一种抗过敏复合多糖组合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种复合多糖组合物，更具体地说，是一种可应用于抗过敏药品和防 治皮肤过敏化妆品中的抗过敏复合多糖组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 人体过敏是一个复杂的过程，主要与机体免疫球蛋白IgE、细胞核因子酉乙蛋白、 白细胞介素_8、肿瘤坏死因子_a及组胺5个方面息息相关，因此在人体常见过敏发生机制 的这5个关键环节上起作用是较为有效、直接、全面的防治过敏途径。而多糖作为一种在植 物中分布很广的活性成分，在抗过敏的应用领域有着独特的优势。
[0003] 对于多糖的抗过敏机理，传统中医学认为主要是通过调节机体免疫功能达到相应 效果。而随着科学技术的发展，多糖的抗过敏机理在分子生物、细胞基因学的研究渐见报 道。如中国专利[公开（公告）号CN103467616A]公开了一种通过提取纯化获得的紫菜多 糖能增加Thl细胞因子IFN-y的基因表达量，降低Th2细胞因子IL-4的基因表达量。中 国现代应用药学[1999,16(2)]报道了麦冬多糖能拮抗乙酰胆碱和组胺混合液刺激引起的 正常豚鼠和卵白蛋白引起的致敏豚鼠的支气管平滑肌收缩、抑制致敏豚鼠哮喘的发生、并 具有较显著的抗小鼠耳异种被动皮肤过敏的作用。中药药理与临床[2014 ;30(3) :86-89] 报道了姬松茸多糖通过抑制肥大细胞脱颗粒和释放组胺可减轻过敏炎症反应的强度。中国 医院药学杂志[2011，31 (18) :1532-1534]报道了桑黄多糖抗过敏作用与抑制肥大细胞脱 颗粒及炎性介子的释放有关。
[0004] 然而，人体过敏是一个复杂的过程。主要与机体免疫球蛋白IgE、细胞核因子酉乙 蛋白、白细胞介素-8、肿瘤坏死因子-a及组胺5个方面息息相关。所以在人体常见过敏 发生机制的5个关键环节上起作用是较为有效、直接、全面的防治过敏途径。但目前研究仅 是以单味药材获得的多糖进行细胞分子水平单方面的抗过敏作用机制研究，尚未有人以黄 芪、合欢皮、甘草为原料组成复合多糖用于多环节抗过敏方面的报道。
[0005] 黄芪、合欢皮、甘草作为常见的抗过敏中药，对它们抗过敏作用的研究大多数只停 留在对其单组分的分离和化学成分鉴定上，但没有尝试将这三种不同结构类型的活性多糖 通过合理复配得到协同增效作用的抗过敏复合多糖，也没有对其活性成分筛选和功效验 证。
[0006]研究表明[ClinicalJournalofChineseMedicine，2012 (4) :4_6.]，黄苗多糖 是黄芪中含量最多、免疫活性最强的一类物质，在多方而发挥免疫增强作用，不仅能增强特 异性免疫，还能增强非特异性免疫，不仅能增强正常机体的免疫功能，还能增强异常机体的 免疫功能。例如黄芪多糖诱导培养获得的树突状细胞对异基因外周血T淋巴细胞的增值具 有明显刺激作用，且随细胞数量的增多而作用增强，呈良好的量效关系，证实黄茂多糖不仅 可以定向诱生脐血单核细胞分化为DC，而且可以促使DC的成熟，特异性激活T细胞，产生细 胞免疫。蒙古黄芪中已发现8种多糖成分：黄芪多糖I、II、III，葡聚糖AG-l，AG-2,杂多糖 AH-UAH-2,和1种水溶性葡聚糖。膜荚黄芪中的总多糖，由葡萄糖、阿拉伯糖、萄搪醛酸、半 乳糖醛酸等组成。
[0007] 甘草多糖的具有重要的生理活性，研究发现它具有抗病毒、免疫调节以及抗肿瘤 的活性。能激活网状内皮系统，具有抗补体活性，直接刺激B淋巴细胞增殖，诱导人体中 IgM，IgG的产生，还能诱生和促诱生干扰素，增强机体的杀伤细胞的活性。甘草多糖的免疫 调节作用主要体现在对小鼠网状内皮系统中单核巨噬细胞系统功能的影响，也可激活静止 小鼠脾淋巴细胞增殖效应以及抗补体活性等。研究甘草多糖抑制肿瘤的抑制，认为甘草多 糖可以单独或者协同化疗药共同作用于肿瘤细胞。组成甘草多糖的单糖一般为阿拉伯糖、 半乳糖、鼠李糖以及葡萄糖，部分酸性多糖还含有半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸，还含有岩藻 糖、木糖、甘露糖等。还有学者从甘草根中分离到了a-l，4_连接的单一葡聚糖。
[0008] 合欢皮具有镇静催眠、抗生育、抗炎、抑制肿瘤和免疫调节等多种生物活性，水煎 剂大鼠灌胃给药可抑制腹膜肥大细胞脱颗粒，可明显抑制抗原（马血清）对大鼠的致敏过 程和抗体产生过程。有学者猜测其抗过敏有效成分为耐热的水溶性物质。同时有研究表明， 合欢皮中的多糖类是细胞免疫的活性成分，具有增强实验小鼠机体红细胞免疫功能。
[0009] 传统的多糖的分离纯化方法通常都包括水提、醇沉、除脂、除蛋白、脱色、柱分离这 些基本步骤。常用的去除多糖中蛋白质的方法有：sevag法、二氣二氯乙烧法、二氯醋酸法， 这些方法的原理是加入有机溶剂使蛋白质变性沉淀而多糖在溶液中保留。这些方法不可避 免会带来溶剂残留。
【发明内容】
[0010] 本发明目的是针对现有技术存在的不足之处，提供一种成分明确、多环节协同增 效的具有抗过敏功效的抗过敏复合多糖组合物。
[0011] 本发明的第二目的是提供一种抗过敏复合多糖组合物的制备方法。
[0012] 本发明的第三目的提供所述抗过敏复合多糖组合物的应用。
[0013] 为解决上述的技术问题，本发明采用如下技术方案：一种抗过敏复合多糖组合物， 由包括以下重量份数组分制成：黄芪10~90、合欢皮10~90、甘草1~50。
[0014] 优选的，所述抗过敏复合多糖组合物，由包括以下重量份数组分制成：黄芪30~ 50、合欢皮10~40、甘草10~30。
[0015] 上述抗过敏复合多糖组合物可以采用常规的醇水煎煮来制备，但制备效率不高和 效果欠佳。
[0016] -种抗过敏复合多糖组合物的制备方法，其包括的步骤如下：
[0017] (1)打粉：将黄芪、合欢皮和甘草粉碎；
[0018] (2)投料：在药粉中加入其重量5~50倍量的水或醇水混合物，搅拌均匀；
[0019] (3)提取：在-0? 1~70MPa、0~25°C条件下提取，收集提取液进行离心分离，收集 离心液；
[0020] (4)分离浓缩：将离心液用微滤膜除去固体颗粒、细菌等杂质，然后用IOODa~ 20000Da通量的超滤膜分级纯化多糖，最后浓缩、干燥。
[0021] 所述（2)步骤中，水的加入量为为药粉重量的20~30倍。水优选纯水。
[0022] 所述（3)步骤中，提取条件为压力为-0? 1~35MPa、提取温度为10~20°C、提取 次数为1次。
[0023] 所述⑷步骤中，微滤膜的孔径规格为0.2 ym~1.0 ym ;超滤膜孔径规格为 1000 Da~lOOOODa。
[0024] 所述醇水混合物优选体积百份数为50~95%的乙醇水溶液。
[0025] 所述⑷步骤中，得到的截留液浓缩到1. 03~1. 08比重。
[0026] 抗过敏复合多糖组合物可以用于制备具有抗过敏功效的化妆品，添加量为1~ 50% (质量百份数）。化妆品的剂型包括霜剂，乳液、水剂、凝胶剂、面膜、涂擦剂和洗剂。
[0027] 抗过敏复合多糖组合物可以用于制备具有抗过敏功效的药物中，添加量为10~ 90%，剂型包括液体制剂（汤剂、糖浆剂、注射液、合剂、酊剂等）、固体制剂（散剂、冲剂、丸 剂、片剂、胶囊剂等）、半固体制剂（内服膏、外用膏、糊剂等）、气体剂型（气雾剂、烟剂等）。
[0028] 本发明把黄芪、甘草、合欢皮多糖合理复配后，通过功效验证实验表明，本发明提 取物能抑制IgE活性表达，阻止组胺的释放，阻断NF-KB的激活，抑制IL-8活性表达，抑制 TNF-a活性表达，具有抗炎，抗过敏、增强机体免疫力的效果。
[0029] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：
[0030] (1)与现有抗过敏中药复方相比，本发明具有明确的抗过敏功效成分，产品质量容 易控制；
[0031] (2)与现有抗过敏西药相比，本发明提取物具有多环节在致敏靶点上起协同增效 作用，无毒副作用、安全性高；
[0032] (3)生产制造过程无有机溶剂接触，无毒害残留；而且制备工艺简单、容易操作， 适合于产业化推广应用。
【附图说明】
[0033] 图1是本发明的制备方法工艺流程简图；
[0034] 图2是本发明提取物对透明质酸酶抑制实验结果的柱状图；
[0035] 图3是分子基因调控表达的RNA电泳图；
[0036] 图4是分子基因调控表达的NFKBp65的扩增曲线；
[0037] 图5是分子基因调控表达的NFKBp65的熔解曲线；
[0038] 图6是分子基因调控表达的GAPDH的扩增曲线；
[0039] 图7是分子基因调控表达的GAPDH的熔解曲线；
[0040] 图8是低温高压差提取器的结构示意图。 具体实施例
[0041] 为了更好地阐述本
【发明内容】
，下面用若干较佳的具体实施例进行说明。
[0042] 发明原理
[0043] 本发明根据中药复方祛邪去因、扶正固本，通过协调脏腑经络机能从而纠正阴阳 偏盛偏衰，使机体恢复到阴平阳秘的正常状态的治疗病原理进行合理组方。黄芪、合欢皮、 甘草三者具有不同结构类型的活性多糖，所以功效上会有所差别，在特定的组合比例情况 下可以达到协同增效作用。这也是指导本发明组方的一个重要原因。
[0044]膜分离工艺是纯物理性的分离，在压力驱动下常温进行分离、浓缩、精制，分离过 程中