化学发光方法，具有背景低、灵敏度高、线性范围宽的优点。
[0053]2)本发明采用磁颗粒技术，具有磁富集功能，增强并放大信号;并能利用磁铁把磁颗粒转移区域(如由包被区-清洗区-检测区)，减少样本基质的影响。
[0054]3)本发明采用微流控芯片技术，把样本混合、反应、分离和检测集成在芯片上，并把反应所需的所有试剂组分集成到芯片上。
[0055]4)本发明操作简便，检测时，只需加入样本，盖上盖子，把芯片放入小型便携配套仪器中即可。
[0056]5)本发明配套仪器是小型便携仪器，仪器只与芯片发生物理接触，芯片内液体不与仪器接触，不会污染仪器而产生交叉干扰。
【附图说明】
[0057]图1为CK-MB定量检测的微流控芯片主体结构示意图，其中I为顶板，2为底板，3为气栗，4为加样口，5为标记抗体存储池，6为过滤区，7为磁颗粒包被区，8为检测区，9为清洗液存储池，10为发光基底液存储池，11为盖子，12为样本填充区，13为样本混合区，14为清洗区，15为废液池，16为液体释放通道，17为发光基底液和清洗液存储池让位孔(于顶板)，18为磁铁滑轨让位孔。
[0058]图2为CK-MB定量检测的完整微流控芯片的结构示意图，其中I为顶板，2为底板，19为双面胶带，20为单面胶带，21为发光基底液和清洗液存储池让位孔(于双面胶带)，22为混合液流入过滤区时的让位孔。
[0059]图3为双发光基底液的微流控芯片底板结构示意图，其中23为发光基底液存储池A，24为发光基底液存储池B，25为预混合通道。
【具体实施方式】
[0060]本发明公开了一种检测全血中肌酸激酶同工酶的磁微粒化学发光微流控芯片，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0061]为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
[0062]实施例1:酶促化学发光测定CK-MB
[0063](一)抗体标记
[0064]取5yg HRP溶解于ImL蒸馏水中，再加入0.2mL0.1M新配Na14溶液，室温避光反应20min后，以ImM pH4.4醋酸钠缓冲液透析纯化溶液。再以0.2M pH9.5碳酸盐缓冲液调节pH至9.0，加入1yg抗CK-MM单抗，室温避光反应2h。加0.ImL新配的4mg/mL NaBH4液，混匀，于4°C反应2h。将上述溶液装入透析袋，以0.15M pH7.4 PBS透析，4°C过夜，得到HRP标记CK-MM抗体。
[0065]向磷酸缓冲液中加入Img磁颗粒(直接为2μπΟ、1yg EDC和15yg NHS溶液和10?30yg抗CK-BB单抗(与HRP标记的抗体不同)溶液，混合均勾并于室温下反应4h，加入Img甘氨酸封闭。以磁铁吸附富集纯化，去除未反应的CK-BB抗体，得到磁颗粒标记CK-BB抗体。
[0066](二)微流控芯片组装
[0067]HRP标记CK-匪抗体溶液中含0.2 %牛血清白蛋白、0.1 %吐温2 O和0.0 2 %Proclin30(^^pH7.4 Tris-HCl缓冲液;磁颗粒标记CK-BB抗体溶液为包含0.5 %牛血清白蛋白、I % 葡萄糖、0.2% 吐温20和0.02%Proclin300的pH7.4 Tris-HCl缓冲液。
[0068]将HRP标抗体溶液放入顶板标记抗体存储池中，密封。将磁标抗体溶液放入底板磁颗粒包被区中，室温干燥。
[0069]清洗液为0.3%牛血清白蛋白、0.2%曲拉通父-100和0.02%卩^(:1111300的pH7.0Tri s-HCl缓冲液。将清洗液注入清洗液存储池。发光基底液分为HRP底物(鲁米诺的双氧水溶液)和碱性增强液(苯衍生物的碱性溶液)，分别注入发光基底液存储池A(23)和发光基底液存储池B(24)中，密封。按图1所示，将滤血膜粘入底板中，将存储池内置入底板。然后按图2所示，以单面胶带和双面胶带，将顶板和底板组装成微流控芯片。装入铝箔袋中，密封4°保存。
[0070](三)样本检测
[0071]用正常人血浆作稀释液，将CK-MB标准品稀释成如下浓度:0pg/ml、500pg/ml、lng/ml、5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、lOOng/ml和200ng/ml。
[0072]将50μ1样本滴入加样口后，盖上盖子。将微流控芯片放入配套仪器(磁铁磁感应强度为6000高斯)中，仪器挤出HRP标记单抗，并使样本和HRP标记单抗混合均匀后注入底板过滤区。样本过滤后，到达微通道，并溶解磁颗粒标记单抗，磁铁加速样本反应，形成HRP标记单抗-CK-MB抗原-磁颗粒标记单抗的三明治结构，然后磁铁收集磁颗粒。水泡释放清洗液，将磁颗粒清洗后，发光基底液释放，仪器检测系统检测发光信号强度。总检测时间15min。每个样本分别用3个微流控芯片测定3次，取平均值，绘制标准曲线。
[0073]将50μ1全血样本滴入加样口，15分钟内仪器检测系统检测发光信号强度，依据标准曲线获得样本中CK-MB浓度。
[0074]检测原理为:当全血加入微流控芯片后，全血先与HRP标记抗体混合，然后经过滤区后，混合了HRP标记抗体的血浆到达微通道，血浆溶解磁标记抗体。当血样中含有CK-MB，则形成HRP标记抗体-CK-MB-磁颗粒标记抗体的三明治结构(双抗体夹心法)。经清洗后，再发光基底液作用下发光，仪器检测系统测试发光信号。依据配套仪器获取的标准曲线，进而分析血样中CK-MB浓度。样本中CK-MB含量越高，则发光信号越强。
[0075]结果表明，其最低检测限为100pg/ml，最低定量限为500pg/ml，定量检测范围为0.1?200ng/ml，线性相关系数R2 >0.99 ；在检测范围内，未出现HOOK效应;且批内与批间重复性均小于10%。可为心梗心衰疾病诊断提供参考。
[0076]实施例2:直接化学发光测定CK-MB
[0077](一)抗体标记
[0078]向磷酸缓冲液中加入适量活化的吖啶酯和10yg抗CK-BB单抗溶液，混合均匀并于室温下反应4h，加入Img甘氨酸封闭。透析后，得到吖啶酯标记CK-BB抗体。
[0079]向Iml 1mM pH7.4磷酸缓冲液中加入Img磁颗粒(直径为Ιμπι)、1yg EDC和15ygNHS溶液和20yg链霉亲和素，混合均匀并于室温下反应4h，加入Img甘氨酸封闭。以磁铁吸附富集，去除未反应的链霉亲和素，得到磁颗粒标记链霉亲和素。
[0080]将1yg抗CK-MM单抗加入5yL0.25mg/mL Sulfo-NHS-LC-b1tin溶液中，反应lh。以超滤离心管纯化，去除未反应的生物素。得到生物素化抗CK-MM抗体。
[0081 ]通过亲和素-生物素间的相互作用，把抗CK-MM抗体连接到磁颗粒表面，得到磁颗粒标记CK-MM抗体。其中亲和素标记的磁颗粒和生物素化的抗体比例为5: 140
[0082](二)微流控芯片组装
[0083]吖啶酯标记CK-BB抗体溶液中含0.1 %牛血清白蛋白、0.05 %吐温20和0.05%Proclin300的pH7.4磷酸缓冲液;磁颗粒标记CK-MM抗体溶液为包含0.2%牛血清白蛋白、0.1%酪蛋白、2%蔗糖,0.2%吐温20、0.I % 曲拉通X-100和0.02%Proclin300的pH7.4磷酸缓冲液。将口丫啶酯标记抗体溶液放入顶板标记抗体存储池中，密封。将磁标抗体溶液放入底板磁颗粒包被区中，室温干燥。
[0084]清洗液为0.3%牛血清白蛋白、0.1 %吐温20、0.2%曲拉通X-100和0.02%Proclin300的pH7.0磷酸盐缓冲液。将清洗液注入清洗液存储池。发光基底液分为包含H2O2溶液和碱性溶液，分别注入发光基底液存储池A(23)和发光基底液存储池B(24)，密封。按图1所示，将滤血膜粘入底板中，将存储池内置入底板。然后按图2所示，以单面胶带和双面胶带，