④将准备好的冻存管菌种放入冻存盒，置于-20°C冷冻保藏。
[0020](2)解冻:
①取出冻存的金福菇菌种，立即放入35-40°C的恒温水浴锅中，摇晃快速解冻，直到全部解冻为止，尽量减少形成的冰晶对细胞的伤害。
[0021]②取0.5ml保藏菌种，无菌操作移至GPY固体培养基上28°C恒温培养，观察测定菌丝生长状况。
[0022]实施例2:
(I)菌种低温保藏:
①金福菇液体菌种的培养:
无菌条件下，挑取黄豆粒大小金福菇试管种，接种于GPY液体培养基中，GPY液体培养基的配方组分以g/L计为:酵母膏10，蛋白胨6，葡萄糖20，余量水;28 0C、160rpm恒温培养8天。
[0023]②保护液的制备:
制备1%浓度的黄原胶作为保护液:准确称取Ig黄原胶固体，溶于10ml水中，121°C，灭菌30min。
[0024]③超净工作台内，采用无菌操作，用移液枪分别在不同的2ml冻存管中加入Iml的1%浓度的黄原胶保护液，然后加入准备好的金福菇液体菌种lml。
[0025]④将准备好的冻存管菌种放入冻存盒，置于_20°C冷冻保藏。
[0026](2)解冻:
①取出冻存的金福菇菌种，立即放入35-40°C的恒温水浴锅中，摇晃快速解冻，直到全部解冻为止，尽量减少形成的冰晶对细胞的伤害。
[0027]②取0.5ml保藏菌种，无菌操作移至GPY固体培养基上28°C恒温培养，观察测定菌丝生长状况。
[0028]实施例3:
(I)菌种低温保藏:
①金福菇液体菌种的培养:
无菌条件下，挑取黄豆粒大小金福菇试管种，接种于GPY液体培养基中，GPY液体培养基的配方组分以g/L计为:酵母膏10，蛋白胨6，葡萄糖20，余量水;28 0C、160rpm恒温培养8天。
[0029]②保护液的制备:
制备1%浓度的黄原胶作为保护液:准确称取Ig黄原胶固体，溶于10ml水中，121°C，灭菌30min。
[0030]③超净工作台内，采用无菌操作，用移液枪分别在不同的2ml冻存管中加入1.5ml的1%浓度的黄原胶保护液，然后加入准备好的金福菇液体菌种0.5ml。
[0031]④将准备好的冻存管菌种放入冻存盒，置于_20°C冷冻保藏。
[0032](2)解冻:
①取出冻存的金福菇菌种，立即放入35-40°C的恒温水浴锅中，摇晃快速解冻，直到全部解冻为止，尽量减少形成的冰晶对细胞的伤害。
[0033]②取0.5ml保藏菌种，无菌操作移至GPY固体培养基上28°C恒温培养，观察测定菌丝生长状况。
[0034]以上的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。
【主权项】
1.一种金福菇菌种低温保藏及解冻方法，其特征在于其包括如下步骤: (1)菌种低温保藏:取金福菇液体菌种1.5ml，加入0.5ml的1%浓度的黄原胶保护液，-20°C液体管冷冻保藏； (2)解冻:取冻存种，立即放入35-40°C的水中，摇晃快速解冻，然后转入GPY固体培养基，28 °C恒温培养。2.根据权利要求1所述的一种金福菇菌种低温保藏及解冻方法，其特征在于其包括如下步骤: (1)菌种低温保藏: ①金福菇液体菌种的培养: 无菌条件下，挑取黄豆粒大小金福菇试管种，接种于GPY液体培养基中，GPY液体培养基的配方组分以g/L计为:酵母膏10，蛋白胨6，葡萄糖20，余量水;280C、160rpm恒温培养8天； ②保护液的制备: 制备1%浓度的黄原胶作为保护液:准确称取Ig黄原胶固体，溶于10ml水中，121°C，灭菌30min; ③超净工作台内，采用无菌操作，用移液枪分别在不同的2ml冻存管中加入0.5ml-.1.5ml的1%浓度的黄原胶保护液，然后加入准备好的金福菇液体菌种0.5ml-l.5ml; ④将准备好的冻存管菌种放入冻存盒，置于-20°C冷冻保藏； (2)解冻: ①取出冻存的金福菇菌种，立即放入35-40°C的恒温水浴锅中，摇晃快速解冻，直到全部解冻为止； ②取0.5ml保藏菌种，无菌操作移至GPY固体培养基上28 °C恒温培养，观察测定菌丝生长状况。
【文档编号】C12N1/14GK105950474SQ201610308333
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年5月11日
【发明人】程显好, 孙磊, 刘静, 李维焕
【申请人】鲁东大学