专利名称：：螯合剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及当疏水相分散于亲水相中时，可促进一般并不能溶解在疏水相中的亲水性分子在所说的疏水相中溶解并保留的某种化合物的用途。本发明尤其涉及该种试剂促进亲水性大分子在一般情况下并不溶于其中的疏水相中保留的用途。由于蛋白质和类似大分子的亲水性和高极性限制了它们与类脂相的相互作用或渗透的程度，它们在诸如药物、食品或化妆品工业等许多应用领域都产生问题。许多生物体拥有类脂边界(如皮肤、细胞膜)以防止亲水性分子进入到内部；如果在类脂介质中可以分散蛋白质，将为这些大分子进入到生物体系开辟了一条新的途径。含有蛋白质的类脂介质能够与边界的疏水性构成或成分结合，而不是被排斥。将亲水性物质分散于油相而不是含水介质中对提高亲水性物质的稳定性具有多种好处，如温致变性、水解和对光敏感等方面。与水溶液比较，所选择的油相可在较宽的温度范围内保持液态或具有较高的粘度，能起到较大的保护作用，防止物性的破坏。在混合相体系中，在油相中加入疏水性物质能够同时降低油相和水相中与其它试剂的有害相互作用，例如氧化。现在已有许多含有大分子和油类物质的组合的实例，在EP-A-0366277中公开了一个这样的实例。该专利公开的组合物是一个含有疏水相和亲水相的乳液，其中疏水相含有乳糜或形成乳糜的类脂。但该大分子物质溶于亲水相中而不是溶解在疏水相中。EP-A-0521994也涉及了一种大分子的口服液组合物，它含有卵磷脂类生理活性物质或可作为体内卵磷脂前体的化合物。所有的组合物实例都包含亲水相和亲油相。与前一个专利一样，大分子物质只是溶解于亲水相中，而不是溶解在亲油相中。虽然上述的组合物确实同时含有大分子和油类，但在所有情况下大分子物质开始时仅仅溶于亲水相中，而不是溶解在亲油相中。制备大分子在油相中的真正溶液的努力仅获得了有限的成功。Okahata等(J.Chem.Soc.Chem.Commun.，1988，1392-1394)公开了一种将蛋白质加溶于疏水性溶剂中的方法。但作者指出，在许多被两亲分子包围的蛋白质中，两亲分子在水相中通过氢键或通过静电作用与蛋白质相互作用而形成了固体沉淀物。英国专利申请UKNo.9323588.5公开了一种能够将亲水性物种加溶在它一般情况下不溶于其中的疏水性溶剂中的方法。该方法依据的是一个出人意料的发现，即如果将亲水性物种在特定条件下与两亲物质混合，则得到的组合物将易溶于疏水性溶剂如油类中。但是该方法一个潜在的问题是用它来制造乳液，即在亲水相中例如水中将单相的疏水性制剂进行分散。在这种分散中将存在被加溶的亲水性物种逆于加溶过程而“泄露”到亲水相中的倾向，至少在有些场合下如此。因此需要减小这种效应以确保即使是疏水相随后要分散在亲水相中时，亲水性物种仍保留在疏水相中。现已出人意料地发现，当疏水相分散于亲水相中如形成乳液时，某种化合物能够降低加溶于疏水相中的亲水性物种与亲水相之间的直接相互作用的程度。因此，本发明首先提供一种降低加溶于疏水相中的亲水性物种与疏水相分散于其中的亲水相之间直接相互作用的试剂的用途。本发明中“试剂”一词是指当疏水相本身分散于亲水相中例如形成乳液时，能够降低加溶于一般并不溶于其中的疏水相中的亲水性物种与亲水相直接相互作用的任何物种。本发明其次提供含有被加溶在一般并不溶于其中的疏水性溶剂中的亲水性物种以及能够降低亲水性物种与疏水相分散于其中的亲水相之间直接相互作用的试剂的单相疏水性制剂。很显然，虽然亲水性物种可能与亲水相单个的分子相接触，但它并不与亲水相本体相接触，这样就减少了亲水物种向亲水相中的“泄露”。本发明中“亲水性物种”一词是指一般可溶于含水溶剂中但不溶于疏水性溶剂中的任何物种。适当地，试剂可以是(I)酸性类脂，例如胆甾醇半丁二酸酯(Chems)或磷酯酸；或(ii)不能渗入疏水相中的乳液稳定剂，例如，酪蛋白之类的化合物。第三，本发明还提供用于降低加溶于一般并不溶于其中的疏水性溶剂中的亲水性物种与疏水相分散于其中如形成乳液的亲水相之间直接相互作用的一种试剂。此处所述的试剂适合用于英国专利申请UKNo.9323588.5中所述的加溶方法中。因此，本发明进一步还提供在疏水性溶剂中含有亲水性物种的单相疏水性制剂的制备方法，该方法包括(i)在液体介质中将亲水性物种与两亲物缔合，在该液体介质中两亲物与亲水性物种之间无化学相互作用；(ii)将液体介质除去，剩下的两亲分子的亲水性端基朝向亲水性物种取向排列；以及(iii)在亲水性物种/两亲物排列的周围加入疏水性溶剂；其中，在上述的一个或多个步骤中加入降低亲水性物种与疏水相分散于其中的亲水相之间直接相互作用的试剂。在这种方法中该试剂优选在第(i)步中与两亲物同时加入，并优选是一种不能渗入疏水相中的乳液稳定剂，如胆甾醇半丁二酸酯(Chems)或磷脂酸(PA)。本发明中“化学相互作用”是指如共价键或离子键或氢键的相互作用。不包括范德华力或其它这种数量级的相互作用。本发明另一方面提供了一种将在疏水性溶剂中含有亲水性物种的单相疏水性制剂分散于亲水相中的方法，它包括往亲水相中加入一种降低亲水性物种和亲水相之间直接相互作用的试剂的步骤。在该方法中，试剂优选是不能渗入疏水相中的乳液稳定剂，例如，酪蛋白之类的化合物。许多种类的大分子物质能够适用本发明的方法进行加溶。这种大分子化合物一般是亲水性的，或至少带有亲水性的部位，而在油性溶液中加溶疏水性大分子一般很少有困难。适宜的大分子的例子包括蛋白质和糖蛋白，寡聚和多聚核酸例如DNA和RNA，多糖以及任意这些分子的超分子组合体，有时包括整个细胞、细胞类脂质或病毒(整个或其中的部分)。也可以将小分子如维生素与大分子、特别是多糖如环糊精缔合而共加溶。小分子如维生素B12也可以与大分子进行化学键连，因此也包括在组合物中。特别地，当被加溶的大分子物质是蛋白质或多肽时，试剂优选为酸性类脂。用本发明的方法可成功地进行加溶的具体蛋白质的例子包括胰岛素、降血钙素、血红蛋白、细胞色素C、辣根过氧化物酶、抑肽酶、蘑菇酪氨酸酶、促红细胞生成素、生长激素(somatotropin)、生长激素(growthhormone)、生长激素释放因子、galanin、尿激酶、因子IX、组织血纤维蛋白溶酶原活化剂、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、铁蛋白、干扰素、因子VIII、黑素和它们的片段(以上所有的蛋白质可有各种来源)。其它可以使用的蛋白质为FITC标记的葡聚糖和Torula酵母的RNA提取物。除了大分子物质外，本发明的方法还可用于加溶有机小分子。有机小分子的例子包括葡萄糖、抗坏血酸、羧基氢化荧光素和许多药学试剂例如抗癌药，当然该方法同样适用于其它有机小分子，例如其它维生素或药理或生理活性物质。另外，诸如氯化钙和磷酸钙类的分子也可用本发明的方法进行加溶。实际上，由于使用非水溶液，改善了分子进入体内的途径，例如提高了生物有效性，本发明可特别有利地用于药理和生理活性物质。在本发明的疏水性组合物中可能包括的另一类物质是无机材料，例如无机小分子或胶体物质，例如胶态金属。本发明的方法能够使胶态金属如胶态金、钯、铂或铑甚至在疏水性溶剂中保持其胶态金属的一些性质，而在正常条件下，这些颗粒在疏水性溶剂中是会凝聚的。这对于在有机溶剂中进行的反应的催化特别有用。有相当多的两亲物可用于本发明中，其中两性离子两亲物如磷脂被发现是尤为适宜的一种。含有磷脂酰胆碱(PC)端基的磷脂的应用尤为成功，此类磷脂的例子包括磷脂酰胆碱本身(PC)、溶血磷脂酰胆碱(lyso-pc)、神经鞘磷脂，这些磷脂中任何一个的衍生物如十六烷基胆碱磷酸或含有磷酰胆碱的两亲聚合物和卤化两亲物如氟化磷脂。在本应用中，磷脂酰胆碱(PC)和卵磷脂是等同的。适用的天然卵磷脂可以是任意来源，例如鸡蛋和特别是大豆。在大多情况下，优选与所用的疏水性溶剂化学上相近的两亲物，这将在下面给予更详细的讨论。本发明人发现两性离子两亲物如磷脂特别适用于本发明方法，这进一步显示出本发明与Okahata等的方法明显不同。前述专利的作者总结认为，负离子和两性离子型类脂完全不适用于他们的方法，并指出采用这些类脂时复合物的产率为零。疏水性溶剂的选择将取决于组合物的最终用途、被加溶物种的类型以及两亲物。适用的溶剂包括非极性油类，如矿物油、角鲨烷和角鲨烯；长链脂肪酸，其中优选不饱和脂肪酸，如油酸和亚油酸；醇类，特别是中等链长的醇如辛醇，和支化的长链醇如植醇、类异戊二烯如花醇和香叶醇、萜品醇；单酸甘油酯，如单油酸甘油酯(GMO)；其它酯类，如乙酸乙酯、乙酸戊酯和乙酸冰片酯；二酸甘油酯和三酸甘油酯，特别是中等链长的三酸甘油酯和它们的混合物，任意前述物质的卤化同类物，包括卤化油类，例如长链氟碳烃或碘化三酸甘油酯，例如类脂醇。当疏水性溶剂与两亲物近似匹配时，一般可达到最佳的结果。例如，油酸作溶剂时，溶血磷脂酰胆碱(lyso-PC)是比磷脂酰胆碱(PC)更为有效的两亲物，而当疏水性溶剂为三酸甘油酯时，情况则正好相反。另外发现，有些情况下，在疏水相与亲水性物种/两亲物排列相接触之前，向疏水性溶剂中加入一定量的两亲物更有好处。这确保两亲分子不会由于两亲物对疏水性溶剂高的亲合力而从围绕亲水性物种的位置上脱离。非常优选本发明的制剂是光学透明的，能够通过在可见波长内测量浊度或有时经过一段时间检测其沉降情况来检测。可通过几种途径来实现两亲性分子以其亲水端基面向亲水物种部位定向排列，特别适用的方法的实例在下面更详细地给予讨论。第一种方法，其出发点与Kirby等描述的方法的出发点相似〔生物工程(Biotechnology)，1984年11月，979-984，和LiposomeTechnology，第I卷，19-27页，Gregoriadis，Ed，CMCPress，Inc.，BocaRaton，Florida，USA〕，将亲水性物种与两亲物在亲水性溶剂中的分散体相混合，这样两亲性分子就进行排列，其亲水性端基向外面向含有亲水性物种的亲水相。然后除去亲水性溶剂以留下干的组合物，其中两亲性分子的亲水性端基就定向朝向亲水性物种。在Okahata等所述的方法中，也是将蛋白质溶剂与两亲物在水中的分散体相混合。但是，很显然，这些作者相信，需要得到一种后来可溶于疏水性溶剂中的沉淀物。由于许多本发明优选的两亲物不生成沉淀物，Okahata等认定它们是没有用的。在本发明的方法中不要求生成沉淀，而且事实上一般认为沉淀物的生成是不希望的，因为这会降低预期产物的产率。在第一种方法中，虽然也可以使用其它极性溶剂，但优选水作为亲水性溶剂。两亲物所采取的集合形式可以是胶束、单层囊泡(优选一般理解的直径约为25纳米的小单层囊泡)、多层囊泡或管形结构(例如螺旋状圆柱形)、六方形、立方形或髓磷脂型结构。集合形式依赖于所选用的两亲物，例如象磷脂酰胆碱(PC)的两亲物倾向于生成单层囊泡，而溶血磷脂酰胆碱则生成胶束。但在所有这些结构中，两亲分子的疏水性尾巴向内伸向结构的中心，而亲水性端基朝外伸向分散有亲水性物种的溶剂。两亲物与亲水性物种的重量比一般在1∶1至100∶1的范围内，优选为2∶1至20∶1，对于PC尤为优选约8∶1，对于lyso-PC，尤为优选4∶1。这些比例仅为优选的比例，特别需要指出的是其上限是出于经济上的考虑而定的，即优选采用尽可能少量的两亲物。下限相对较为关键，2∶1或更低的比例看来只适用于亲水性物种具有很大的疏水部分或本身异常大的情况。在较快地除去溶剂下可获得好的效果，一种除去溶剂的便利方法是冷冻干燥，但也可采用其它方法。有些情况下在亲水性溶液中含有盐类可能会有所帮助，特别是如果亲水性物种为大分子化合物如大的蛋白质时。但是，由于大量无机盐的存在倾向于引起晶体的生成和因此导致浑浊溶液的出现，因此可能优选采用有机盐而不是无机盐如氯化钠。乙酸铵由于有额外的优点尤其符合这种需要，因为它较易通过冷冻干燥而被除去。第二种制备含有其头部基团指向亲水性物种亲水部位的两亲物排列的组合物的方法是将亲水性物种和两亲物在共同的溶剂中进行共加溶，然后再除去溶剂。本发明这种方法的产物是新的，因而也是本发明的一个方面，它提供含有在疏水性溶剂中的亲水性物种的单相疏水性制剂。在单相疏水性制剂中除亲水性物种外还可包含其它成分。当亲水性物种为大分子时这一点特别适宜，而且此时制剂可能含有与大分子键合或缔合的分子，例如胆汁盐、维生素或其它小分子。尽管Kirby等公开了一些大分子/两亲物排列物，但所公开的排列物都是生成脂质体的中间体，而且如前讨论，它们并没有意识到含有这种排列物的非脂质体或疏水性组合物。因此，在本发明的排列物中两亲物并不形成单层囊泡，因此也不会被预期生成脂质体，该排列物是新的。本发明制剂的一个优点是它们是无水的，因而对于水解是更为稳定的。在蛋白质的情况下，它们对冻熔也是稳定的，对高温也有更大的稳定性，可能是由于为使蛋白质展开和变性必须有水存在的缘故。这意味着，亲水性物种比它们的水溶性制剂可有更长的贮存期。本发明的溶液具有突出的多方面适用性，可用于许多应用中。它们可以单独使用，但优选将它们与含水相混合以形成乳液或类似的两相组合物，这也构成了本发明的一个方面。在本发明的这一方面中，提供了含有亲水相和疏水相的两相组合物，疏水相中含有可按本文所述的方法得到的亲水性物种在亲脂性溶剂中的制剂。一般地，在这种组合物中，疏水相将分散于亲水相中。这种两相组合物可以是乳液，它可以是暂时地也可以是稳定的乳液，取决于它们所需的用途。乳液颗粒的平均尺寸取决于疏水相和水溶相两者本身的特性。但它可以在2微米左右。将疏水性制剂在水溶相中分散可通过混合而实现，例如可通过短时间强烈的涡流，如约10至60秒、通常在约15秒，也可通过几小时缓慢的混合，如使用轨道振荡器。本发明另一方面提供一种制备加溶有亲水性物种的疏水相的分散体如乳液的方法，包括将疏水相分散在亲水相中，其中加入一种降低被如此加溶的亲水性物种与疏水相分散于其中的亲水相之间直接相互作用的试剂。本发明将通过下面的实施例得到说明，这些实施例不应被看作是对本发明进行的任何限定。实施例1将60毫克四硼酸钠溶于100毫升蒸馏水中，并将pH值调至8.00，得到浓度为0.0015摩尔/升的硼酸盐缓冲液。在带有螺丝帽的B9玻璃管形瓶中称取5毫克BAPNA，加入3毫升甲醇溶解。称取10毫克胰蛋白酶在15毫升塑料离心管中，涡流搅拌下加入10毫升硼酸盐缓冲液。在辊形混合器中混合悬浮体，然后将不溶物质离心沉降，将上层清液倾析。沿着小盘的序列分放抑肽酶稀释液(每凹池50微升抑肽酶)，浓度分别为0到30微克/毫升。在上面的BAPNA溶液中加入1毫升至20毫升的缓冲液稀释20倍，然后向每凹池中加入100微升BAPNA工作溶液并彻底混合。将小盘在37℃下振摇培育40分钟，然后在405纳米的盘式读数器上进行读数。将由于被测物的变化产生的光密度对凹池中抑肽酶的浓度作图，可观察到有一个拐点，在此浓度下，抑肽酶恰好足够中和掉胰蛋白酶的活性。该拐点的位置随向凹池中加入到测试样品中的抑肽酶的添加量而移动，通过与标准样品比较可以推知拐点的浓度。由此可以得到从油中释放的抑肽酶和进入到水相中的抑肽酶的比例。将100微升按实施例4的方案超声化得到的大豆磷脂酰胆碱分散体(100毫克/毫升，蒸馏水中)和25微升抑肽酶溶液(20亳克/毫升，蒸馏水中)的混合物冷冻干燥，然后加入100微升Miglyol818，使抑肽酶加溶于Miglgol818中。在油相中抑肽酶的浓度为5毫克/毫升。按上法不加入抑肽酶制备出对比溶液。将10微升每种油与1毫升硼酸盐缓冲液搅拌10秒钟，得到这些油在水中的分散体。在这些二级分散体中抑肽酶的最终浓度为0到50微克/毫升。将分散体稀释两倍后按前法所述分加到小盘的凹池中，其中稀释液的浓度分别为0、5、10、15和25微克/毫升。归一化的光密度列于下表以及附图中。比较12.5微克/毫升浓度的对比标样，表明至少有50％的抑肽酶从油中释放进入到水相中实施例2按上一实施例所述将抑肽酶加溶在Miglyol818中，但磷脂分散体中含有磷脂酰胆碱以及10％(重量)的磷脂酸。顺序测试各分散体，并与对比标样25微克/毫升和12.5微克/毫升进行比较。经与这些标样比较，表明不超过25％的抑肽酶被释放到水相中实施例3按前面实施例所述将抑肽酶加溶在Miglyol818中，但磷脂分散体中含有10％(重量)的胆甾醇半丁二酸酯(chems)和磷脂酰胆碱。顺序测试各分散体，并与对比标样25、12.5和6.25微克/毫升进行比较。经与这些标样比较，表明不超过12.5％的抑肽酶被释放到水相中。</tables>实施例4制备大豆磷脂酰胆碱(soyPC)的水分散体，含有100毫克/克悬浮体，用氮气彻底吹洗，并用8微米振幅的波进行超声化。每个等分试样共进行4分钟的超声处理，其间停顿30秒用冰浴冷却30秒时间。然后将所得的单层小囊泡(SUV)的乳白色分散体进行15分钟离心处理以除去钛颗粒。胶体性金溶胶按下法制备。15微升25毫摩尔/升碳酸钾、15微升1％单宁酸和50毫克柠檬酸三钠与蒸馏水共同构成总重量为22.5克的溶液。将10毫升该溶液加入到25毫升带塞的玻璃锥形瓶(A)中并在水浴上加热至60℃。将25毫克氯化金三水合物与蒸馏水构成250毫克的溶液，并取50微升的该溶液加入到盛有40毫升蒸馏水的50毫升带塞玻璃锥形瓶(B)中，用同样的水浴加热至60℃。将瓶A中物与瓶B中物混合，加热维持75分钟，在此期间生成深红色胶体性金溶胶。冷却至室温后，向其中的10毫升中混入2毫克牛血清清蛋白以起稳定作用。将1毫升被稳定化的金溶胶与0.6毫升SUV混合，过夜冷冻干燥，并将所得的冷冻干燥物涡流搅拌下用300毫克Miglyol818分散。一小时以内生成胶态金在Miglyol中的澄清的红色分散体。将三个50毫克该分散体的等分试样加入到小玻璃管中，并在每个管中加入500毫克水、磷酸盐缓冲的葡萄糖溶液(300毫摩尔/升葡萄糖含1毫摩尔/升磷酸钠，pH为7.4)和SUV。将混合液涡流搅拌10秒钟进行乳化，然后进行观测。在1小时内，该乳液开始发生油相分层，静置过夜后分层已发生到很高的程度。在所有情况下都观察到下层水相的颜色变为粉红，表明部分胶态金从油相中被释放出来。但是，在SUV存在下进行乳化的制剂，其上层油状乳液相颜色保留的程度相当高，而下层水相相应地较低。因此磷脂SUV分散体的存在明显起到减少胶态金从油相流失的作用。实施例5将1毫升1％的胰岛素溶液(含2％乙酸助溶)与1微居里I125标记的胰岛素混合，然后加入3克实施例3所制的含SUV的胆甾醇半丁二酸酯。将该混合物冷冻干燥，并把冷冻干燥物与3克Miglyol818进行分散，在一轨道振荡器上混合4小时得到标记的胰岛素在油中的澄清分散体。两个等分的200毫克该分散体试样，每个都与800毫克磷酸盐缓冲液(PBS)混合，并分别涡流搅拌乳化10秒钟和30秒钟。得到的每种油/水乳液再用9毫升PBS稀释，再在80000g下离心40分钟以使乳液分层。将油相的表层仔细地转移到一管形瓶中，由于有残余的I125-标记胰岛素，可测量其γ放射性。将含有被释放的I125-标记胰岛素的上清液转移到单独的容器中，剩下可能生成的一些固体。将这些固体、上清液的代表部分和油相剩余物都进行放射性测定，对油相对上清液形成的任何污染做适当的校正。在两种乳液中，涡流分散30秒钟的乳液其油相中保留有45.4％的放射标记，离心固体有3.0％(其本质上可看作是脂质体)，而对于涡流分散10秒钟的乳液，相应的数值分别为43.3％和1.3％。作为比较，在另两个采用SUV制备油分散体的独立实验中，采用纯的SoyPC而不是SoyPC/Chems，油相保留的标记物的量为31％和28％，固体中每个都增加了1％。这表明采用含有Chems的两亲体系来制备蛋白质在油中的分散体，当油相被乳化而形成水/油二级分散体时，能够提高蛋白质在油相中的保留量。实施例6制备I125-标记的胰岛素，并按实施例3所述加入到油相中，但是采用下列的配方*PC/PASUV按实施例2制备一个100毫克制剂1试样和一个等量的制剂2试样分别加入到10毫升离心管中。在每个试样中加入1毫升PBS。两个都彻底地涡流搅拌10秒钟，然后后者用10毫升PBS稀释。然后按实施例2所述将乳液离心处理并分级成它们的组分相所得固体大体被认为是由含有高比例磷脂的油所构成。在含有磷脂酸的制剂中，被释放到水溶性上清液中的标记胰岛素的数量要比只含有磷脂酰胆碱的制剂的要少得多。实施例7制备I125-标记胰岛素并按实施例2加入到油相中，但采用下面的组成*PC/PASUV按实施例2制备。一个100毫克制剂1试样称取到10毫升离心管中，加入1毫升0.5％酪蛋白溶液并彻底地涡流搅拌10秒钟。然后用10毫升0.5％酪蛋白稀释管中的物质。然后按实施例2所述将乳液离心处理，其分级成它们的组分相可以看到，相当高比例的放射性标记胰岛素被保留在油相中。实施例8将0.8毫升25毫摩尔/升的氯化钙溶液与按实施例1所制备的0.8毫升SoyPCSUV相混合，过夜冷冻干燥并将所得冷冻干燥物与0.5克Miglyol818相混合。静置过夜后得到完全澄清的分散体。将150毫克分散体与约0.17毫克的Sudan4染料混合以对该部分分散体染色，得到澄清的深红色溶液。将2毫升1％藻酸钠溶液转移至玻璃试管中，涡流搅拌的同时用巴氏移液管将有色油分散体加入其中。将所得的不透明乳液在500g下离心5分钟，并将上层粉红色的富油相从下层澄清的水相中倾析出来，并在光学显微镜下观察。所有的油此时以大量的分立的小球珠存在。观察不到聚凝现象。一部分油珠看上去被一层外壁所包围，这据信是由于藻酸根与油珠中释放的钙离子在界面的配位所致。放置12天后，不管从微观还是宏观上看，该乳液仍无被破坏的迹象。权利要求1.一种降低加溶于疏水相中的亲水性物种与疏水相分散于其中的亲水相之间直接相互作用的试剂的用途。2.权利要求1所要求的用途，其中，所述试剂为酸性类脂或不能渗透疏水相的乳液稳定剂。3.权利要求2所要求的用途，其中，所述试剂为胆甾醇半丁二酸酯(Chems)、磷酯酸(PA)或酪蛋白。4.一种单相疏水性制剂，该制剂含有被加溶于疏水性溶剂中的亲水性物种以及降低亲水性物种与疏水性制剂分散于其中的亲水相之间直接相互作用的试剂，该亲水性物种一般并不溶于该疏水性溶剂中。5.在疏水性溶剂中包含亲水性物种的单相疏水性制剂的制备方法，该方法包括i)在液体介质中使亲水性物种与两亲物缔合，使得在该液体介质中两亲物与亲水性物种之间没有化学相互作用；ii)除去液体介质，余下两亲物分子的排列，其中两亲分子的亲水性端基朝向亲水性物种取向；和iii)在亲水性物种/两亲物排列的周围引入疏水性溶剂；其中，在上述的一个或多个步骤中，加入降低亲水性物种与疏水相分散于其中的亲水相之间直接相互作用的试剂。6.权利要求5所要求的方法，其中，所述试剂为酸性类脂。7.权利要求6所要求的方法，其中，所述试剂为胆甾醇半丁二酸酯(Chems)或磷脂酸(PA)。8.一种将含有加溶于疏水性溶剂中的亲水性物种的单相疏水性制剂分散于亲水相中的方法，该方法包括向亲水相中加入降低亲水性物种与亲水相之间直接相互作用的试剂的步骤。9.权利要求8所要求的方法，其中，所述试剂是不能渗透疏水相的乳液稳定剂。10.权利要求9所要求的方法，其中，所述试剂是酪蛋白。11.权利要求1至3中任一项所要求的用途，权利要求4所要求的制剂或权利要求5至10中任一项所要求的方法，其中，所述亲水性物种选自蛋白质、糖蛋白、寡聚和多聚核酸、多糖以及这些分子的超分子组合体。12.权利要求11所要求的用途、制剂或方法，其中，所述亲水性物质是胰岛素、降血钙素、血红蛋白、细胞色素C、辣根过氧化物酶、抑肽酶、蘑菇酪氨酸酶、促红细胞生成素、促生长素、生长激素、生长激素释放因子、galanin、尿激酶、因子IX、组织血纤维蛋白溶酶原活化剂、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、铁蛋白、干扰素、因子VIII、黑素以及它们的任意片段、DNA、RNA、FITC标记的葡聚糖或维生素B12。13.权利要求5至7中任一项所要求的方法，其中两亲物为磷脂。14.权利要求13所要求的方法，其中磷脂具有磷脂酰胆碱端基。15.权利要求14所要求的方法，其中，磷脂是磷脂酰胆碱(PC)、溶血磷脂酰胆碱(lyso-PC)、神经鞘磷脂、前述磷脂的衍生物如十六烷基胆碱磷酸或含有磷脂酰胆碱的两亲聚合物。16.权利要求5至7或13至15中任一项所要求的方法，其中疏水性溶剂包括长链脂肪酸、中等链长的醇、支化长链醇、单酸甘油酯、二酸甘油酯、中等链长的三酸甘油酯或长链三酸甘油酯。17.权利要求5至7或13至16中任一项所要求的方法，其中磷脂包括PC和疏水性溶剂为三酸甘油酯，或者其中磷脂为lyso-PC和疏水性溶剂为油酸。18.权利要求5至7或13至16中任一项所要求的方法，其中，将亲水性物种与两亲物在亲水性溶剂中的分散体混合并除去亲水性溶剂，形成亲水性物种/两亲物排列。19.权利要求18所要求的方法，其中，所述亲水性溶剂是水。20.权利要求18或19所要求的方法，其中，两亲物的集合体包括胶束、单层囊泡、多层囊泡或管形结构如螺旋状圆柱形、六方形、立方形或髓磷脂型结构。21.权利要求18至20中任一项所要求的方法，其中亲水性溶剂通过冷冻干燥而除去。22.权利要求5至7或13至17中任一项所要求的方法，其中，将亲水性物种和两亲物共加溶于共同的溶剂中，并随后除去该溶剂，形成亲水性物种/两亲物排列。23.权利要求5至7或13至17中任一项所要求的方法，其中，将两亲物在疏水性溶剂中的溶液与亲水性物种在亲水性溶剂中的溶液乳化，形成乳液，并除去疏水性溶剂，形成亲水性物种/两亲物排列。24.权利要求22或23的方法，其中两亲物与亲水性物种的重量比为约1∶1至50∶1。25.权利要求23所要求的方法，其中，所述乳液为水在油中的乳液。26.权利要求23或24所要求的方法，其中疏水性溶剂为低沸点有机醚，如乙醚。27.权利要求5至7或13至25中任一项所要求的方法可得到的亲水性物种于疏水性溶剂中的单相疏水性制剂。28.包含亲水相和疏水相的两相组合物，其中疏水相包含权利要求4或26所要求的制剂。29.权利要求27所要求的组合物，其中疏水相分散于连续的亲水相中。30.权利要求27或28所要求的组合物，它为乳液。31.权利要求4或12所要求的制剂，权利要求27所要求的制剂或权利要求28至30中任一项所要求的组合物在亲水性物种的口服中的用途。全文摘要本发明提供了一种降低疏水相与疏水相分散于其中的亲水相之间直接相互作用的试剂的用途。也提供了将该试剂加入其中的含有亲水性物种的单相疏水性制剂的制备方法。文档编号C09K3/00GK1169114SQ95196708公开日1997年12月31日申请日期1995年12月8日优先权日1994年12月9日发明者R·R·C·纽,C·J·克尔贝申请人:科特克斯有限公司