一种细胞透膜迁移实验用装置及制作用型模的制作方法
【技术领域】
[0001] 本实用新型属于一种细胞迀移实验用装置，特别是一种细胞透膜迀移实验用装置 及制作用型模。
【背景技术】
[0002] 现有的用于细胞迀移实验的方法和装置主要有传统的琼脂糖下细胞迀移实验和 Transwell基础上的细胞体外侵袭装置。
[0003] 如现有的技术文献1，其公开号为CN102181397 A，专利号为ZL 201110039718. 8， 该文献公开了一种喉鳞癌软骨侵袭模型，"其包括喉鳞癌侵袭体外实验模型、喉鳞癌软骨侵 袭半离体试验模型和喉鳞癌软骨侵袭体内试验模型。作为优选，所述喉鳞癌侵袭体外实验 模型的构建方法如下。
[0004] 第一步：以聚碳酸脂微孔滤膜封闭Transwell小室杯底；第二步：人工重建基底膜 Matrigel按1 : 5比例用无血清RPMI-1640稀释后取100 u L均匀地涂在滤膜上；第三步： 待Matrigel形成凝胶状后，将Transwell小室放入24孔板细胞培养孔中，用紫外线照射2h 杀菌备用；第四步：下室加入含10%小牛血清的RPMI1640培养基，喉鳞癌Hep-2细胞均匀 加入上室，37°C条件下培养24h ;第五步：培养后轻轻拭去杯底部Matrigel胶和未浸润的细 胞，乙醇固定，结晶紫染色；第六步：光镜下观察并随机选取4个视野，计数穿膜细胞数并取 其平均值，以穿膜细胞的相对数目代表侵袭力"。
[0005] 现有技术文献1中所述的研究细胞体外侵袭实验装置在使用中存在如下缺陷。
[0006] 1、不可以直观地观察细胞的迀移运动，计数细胞的个数。
[0007] 2、膜上的细胞在进行固定染色的过程中可能会丢失，从而影响实验的准确性。
[0008] 3、实验结束后仅能对膜上的细胞进行固定染色观察，难以收集细胞进行后续的实 验。
[0009] 又如现有技术的 Science Signaling 上的文献 2 Measuring Chemotxis and Chemokinesis: The Under-Agarose Cell Migration Assay 中涉及的目前最经典的琼脂糖 下细胞迀移实验。该实验是在琼脂糖凝胶上垂直打洞直到培养皿底面，然后将细胞和趋化 物加入不同的孔道中，是细胞在琼脂糖和培养皿的缝隙间迀移运动。实验结束后移去琼脂 糖对琼脂糖底部培养皿表面的细胞进行固定染色，然后进行观察。
[0010] 现有技术文献2中所述的研究细胞体迀移的实验在使用中存在如下缺陷。
[0011] 1、只能观察细胞在琼脂糖下的迀移运动，没有跨膜的过程。
[0012] 2、培养皿上的细胞在进行固定染色的过程中更容易丢失，并且在移除琼脂糖的过 程中可能使大量的细胞移位，从而影响实验的准确性。
[0013] 3、实验结束后仅能对培养皿上的细胞进行固定染色观察，难以收集细胞进行后续 的实验。
【发明内容】
[0014] 本实用新型的目的是克服现有技术的不足，研究并设计一种可以直观的观察细胞 穿过高分子滤膜的迀移运动，精确计数细胞的个数，并且便于收集迀移过膜的细胞进行后 续实验的细胞透膜迀移实验用装置及制作用型模。
[0015] 实现本实用新型目的的技术方案是：
[0016] -种细胞透膜迀移实验用装置，其特征是由装有胶凝状琼脂糖的圆形培养皿，培 养皿中胶凝状琼脂糖围成的细胞用孔，培养皿中胶凝状琼脂糖围成的且与细胞用孔间隔距 离的趋化物用孔，培养皿中胶凝状琼脂糖围成的连通于细胞用孔和趋化物用孔之间的直线 形迀移通道，阻隔于迀移通道中间的有序地布有微孔的高分子滤膜构成。
[0017] 琼脂糖，即琼脂（Agar)，又名琼胶、菜燕、冻粉，是一类从石花菜及其它红藻类 (Rhodophyceae)植物提取出来的藻胶（phycocottoid)，琼脂糖Agarose，缩写为AG，是琼脂 中不带电荷的中性组成成份，也译为琼胶素或琼胶糖。琼胶糖化学结构由P-D-吡喃半乳 糖（1-4)连接3, 6-脱水a-L-吡喃半乳糖基单位构成。琼脂、琼脂糖因为有特殊的胶凝性 质，尤其有显著的稳固性、滞度和滞后性，并且易吸收水分，有特殊的稳定效应。
[0018] 趋化物，即趋化因子，也称做趋化激素、趋化素或是化学激素。是一小分子细胞因 子家族蛋白。趋化因子的主要作用是趋化细胞的迀移.细胞沿着趋化因子浓度增加的信号 向趋化因子源处迀徙。有些趋化因子在免疫监视过程中控制免疫细胞趋化，如诱导淋巴细 胞到淋巴结。
[0019] 所述细胞用孔、趋化物用孔、迀移通道深度相同，迀移通道宽度小于细胞用孔、趋 化物用孔的孔径。
[0020] 所述高分子滤膜采用聚酯纤维膜中的多孔聚碳酸脂膜。
[0021] 制作所述的细胞透膜迀移实验用装置用的型模，其特征是由两边具有圆弧状竖直 边沿的底盘，位于底盘中央的依据细胞用孔、趋化物用孔、迀移通道、高分子滤膜的形状及 大小尺寸和相互结构制成的凸柱状模具构成。
[0022] 型模，即成型模具。依据实物的形状和结构按比例制成的模具，用压制或浇灌的方 法使材料成为一定形状的工具。
[0023] 所述底盘两边圆弧状竖直边沿围成的下凹圆弧内径等于培养皿的外径。
[0024] 所述底盘两边圆弧状竖直边沿的高度小于凸柱状模具的高度。
[0025] 所述凸柱状模具的上端面形状及大小尺寸与细胞用孔的底面、趋化物用孔的底面 及迀移通道的底面相同，所述凸柱状模具的高度与细胞用孔、趋化物用孔、迀移通道深度相 等。
[0026] 所述模具对应于细胞透膜迀移实验用装置中高分子滤膜的位置开设有宽度与高 分子滤膜厚度相等的嵌膜槽。
[0027] 本实用新型实施得到的细胞透膜迀移实验用装置，经试用，与现有技术相比显示 了如下有益效果。
[0028] (1)可以直观的观察细胞穿过多孔聚酯纤维膜的迀移运动，精确计数细胞的个数。 由于所需观察的细胞在本实用新型实施得到的细胞透膜迀移实验用装置中可以在琼脂糖 凝胶表面以跨膜的形式横向爬行运动，与传统的Transwell实验、现有技术文献1以及传统 的琼脂下细胞迀移实验相比，该实验不仅可以观察实验细胞的迀移运动，还能观察细胞跨 膜运动的方式；同时如果实验需要，也可以在活细胞工作站中对细胞迀移实验进行长时间 的观察；并且迀移实验结束后，可以在显微镜下更加精确的计数穿过高分子滤膜的细胞个 数。
[0029] (2)便于收集迀移过膜的细胞进行后续实验。无论是技术文献2中的传统的琼脂 糖下细胞迀移实验还是现有技术文献1中提到的Transwell基础上的细胞体外侵袭实验， 仅仅只能在实验结束后固定膜上或者培养皿上的细胞并染色观察细胞的形态改变，并且细 胞容易大量丢失。而本实用新型实施得到的细胞透膜迀移实验用装置可以在实验结束后收 集趋化物一侧孔道中的细胞，同样可以进行固定染色观察，并且细胞不会丢失；更可贵的是 还能便于进行后续的实验，例如检测迀移出聚酯膜的中性粒细胞的吞噬功能实验等。
【附图说明】
[0030] 图1为符合本实用新型主题结构的细胞2个方向透膜迀移实验用装置示意图。
[0031] 图2为图1中沿A-A剖面结构示意图。其中的剖切方向是从圆形培养皿的底部 由下向上铅垂剖切，然后再由前向后观察得到图2。
[0032] 图3为符合本实用新型主题结构的细胞1个方向透膜迀移实验用装置示意图。
[0033] 图4为图3中沿B-B剖面结构示意图。其中的剖切方向是从圆形培养皿的底 部由下向上铅垂剖切，然后再由前向后观察得到图4。
[0034] 图5为符合本实用新型主题结构的高分子滤膜示意图。
[0035] 图6为制作细胞透膜迀移实验用装置制作用型模结构示意图。
[0036] 图7为不同浓度fmlp对中性粒细胞穿过多孔聚碳酸酯膜的透膜迀移影响实验结 果柱状分析图。
[0037] 图8为不同浓度C5a对中性粒细胞穿过多孔聚碳酸酯膜的透膜迀移影响实验结果 柱状分析图。
[0038] 图9为10 y M浓度的fmlp和200ng浓度的C5a对中性粒细胞穿过多孔聚碳酸酯 膜的透膜迀移影响实验结果柱状分析图。
【具体实施方式】
[0039]