专利名称：多糖及其保健品去色素的新方法
技术领域：
本发明涉及一种去色素的方法，更具体地说是多糖及其保健品的去色素方法。
以植物和真菌类为原料提取的多糖粗品或作为保健品的多糖，常因含有酚型化合物，使之有较深的色泽，用碱提取获得的多糖则颜色更深。这些色素的存在，不但影响多糖作为保健品或药物时的外观，而且给多糖的进一步分离、纯化和结构鉴定带来极大的困难。目前，主要采用以下三种方法除去多糖粗品(包括保健品多糖)中所含有的色素，然而这三种方法均存在一定的局限性。
1.活性炭吸附脱色。活性炭对多糖具有较强的吸附作用，多糖的损失较大，而且采用这种方法脱色后，过滤起来也相当困难，可以说这种方法对多糖脱色是不合理的。
2.弱碱性树脂脱色，如Duolite A-7，DEAE-纤维素等吸附多糖中的色素。这种方法主要应用于除去多糖粗品中游离的色素，如果色素与多糖结合，多糖也被树脂同时吸附，用水难以洗脱下来。另外，对酸性多糖不宜采用该方法脱色。
3.双氧水氧化脱色。采用这种方法对除去与多糖结合色素具有一定的效果，然而，在脱色过程中，虽然严格控制脱色的条件，如温度、时间、PH值等，但还会引起多糖的部分降解。
以上三种方法应用于医药工业中多糖粗品的脱色均存在很多缺陷。
本发明目的是在于多糖具有多方面的功能，如多糖作为广谱免疫促进剂用以治疗与机体免疫系统有关疾病；多糖的糖链分子医学中具有凝性作用；它在医药上又是一种良好的佐剂。而多糖中的色素存在直接影响多糖作为药物或保健品的外观，寻找一种应用新的脱色方法去除多糖粗品中的色素并减少对多糖、保健品本身的影响具有重要的实用意义。
本发明另一目的是目前采用的脱多糖中的色素常对多糖的分离、纯化和结构鉴定工作产生干扰，寻找一种新的脱色素方法，它既可脱去多糖中的色素而且不破坏多糖的结构。
本发明的技术方案是这样实施的一种多糖、保健品去色素的方法，其特征在于由反胶束溶液与多糖或保健品粗品预处理液在1∶1～1∶8(V/V)的比例下剧烈混合3分钟，静置分层，下层液为脱色后的多糖或保健品样品液；反胶束溶液由CTAB浓度10-250mM、正己醇5％-35％(V/V)、异辛烷65％-95％(V/V)组成；多糖或保健品的预处理为原料经95％乙醇脱脂，残渣用沸水提取，提取液浓缩后经乙醇沉淀得多糖粗提物，粗提物按比例溶于水中，沸水浴加热30分钟，振荡溶解，3000rpm离心3分钟，上清液加入一定量NaCl，得多糖、保健品预处理液；1.反胶束溶液，多糖或保健品粗品预处理液的比例为1∶1～1∶8(V/V)。
首先制备反胶束溶液，它由十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、正己醇、异辛烷组成。
它们的浓度和含量如下CTAB的浓度为10-250mM正己醇的含量为5％-35％(V/V)异辛烷的含量为65％-95％(V/V)上述按比例组成备用。
2.对多糖粗品预处理液的制备植物和真菌类原料，经95％乙醇脱脂，残渣用沸水提取，提取液浓缩后经乙醇沉淀得多糖粗提物。称取2mg-6mg多糖粗提物于1mL水中，沸水浴加热30分钟，震荡溶解，3000rpm离心3分钟，根据不同性质的多糖上清液加入氯化钠50mM-500mM，即为多糖粗品预处理液。
3.多糖的脱色过程取上述反胶束溶液与多糖粗品预处理液，以1∶1～1∶8(V/V)比例，剧烈混合3分钟，静置分层后，下层水液即为脱色后的多糖样品液。该多糖样品液继续进行分离、纯化，最终获得颜色浅淡的脱色后多糖产品。
多糖回收率的计算糖含量的测定硫酸-苯酚法，100μl待测定的样品液加入0.4mL及2mL硫酸(98％)，振动后显色，测定λ＝490nm时的吸光度A。
标准曲线的制作准确称取2mg葡萄糖并溶于5mL相应盐浓度(与多糖预处理液相同)的水溶液中，分别取0.2mL，0.4mL，0.6mL，0.8mL，1.0mL，稀释至1.0mL，测定λ＝490nm时的吸光度A，以吸光度对相应的葡萄糖的浓度作图，得一元线性回归方程Y＝2.887X，吸光度A小于1.2，均能保持较好的线性关系。
为消除萃取得到的下层多糖溶液中少量的CTAB及正己醇，对糖含量测定所可能造成的影响，以相应盐浓度的水溶液与1～8体积的反胶束溶液混合，静置分层，以下层水溶液配制标准的葡萄糖液，采用上述方法作标准曲线，所得结果在硫酸苯酚比色测定法的误差范围内(＜5％)。
多糖的回收率的计算C1/C2×V1/V2×100％＝＝(A11-A12)/(A21-A22)×V1/V2×100％C1-脱色后的下层多糖水溶液的糖浓度C2-多糖粗品预处理液的糖浓度V1-脱色后的下层多糖水溶液的体积V2-多糖粗品预处理液的体积A11-脱色后的下层多糖水溶液，稀释5倍，加硫酸-苯酚显色后的吸光度A12-脱色后的下层多糖水溶液，稀释5倍，加硫酸及0.2mL盐水，测定的吸光度A21-多糖粗品预处理液，稀释5倍，加硫酸-苯酚显色后的吸光度
A22-多糖粗品预处理液，稀释5倍，加硫酸及0.2mL盐水，测定的吸光度本发明具有如下优点1.采用本法脱色效果较好，对色泽愈深的多糖粗品，脱色效果更佳，而且对未经脱蛋白质处理的多糖粗品具有同样的脱色效果。
2.采用本法多糖的回收率较高，在90％以上，对酸性多糖含量较高的粗品回收率也超过80％。
3.采用本法可以一次性除去多糖中的绝大部分色素，无需多次脱色。
下面结合实施例对本发明做详细说明。
实施例首先制备反胶束溶液，它由十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、正己醇、异辛烷组成。
它们的浓度和含量如下CTAB的浓度为10-250mM正己醇的含量为5％-35％(V/V)异辛烷的含量为65％-95％(V/V)上述按比例组成备用。
实施例一 积雪草(中性)多糖粗提物的脱色准确称取32mg积雪草多糖粗提物，加入8mL水，沸水浴30分钟，搅拌溶解，3000rpm离心3分钟，上清液中加入氯化钠(300mM)，得积雪草多糖预处理液，取4mL与1mL反胶束溶液混合3分钟，静置30分钟分层，萃取分离得下层多糖溶液，按照前述方法，测得的结果为A11＝0.570A12＝0.011A21＝0.647A22＝0.013积雪草多糖的回收率为(0.570-0.011)/(0.647-0.013)×4.4/4×100％＝97.4％
实施例二 螺旋藻(肽)多糖粗提物的脱色准确称取32.2mg螺旋藻多糖粗提物(未经脱蛋白质处理)，加入8mL水，沸水浴30分钟，搅拌溶解，3000rpm离心3分钟，上清液中加入氯化钠(100mM)，得螺旋藻多糖预处理液，取8mL与1mL反胶束溶液混合3分钟，静置30分钟分层，萃取分离得下层多糖溶液，按照前述方法，测得的结果为A11＝0.447A12＝0.000A21＝0.543A22＝0.000螺旋藻多糖的回收率为(0.570-0.000)/(0.647-0.000)×4.4/4×100％＝90.6％实施例三 灵芝(中性)多糖粗提物的脱色准确称取17.3mg灵芝多糖粗提物(未经脱蛋白质处理)，加入5mL水，沸水浴30分钟，搅拌溶解，3000rpm离心3分钟，上清液中加入氯化钠(100mM)，得灵芝多糖预处理液，取5mL与1mL反胶束溶液混合3分钟，静置30分钟分层，萃取分离得下层多糖溶液，按照前述方法，测得的结果为A11＝0.236A12＝0.000A21＝0.264A22＝0.000灵芝多糖的回收率为(0.236-0.000)/(0.264-0.000)×4.4/4×100％＝98.3％实施例四 石见穿(酸性)多糖粗提物的脱色准确称取24.6mg石见穿多糖粗提物，加入6mL水，沸水浴30分钟，搅拌溶解，3000rpm离心3分钟，上清液中加入氯化钠(500mM)，得石见穿多糖预处理液，取1mL与1mL反胶束溶液混合3分钟，静置30分钟分层，萃取分离得下层多糖溶液，按照前述方法，测得的结果为A11＝0.236A12＝0.000A21＝0.348A22＝0.000石见穿多糖的回收率为(0.236-0.000)/(0.348-0.000)×4.4/4×100％＝80.87％
权利要求
1.一种多糖、保健品去色素的方法，其特征在于由反胶束溶液与多糖或保健品粗品预处理液在一定的比例下剧烈混合3分钟，静置分层，下层液为脱色后的多糖或保健品样品液。
2.根据权利要求1所述多糖、保健品去色素的方法，其特征在于反胶束溶液由浓度10-250mM CTAB、正己醇5％-35％(V/V)、异辛烷65％-95％(V/V)组成。
3.根据权利要求1所述多糖、保健品去色素的方法，其特征在于多糖或保健品的预处理为原料经95％乙醇脱脂，残渣用沸水提取提取液经乙醇沉淀得多糖粗提物，粗提物按比例溶于水中，沸水浴加热30分钟，振荡溶解，3000rpm离心3分钟，上清液加入50-500mM NaCl，得多糖、保健品预处理液。
4.根据权利要求1所述多糖、保健品去色素的方法，其特征在于反胶束溶液与多糖或保健品粗品预处理液的比例为1∶1～1∶8(V/V)。
全文摘要
本发明提供一种多糖及其保健品的去色素方法,该方法采用反胶束溶液与多糖或保健品粗品预处理液在一定比例下激烈混合,放置分层,下层即为脱色后的多糖或保健品液。
文档编号B01D11/04GK1369510SQ01105320
公开日2002年9月18日 申请日期2001年2月13日 优先权日2001年2月13日
发明者段金友, 方积年 申请人:中国科学院上海药物研究所